Aféierung am Phage Display Service

Phage-Display, als molekular Technik baséiert op der genetescher Modifikatioun vun der Phage-DNA, ass zu engem molekular mächtegen Instrument ginn, fir molekular Sonden géint spezifesch Ziler ze generéieren, andeems dës Fragmenter op der Phage-Uewerfläch presentéiert ginn an doduerch Peptid-/Antikörperfragmenter mat spezifesche Bindungseigenschaften aus enger grousser Zuel vu Varianten (Bibliothéiken) ausgewielt ginn.

Alpha Lifetech huet zéng Joer Erfahrung an der Entwécklung vu Phage-Display-Antikörper a kann eise Clienten e professionnelle Konstruktiouns- a Screening-Service fir Antikörperbibliothéiken ubidden. Jee no de Bedierfnesser vun de Clienten kënne mir verschidde Forme vun Antikörperbibliothéiken ubidden, wéi Immunbibliothéiken, nativ Bibliothéiken, synthetesch Bibliothéiken a semi-synthetesch Bibliothéiken. D'Phage-Display-Bibliothéikstechnologie, déi Antikörpergenen mat de Genen vu Phagemantelproteinen wéi M13 fusionéiert, ass déi heefegst Technologie fir d'Virbereedung vu rekombinanten Antikörper a gëtt wäit verbreet an der Entwécklung vun héichspezifeschen Antikörper benotzt.

Alpha Lifetech wäert Alpakaen, Lamaen, Alpakaen an Haien, etc. immuniséieren, sou datt hir Effizienz 10^5 erreecht. Mir schécken de Bericht iwwer den Effizienztest un de Client, fir d'Validitéit an d'Authentizitéit vun den Donnéeën ze garantéieren. Native Bibliothéike hunn d'Virdeeler vun enger gerénger Toxizitéit an enger gerénger Immunogenizitéit. Alpha Lifetech huet eng grouss Zuel vu virgemaachten nativen Antikörperbibliothéike, déi direkt fir den Antikörper-Screening ouni Immuniséierung vun den Déieren benotzt kënne ginn, wouduerch d'Projetzäit verkierzt gëtt, de Fortschrëtt vun der Studie vum Client verbessert gëtt an d'funktionell Integritéit vum Antikörper garantéiert gëtt.

Fig. 1: Prinzip vun der Phag-Affichage

Eist Phage-Display-System

Déi wichtegst Informatiounen iwwer de M13/T4/T7 Phage-Display-System sinn an der Tabell 1 gewisen.

Tabelle 1 Verschidde Phage-Display-Vehikelen an hir Charakteristiken
	M13	T4	T7
Genomgréisst	6407 bp	168895 bp	39937 bp
Protein weisen	pVI, pIII an pVIII	SOC an HOC	gp10B
Gréisst vum Display	>110 kDa ass pIII
Gréisst vum Display
Dicht vum Display
Dicht vum Display
Liewenszyklus	Lysogenie	Lytesch	Lytesch

Alpha Lfetech kann ubidden

Phage Display vereenegt Genotyp a Phenotyp zu engem, andeems Selektivitéit an Amplifikatioun mat staarken Screeningméiglechkeeten kombinéiert ginn. Alpha Lifetech kann eng breet Palette vu Servicer fir d'Entwécklung vu Phage-Display-Antikörper ubidden.
Zu den Haaptservicer gehéieren: VHH-Antikörperbibliothéiksplattform, scFv-Antikörperbibliothéiksplattform, Fab-Antikörperbibliothéiksplattform, Plattform fir d'Konstruktioun vun der Phagebibliothéik, Screeningplattform fir Phagebibliothéiken an Antikörperhumaniséierungsservice an aner Servicer.

Fig. 2: Prozess vum Entwécklungsservice fir Phage-Display

Prozess vun der Entwécklung vun Antikörper fir Phagen

Mir kënnen Déieren mat Proteinen immuniséieren, déi an eisem Laboratoire expriméiert oder vun eise Clienten geliwwert ginn, dorënner verschidde makromolekular Proteinen, Peptiden a Membranproteinen. Duerch ELISA-Effizienztester hunn eis Fuerscher PBMC-Isolatioun an RNA-Extraktioun aus dem Blutt vun Alpakaen mat de beschten Immuniséierungsresultater duerchgefouert. Duerch Reverse-Transkriptioun a Genamplifikatioun hu mir de Gen op pMESC-, pComb3XSS- oder pCANTAB 5E-Phagvektoren konstruéiert. Duerch Elektrotransformatioun vun TG1 E. coli kompetenten Zellen kënnen Phag-Antikörperbibliothéiken mat enger Bibliothéikskapazitéit vu méi wéi 10^9 kritt ginn. Antikörperbibliothéiken mat enger grousser Bibliothéikskapazitéit hunn eng gutt Diversitéit an hëllefen, Antikörper mat Affinitéit ze fannen. Fir d'Qualitéit vun der Antikörperbibliothéik ze garantéieren, wäerte mir d'Bibliothéikskapazitéit an d'Insertiounsquote vun der Bibliothéik charakteriséieren. Mir sequenzéieren d'Bibliothéiken schliisslech, fir eise Clienten déi erfuerderlech 30-50 Sequenzen ze bidden. Dann maache mir e Screening vun der Phage-Display-Bibliothéik. Als éischt gëtt den Antigen op Polypropylen-Mikroplacken immobiliséiert, an duerch 3-5 Screening-Ronnen ginn d'Phage-Antikörper mat schwaacher Bindungsfäegkeet ewechgeholl, an déi spezifesch Klonen, déi un den Antigen binden, bleiwen erhalen. Fir de Phage-Display gëtt d'ELISA-Method benotzt, fir e positiven Klon ze kréien, während fir de Hef-Display d'FACS-Method benotzt gëtt, fir datt d'Zellen rekombinant Antikörperfragmenter mat markéierten Antigenen weisen. Duerch de Screening preparéiere mir Antikörper mat héijer Sensibilitéit, Spezifizitéit an héijer Affinitéit.

Fig. 3 Phage-Display-Antikörper-Syntheseprozess

Service VORTEILER
Virdeeler vum SERVICE

Alpha Lifetech engagéiert sech staark an der Phage-Display-Technologie a kann hire Clienten méi breet a besser Phage-Servicer ubidden.

Zäitperiod an héich Effizienz

Eis Firma kann a kuerzer Zäit no zefriddestellenden Antikörper sichen; mir kënnen verschidden Antikörper-Screening-Experimenter no de Bedierfnesser vun de Clienten duerchféieren.

Héich Produktqualitéit

Eis Firma hëlleft Clienten Antikörper mat héijer Spezifizitéit a Stabilitéit ze preparéieren, wat d'Resultater vun de wëssenschaftleche Fuerschunge erhéicht.

Bitt eng Vielfalt u Choixen

Eis Firma kann Antikörperbibliothéike fir verschidde Spezies (Mënschen, Maus, Kanéngchen, Alpaka, asw.) a kann eng Vielfalt vun Typen (scfv, Fab, VHH, asw.) vun Antikörperbibliothéike bauen.

Grouss Kapazitéit

Eis Antikörperbibliothéik huet eng grouss Kapazitéit vu méi wéi 10^9 Antikörper.

FAQ - Allgemeng Problemer vum Phagedisplay

Froen zum Phage-Display ◢

Q.
Wat ass Phage-Display-Technologie?

A.
D'Phage-Display-Technologie besteet doran, dat friemt Zilgen an déi spezifesch Positioun vum Phage-Kapsidprotein anzesetzen an dat friemt Gen op der Uewerfläch vum Phage ze expriméieren, ouni déi normal Funktioun vum Phage ze beaflossen. No e puer Screening-Ronnen gouf endlech dat Zilprotein mat staarker Spezifizitéit an héijer biologescher Aktivitéit kritt.
Q.
Wat sinn d'Virdeeler vun der Phage-Display-Technologie?

A.
Mat dëser Technologie kënne mat Antikörperbibliothéike mat héijer Kapazitéit generéiert ginn. De Screeningzyklus ass kuerz, de Prozess ass einfach an d'Applikatiounspalette ass extensiv, wat d'Identifikatioun vun optimale Sequenzen fir gezielte Peptiden oder Proteinen erméiglecht. A virusbezunnen Uwendungen kënnen d'Fuerscher Antikörper entdecken, déi sech u kritesch viral Epitope bannen, andeems se grouss Antikörperbibliothéike screenen. Dëse Prozess kann den Entrée, d'Replikatioun oder d'Immunentweichungsmechanismen vu Virussen behënneren an doduerch eng Basis fir d'Krankheetsbehandlung leeën.
Q.
Wat ass den Ënnerscheed tëscht Hybridomtechnologie a Phagtechnologie?

A.
D'Phage-Display-Technologie gëtt méi wäit verbreet benotzt wéi d'Hybridom-Technologie, déi sech op d'Produktioun vun enger klenger Quantitéit un Antikörper géint spezifesch Immunogenen beschränkt. Am Géigesaz dozou kann d'Phage-Display-Technologie eng ganz Antikörperbibliothéik presentéieren, déi aus verschiddenen Immunarten ofgeleet ass.
Q.
Wat sinn d'Uwendungen vun der Phage-Display-Technologie?

A.
D'Phage-Display-Technologie huet eng breet Palette vun Uwendungen, dorënner d'Screening vun de Rezeptoren vu pathogene Mikroorganismen, d'Studie vu Proteininteraktiounen, d'Verfollegung vun der Signaliwwerdroung tëscht Zellen, d'Diagnos vun Déierekrankheeten an d'Entwécklung vun Impfstoffer, ënner anerem.
Q.
Perspektiven vun der Phage-Display-Technologie?

A.
D'Phage-Display-Technologie bitt vill Virdeeler a kann a verschiddene Beräicher ugewannt ginn. Déi primär Erausfuerderung bei der Entwécklung vu rekombinanten Antikörper mat der Phage-Display-Method ass awer d'Komplexitéit an d'Käschten, déi mam Prozess verbonne sinn. Dësen Usaz erfuerdert d'Integratioun vu molekularbiologie-Techniken, dorënner Mutatioun, Klonéierung an Expressioun, zesumme mat immunologeschen, biochemeschen a biophysikaleschen Analysen, fir déi gewënscht Antikörper z'identifizéieren an ze charakteriséieren.

Froen iwwer Antigenen ◢

Q.
Wat sinn d'Methoden vun der Antigenpresentatioun?

A.
Antigenpresentatioun ass e ganz wichtege Link. D'Methode vun der Antigenpresentatioun ëmfaassen haaptsächlech direkt beschichtete Antigenpresentatioun, indirekt beschichtete Antigenpresentatioun, Antigenpresentatioun duerch Ganzzellscreening, Antigenpresentatioun duerch Liposomen, Nano-Phospholipid-Scheiwen a VLPs.
Q.
Wat sinn d'Ënnerscheeder tëscht de verschiddenen Aarte vun Antigenpresentatioun?

A.
Déi direkt Beschichtungsmethod ass relativ einfach, awer d'Antigenkonformatioun ass einfach z'änneren, an déi indirekt Beschichtungsoperatioun ass komplizéiert, awer si kann d'Antigenkonformatioun erhalen an d'Presentatiounseffizienz verbesseren. Zellscreening kann déi real Szen in vivo simuléieren, awer et gëtt e Problem vun der net spezifescher Bindung. Nano-Phospholipid-Scheif huet eng kleng Gréisst, eng héich Liwwerungseffizienz a gutt Stabilitéit; VLPs ginn mat Antigen fusionéiert oder mat Antigen gewéckelt, wat eng héich Immunogenizitéit a gutt Sécherheet huet, a kann eng staark Immunantwort ausléisen.
Q.
Wat ass den Afloss vun der Antigenkonzentratioun op d'Screeningresultater vun der Phage-Display-Technologie?

A.
Wann d'Konzentratioun ze niddreg ass, geet d'Wahrscheinlechkeet vun enger Bindung mam Phag erof, wat zu enger reduzéierter Screening-Effizienz féiert. Am Géigendeel kann eng exzessiv héich Konzentratioun d'Wahrscheinlechkeet vun enger net spezifescher Bindung erhéijen, den Hannergrondsignal erhéijen an d'Identifikatioun vu positiven Klonen behënneren.
Q.
Wéi kënne mir sécher stellen, datt den Antigen seng natierlech Konformatioun während dem Screeningprozess behält?

A.
Eng mëll Fixéierungsmethod kann ugewannt ginn, fir héich Temperaturen, staark Säure an Alkali ze vermeiden. Eng indirekt Beschichtungsmethod an de Biotin-Streptavidin-System goufen benotzt, fir de Schued un der Antigenstruktur ze reduzéieren. Wann den Antigen e Membranprotein ass, kann en op der Uewerfläch vun intakten Zellen ugewise ginn oder benotzt ginn, fir d'Membranëmfeld ze simuléieren, wéi z. B. eng Nano-Disk, fir seng natierlech Membranproteinkonformatioun z'erhalen.
Q.
Wéi kann een d'Bindungsspezifizitéit vun Antikörper, déi mat Phage-Display-Technologie op Antigenen gescreent ginn, verifizéieren?

A.
Nieft Routineexperimenter wéi ELISA, Western Blotting (WB) an Immunofluoreszenz (IF), kënnen d'Detektiounstechnike fir Surface Plasmon Resonance (SPR) an Bio-Layer Interferometrie (BLI) agesat ginn, fir d'Bindungs- an Dissoziatiounsprozesser vun Antikörper an Antigenen a Echtzäit ze iwwerwaachen, wat d'Bestimmung vun Affinitéits- a kineetesche Parameteren erméiglecht.

Froen zum Immunsystem ◢

Q.
Wat sinn déi allgemeng Immunreaktiounen vun Déieren an der Phage-Display-Technologie?

A.
Phage-Display kann benotzt ginn, fir monoklonal Antikörper mat héijer Affinitéit fir eng breet Palette vun Antikörper-produzéierenden Aarten ze generéieren, dorënner, awer net limitéiert op, Mënschen, Mais, Ratten, Kanéngercher, Hënn, Kamelen, Alpakaen, Kéi, Hënn, Schof, Afen an Haien.
Q.
Wat sinn d'Charakteristiken an d'uwendbar Szenarie vun Antikörperbibliothéiken, déi aus verschiddenen Déierenaarten an der Phage-Display-Technologie ofgeleet sinn?

A.
D'Konstruktiounstechnologie vu Maus-Antikörperbibliothéike ass gutt etabléiert, käschtegënschteg an huet eng kuerz experimentell Dauer, wat se fir virleefeg Antikörper-Screening a Grondlagefuerschung gëeegent mécht. Kanéngchen-Antikörper weisen eng staark Affinitéit a Spezifizitéit op, mat engem méi breede Epitop-Erkennungsberäich am Verglach mat Maus-Antikörper. Mënschlech Antikörper kënnen direkt aus mënschlechen Antikörperbibliothéike gewonnen ginn, wouduerch potenziell Immunreaktiounen vermeit ginn, déi optriede kënnen, wann heterolog Antikörper dem mënschleche Kierper verabreicht ginn. Dësen Usaz ass vu bedeitende Wäert an der Medikamentenfuerschung an -entwécklung, besonnesch bei der Schafung vun therapeuteschen Antikörper.
Q.
Wat ass dat allgemengt Déierimmunogen, dat an der Phage-Display-Technologie benotzt gëtt?

A.
Déierimmunogene ginn allgemeng a Proteinantigen, Polypeptidantigen, Nukleinsäureantigen a Pathogen-verwandt Antigen opgedeelt, zu deem zum Pathogen-verwandten Antigen Virusantigen (komplett Viruspartikel, Virusprotein, net-strukturellt Virusprotein, asw.), bakteriellt Antigen (komplett bakteriellt Extrakt, Zellwandkomponent, sekretéiert Protein, Toxin, asw.) a Parasitantigen gehéieren.
Q.
Wéi kënne mir d'Fro vun der Immuntoleranz bei Déieren während der Immunantwort adresséieren?

A.
Immunogenen upassen andeems Immunantigenen duerch rekombinant Proteinen ersat ginn an d'Partikelen vu Feierläschvirussen duerch d'Strukturproteine vu Virussen ersat ginn. Den experimentellen Design upassen an d'Immundoséierung modifizéieren.
Q.
Wéi kann d'Immunogenizitéit vun Immunogenen an der Phage-Display-Technologie verbessert ginn?

A.
D'Immunogenizitéit kann duerch d'Kopplung vun Antigenen mat Trägerproteinen, wéi Rinderseralbumin. Zousätzlech kënnen Immunadjuvantien, dorënner Freund-Adjuvant an Aluminiumadjuvant, benotzt ginn, fir d'Verbleibszäit in vivo ze verlängeren an d'Aktivéierung a Proliferatioun vun Immunzellen ze stimuléieren, wouduerch d'Immunogenizitéit verbessert gëtt.

Froen zum Bau vun der Bibliothéik ◢

Q.
Wat ass eng Phage-Antikörperbibliothéik?

A.
Eng Phag-Antikörperbibliothéik ass eng Sammlung vu verschiddene Phag-Antikörper, déi duerch d'Zesummesetzung vun engem komplette Set vu Genen aus variabler Regioun aus Antikörper a Phagvektoren entstanen ass an op den Uewerfläche vu Phagen expriméiert gëtt. Dëse Prozess féiert zu der Bildung vun enger Phag-Antikörperbibliothéik.
Q.
Prozess vum Opbau vun enger Phage-Antikörperbibliothéik

A.
De generelle Prozess vum Phage-Display ëmfaasst verschidde Schlësselschrëtt: d'Extraktioun vun periphere Bluttmononuklearzellen (PBMC) aus immuniséierten Déieren, d'Isolatioun vun der totaler RNA an d'Transkriptioun an komplementär DNA (cDNA), d'Amplifikatioun vum Zilgen mat Hëllef vun der Polymerasekettenreaktioun (PCR) Technologie, d'Klonéierung vum Zilgen an e Phagevektor an d'Transformatioun vum Vektor an eng Wirtszell fir d'Expressioun. Dëse Prozess féiert zum Bau vun enger Phage-Display-Bibliothéik, déi séier héichaffin Antikörper identifizéiere kann. Duerno kann dës Bibliothéik als wäertvoll Ressource fir d'Entwécklung vun Impfungen, therapeutesche Medikamenter an diagnostesche Reagenzien déngen.
Q.
Wat sinn déi wichtegst Punkte fir de Bau vun enger qualitativ héichwäerteger Bibliothéik?

A.

Sécherstellen, datt déi total Zuel vun de PBMC ausräicht. Sécherstellen, datt d'Qualitéit vun der RNA ouni Degradatioun ass.

Fir déi total Zuel vun Transformanten ze garantéieren, ass d'Bibliothéikskapazitéit am Allgemengen erfuerderlech, datt se 10 bis 100 Mol sou grouss ass wéi déi theoretesch Diversitéit.
Q.
Wat sinn d'Klassifikatioune vun der Phage-Antikörperbibliothéik?

A.
Jee no der Quell vun der Antikörperbibliothéik kënnen d'Phag-Antikörperbibliothéiken an Immun-Phag-Antikörperbibliothéiken an nativ Phag-Antikörperbibliothéiken agedeelt ginn. Den Haaptunterschied tëscht dësen zwou Zorten läit doran, ob d'Déieren geimpft goufen. Zousätzlech kënnen nativ Antikörperbibliothéiken duerch Semi-Synthese oder Synthese generéiert ginn.
Q.
Wéi kann een d'Qualitéit vun enger Phage-Antikörperbibliothéik evaluéieren?

A.
Et ginn zwou Haaptindizéier fir d'Qualitéit vun enger Antikörperbibliothéik ze evaluéieren: Späicherkapazitéit an Diversitéit. Eng grouss Späicherkapazitéit, kombinéiert mat héijer Diversitéit, garantéiert en effektive Screening vun Antikörper mat héijer Affinitéit a Spezifizitéit.

Froen zur Bibliothéiksscreening ◢

Q.
Wéi ass de Prozess fir eng Phage-Antikörperbibliothéik ze screenen?

A.
Am Prozess vun der biologescher Elutriatioun gëtt d'Displaybibliothéik mat fixen Ziler inkubéiert an dann grëndlech gewäsch fir net-reaktiv Phagen ze entfernen. Konjugater ginn typescherweis mat enger sauer oder héichsalzer Léisung eluéiert an duerno a passenden Wirtszellen fir d'Anreicherung amplifizéiert. No 3 bis 5 Screening-Ronnen ginn Antikörper mat héijer Affinitéit kritt.
Q.
Wéi eng Methode gi fir d'Screening vu Phage-Antikörperbibliothéike benotzt?

A.
Phage-Screening-Methoden ëmfaassen haaptsächlech Festphas-Paning, Flëssegkeetsphas-Screening a Zell-baséiert Screening. D'Auswiel vun enger passender Screening-Method soll d'Charakteristike vun den Zilmolekülen, d'Ziler vum Screening-Prozess an d'Laborëmfeld berécksiichtegen.
Q.
Wat sinn déi positiv an negativ Screeninger vu Phagen?

A.
Positivt Screening ass déi fundamentalst Method fir Phage-Antikörper ze screenen, déi un Zilproteine binden. Negativt Screening déngt dozou, onspezifesch Antikörper ze eliminéieren. Wärend dem Screeningprozess vu Phage-Antikörper kënnen onspezifesch Antikörper identifizéiert ginn duerch Interferenz vum Zil-Antigen-Label, Materialien oder aner Antigenen mat strukturellen Ähnlechkeeten mam Zil-Antigen. An esou Fäll kann negativt Screening d'Effizienz vum Screeningprozess verbesseren.
Q.
Wéi kann een e Screening vun netspezifeschen Antikörper vermeiden?

A.

Antigenen, déi mat verschiddenen Zorte vu Marker markéiert sinn, kënne fir den initialen Screening prioritär behandelt ginn, oder en negativen Screening kann duerchgefouert ginn, fir den Undeel vun netspezifeschen Antikörper ze reduzéieren.

Dir kënnt déi entspriechend Dichtungsflëssegkeet ersetzen oder alternativ aner Dichtungsflëssegkeeten benotzen, fir dës Situatioun ze vermeiden. Wann den Antikörper, deen d'Hannergrondzelllinn erkennt (CHO oder HEK293), gescreent gëtt, kënnt Dir aner Hannergrondzelllinnen fir Screening- oder negativ Screeningzwecker ersetzen.
Q.
Wéi kann een déi kritt Antikörper verifizéieren an analyséieren?

A.
D'Methode fir d'Antikörperverifizéierung ëmfaassen typescherweis ELISA, Western Blotting (WB), Flowcytometrie, Immunoprezipitatioun (IP), Immunofluoreszenz (IF), Immunhistochemie a verschidden aner experimentell Techniken. Alpha Lifetech huet extensiv Erfahrung an der Antikörperdetektioun an huet en professionellt Experimentteam, dat d'Effektivitéit vun den Antikörper an de spéideren Experimenter garantéiert.

Wann Dir Froen hutt, kënnt Dir eis gären zu all Moment kontaktéieren.

Leave Your Message

Ausgewielte Service

Plattform fir d'Entdeckung vun Antikörper