Wat ass Antibody Engineering?

Mat der Hëllef vun Antikörpertechnik war et méiglech d'molekulare Gréisst, d'Pharmakokinetik, d'Immunogenizitéit, d'Verbindungsaffinitéit, d'Spezifizitéit an d'Effektfunktioun vun Antikörper z'änneren. No der Synthetiséierung vun Antikörper mécht déi spezifesch Bindung vun Antikörper se héich wäertvoll an der klinescher Diagnostik a Behandlung. Duerch Antikörpertechnik kënne se d'Bedierfnesser vum Medikament an der diagnostescher fréizäiteg Entwécklung treffen.

Den Zweck vun der Antikörpertechnik ass fir héich spezifesch, stabil Funktiounen ze designen an ze produzéieren déi natierlech Antikörper net erreechen kënnen, déi de Grondlag fir d'Produktioun vun therapeuteschen Antikörper leeën.

Alpha Lifetech, mat senger extensiv Projekterfahrung an der Antikörpertechnik, kann personaliséiert monoklonal a polyklonal Antikörperservicer fir verschidde Spezies ubidden, souwéi Phage Display Antikörperbibliothéik Konstruktioun a Screening Servicer. Alpha Lifetech kann Clienten mat Qualitéit biosimilar Antikörper a rekombinant Protein Produkter, souwéi entspriechend Servicer ubidden, fir effizient, héich spezifesch a stabil Antikörper ze produzéieren. Andeems Dir iwwergräifend Antikörper, Proteinplattformen a Phage Display Systemer benotzt, liwwere mir Servicer déi den Upstream an Downstream vun der Antikörperproduktioun ofdecken, dorënner technesch Servicer wéi Antikörper Humaniséierung, Antikörperreinigung, Antikörper Sequenzéierung an Antikörpervalidatioun.

D'Pionéierstadium vun der Antikörpertechnik ass mat zwou Technologien verbonnen:

- Rekombinant DNA Technologie

--Hybridoma Technologie

Déi séier Entwécklung vun Antikörpertechnik ass mat dräi wichtegen Technologien verbonnen:

-Gene Klonen Technologie a Polymerase Kettenreaktioun

--Protein Ausdrock: Rekombinant Proteine ​​ginn duerch Ausdrocksystemer wéi Hef, Staang-förmleche Viren a Planzen produzéiert

- Computer ënnerstëtzt strukturell Design

Déi éischt Generatioun vun Antikörper gouf humaniséiert fir d'Produktioun vu chimeresche Antikörper, wou d'Variabel Regioun vu Maus monoklonalen Antikörper mat der konstanter Regioun vu mënschlechen IgG Moleküle verbonne war. D'Antigen bindend Regioun (CDR) vun der zweeter Generatioun Maus monoclonal Antikörper gouf a mënschlecht IgG transplantéiert. Ausser fir d'CDR-Regioun, sinn all aner Antikörper bal mënschlech Antikörper, an Efforte goufe gemaach fir d'Induktioun vun der mënschlecher Anti-Maus-Antikörper (HAMA) Äntwerten ze vermeiden wann d'Maus-Klon-Antikörper fir mënschlech Behandlung benotzt gëtt.

 

Fir eng Phage Display Bibliothéik ze konstruéieren, ass den éischte Schrëtt d'Gen ze kréien, déi Antikörper kodéieren, déi aus B Zellen vun immuniséierter Déieren isoléiert kënne ginn (Immunbibliothéikskonstruktioun), direkt aus net immuniséierter Déieren extrahéiert (natierlech Bibliothéikskonstruktioun), oder souguer in vitro mat Antikörper Genfragmenter versammelt (synthetesch Bibliothéik Konstruktioun). Duerno ginn d'Genen duerch PCR verstäerkt, a Plasmiden agebaut an a gëeegent Hostsystemer ausgedréckt (Heef Ausdrock (normalerweis Pichia pastoris), prokaryotesch Ausdrock (normalerweis E. coli), Mamendéieren Zell Ausdrock, Planz Zell Ausdrock, an Insekt Zell Ausdrock infizéiert mat Staang-gebuerene Viren. Déi heefegst ass den E. coli Ausdrock System, deen eng spezifesch kodéierend Antikörper Sequenz op der Phage integréiert an ee vun de Phage Shell Proteinen (pIII oder pVIII) codéiert. D'Gen Fusioun vun, An op der Uewerfläch vun bacteriophages ugewisen. De Kär vun dëser Technologie ass eng Phage-Displaybibliothéik ze konstruéieren, déi de Virdeel iwwer natierleche Bibliothéiken huet datt et spezifesch Bindung kann hunn. Duerno ginn Antikörper mat Antigen Spezifizitéit duerch e biologesche Selektiounsprozess gepréift, Zil-Antigene si fixéiert, onbunde Phasen ginn ëmmer erëm gewascht, a gebonnen Phasen gi fir weider Beräicherung ewechgewäsch. No dräi oder méi Ronnen vun der Widderhuelung ginn héich Spezifizitéit an héich Affinitéit Antikörper isoléiert.

Fig 3: Antikörperbibliothéik Konstruktioun a Screening

Rekombinant DNA Technologie ka benotzt ginn fir Antikörperfragmenter ze generéieren. Fab-Antikörper kënnen am Ufank nëmmen duerch Magenprotease hydrolyséiert ginn fir (Fab ') 2 Fragmenter ze produzéieren, déi dann duerch Papain verdaut ginn fir individuell Fab-Fragmenter ze generéieren. De Fv-Fragment besteet aus VH a VL, déi schlecht Stabilitéit hunn wéinst der Fehlen vun Disulfidbindungen. Dofir sinn VH a VL matenee verbonne mat engem kuerze Peptid vu 15-20 Aminosäuren fir en eenzegt Kette variabel Fragment (scFv) Antikörper mat engem Molekulargewiicht vu ongeféier 25KDa ze bilden.

D'Studie vun der Antikörperstruktur bei Camelidae (Camel, LIama, an Alpaca) huet opgekläert datt Antikörper nëmme schwéier Ketten a keng liicht Ketten hunn, dofir gi se schwéier Kette Antikörper genannt (hcAb). D'Variabel Domain vu schwéiere Kette Antikörper gëtt Single Domain Antikörper oder Nanobodies oder VHH genannt, mat enger Gréisst vun 12-15 kDa. Als Monomeren hu se keng Disulfidbindungen a si ganz stabil, mat enger ganz héijer Affinitéit fir Antigene.

Fig 5: Heavy Chain Antibody a VHH / Nanobody

Zellfräi Ausdrock benotzt den Ausdrock vun natierlechen oder syntheteschen DNA fir in vitro Proteinsynthese z'erreechen, typesch mam E. coli Ausdrock System. Et produzéiert Proteine ​​séier a vermeit d'metabolesch an zytotoxesch Belaaschtung op Zellen wann se grouss Quantitéite vu rekombinante Proteinen in vivo produzéieren. Et kann och Proteine ​​​​produzéieren déi schwéier ze synthetiséieren, sou wéi déi déi schwéier ze änneren no Iwwersetzung oder Membranproteine ​​​​synthetiséieren.