ການບໍລິການເຕີບໃຫຍ່ຂອງພູມຕ້ານທານ

ບໍລິສັດ ອັລຟາ ໄລຟ໌ເທັກສາມາດສະເໜີການບໍລິການການເຕີບໂຕຂອງຄວາມຜູກພັນຂອງພູມຕ້ານທານໂດຍການໃຊ້ເຕັກໂນໂລຊີການກາຍພັນ ແລະ ການຄັດເລືອກ. ໂດຍປົກກະຕິແລ້ວພວກເຮົາໃຊ້ scFv ເປັນຮູບແບບພູມຕ້ານທານໃນຂະບວນການຂອງການບໍລິການການເຕີບໂຕຂອງຄວາມຜູກພັນ ແລະ ລະບົບ phagemid ສະແດງ monovalent ເຊິ່ງໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຜົນກະທົບຂອງຄວາມຢາກໃນລະຫວ່າງການກວດຄັດກອງການຜູກມັດຂອງແອນຕິເຈນ. ທີມງານມືອາຊີບຂອງພວກເຮົາສາມາດໃຫ້ບໍລິການການເຕີບໂຕຂອງຄວາມຜູກພັນສໍາລັບພູມຕ້ານທານໂດເມນດຽວໄດ້ເຊັ່ນກັນ.

ບໍລິສັດ ອັລຟາ ໄລຟ໌ເທັກມີຄວາມພູມໃຈທີ່ຈະສະເໜີບໍລິການທີ່ຄົບວົງຈອນເພື່ອຕອບສະໜອງຄວາມຕ້ອງການທີ່ຫຼາກຫຼາຍຂອງລູກຄ້າທົ່ວໂລກ. ເປົ້າໝາຍຂອງພວກເຮົາແມ່ນເພື່ອເຂົ້າໃຈ ແລະ ຕອບສະໜອງຄວາມຕ້ອງການຂອງລູກຄ້າທີ່ແຕກຕ່າງກັນ ແລະ ເພື່ອຊ່ວຍເຫຼືອບັນຫາຕ່າງໆທີ່ອາດຈະເກີດຂຶ້ນ ແລະ ເກີດຂຶ້ນໃໝ່ໃນວຽກງານຄົ້ນຄວ້າ.

ການເຕີບໂຕຂອງ Affinity ແມ່ນຫຍັງ?

ການເຕີບໂຕຂອງຄວາມສຳພັນແມ່ນຂະບວນການທີ່ພູມຕ້ານທານຜ່ານການກາຍພັນ ແລະ ການຄັດເລືອກຊ້ຳໆເພື່ອເພີ່ມຄວາມສຳພັນຂອງພວກມັນສຳລັບແອນຕິເຈນສະເພາະ. ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນເກີດຂຶ້ນຢູ່ໃນສູນກາງເຊື້ອພັນຂອງອະໄວຍະວະ lymphoid ທີສອງ, ຈຸລັງ B ມີການກາຍພັນທາງຮ່າງກາຍ ແລະ ການຄັດເລືອກພາຍໃຕ້ອິດທິພົນຂອງຈຸລັງ T ແລະ ຈຸລັງ dendritic follicular.
ໃນລະຫວ່າງຂະບວນການເຕີບໃຫຍ່ເຕັມທີ່ຂອງຄວາມຜູກພັນ, ຈຸລັງ B ທີ່ມີຕົວຮັບອິມມູໂນໂກຼບູລິນພື້ນຜິວທີ່ມີຄວາມຜູກພັນຕ່ຳຈະຖືກກະຕຸ້ນໂດຍການພົບແອນຕິເຈນ ແລະ ຜ່ານການຂະຫຍາຍຕົວ ແລະ ການຈຳແນກ. ຜ່ານການເຕີບໂຕເຕັມທີ່ຂອງຄວາມຜູກພັນໄຮເປີມິວເຕຊັນໂຊມາຕິກ, ການທົດແທນນິວຄລີໂອໄທດ໌ແບບສຸ່ມເກີດຂຶ້ນໃນພື້ນທີ່ທີ່ປ່ຽນແປງໄດ້ຂອງຍີນອິມມູໂນໂກຼບູລິນ, ເຊິ່ງນຳໄປສູ່ການຜະລິດຕົວແປຂອງພູມຕ້ານທານຕ່າງໆ. ຫຼັງຈາກການກາຍພັນໄຮເປີມິວເຕຊັນໂຊມາຕິກ, ການຄັດເລືອກທີ່ຂັບເຄື່ອນດ້ວຍແອນຕິເຈນແມ່ນປະຕິບັດໃນຈຸລັງ B ທີ່ມີຕົວຮັບອິມມູໂນໂກຼບູລິນທີ່ກາຍພັນ. ຈຸລັງ B ທີ່ຜະລິດແອນຕິບໍດີທີ່ມີຄວາມຜູກພັນແອນຕິເຈນເພີ່ມຂຶ້ນຈະຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ຢ່າງເໝາະສົມ ແລະ ອະນຸຍາດໃຫ້ແຜ່ຂະຫຍາຍ, ໃນຂະນະທີ່ຈຸລັງ B ທີ່ມີຄວາມຜູກພັນຫຼຸດລົງ ຫຼື ບໍ່ປ່ຽນແປງຈະຜ່ານການຕາຍຂອງຈຸລັງ. ຂະບວນການກາຍພັນ ແລະ ການຄັດເລືອກຊ້ຳໆນີ້ນຳໄປສູ່ການຜະລິດໂຄນຈຸລັງ B, ຜະລິດແອນຕິບໍດີທີ່ມີຄວາມຜູກພັນທີ່ສູງຂຶ້ນເທື່ອລະກ້າວສຳລັບແອນຕິເຈນ.

ການບໍລິການເຕີບໃຫຍ່ຂອງພູມຕ້ານທານ

ຂໍ້ໄດ້ປຽບຕົ້ນຕໍຂອງວິທີການທີ່ອີງໃສ່ PCR ແມ່ນການກາຍພັນແມ່ນແນໃສ່ຊິ້ນສ່ວນທີ່ຖືກຂະຫຍາຍຢ່າງຊັດເຈນ; ອັດຕາຄວາມຜິດພາດແມ່ນງ່າຍຕໍ່ການຄວບຄຸມ ແລະ ວິທີການແມ່ນໄວ ແລະ ງ່າຍຕໍ່ການຕັ້ງຄ່າ ແລະ ບໍ່ໄດ້ໃຊ້ສານເຄມີອັນຕະລາຍ. ເປັນທີ່ຮູ້ກັນດີວ່າ Taq DNA polymerase ຊໍ້າຊ້ອນ DNA ດ້ວຍຄວາມແນ່ນອນຕ່ຳ, ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນຍ້ອນບໍ່ມີກິດຈະກຳການກວດສອບຄວາມຖືກຕ້ອງ 3' ຫາ 5'.ບໍລິສັດ Alpha Lifetechແພລດຟອມວິສະວະກຳພູມຕ້ານທານນຳໃຊ້ວິທີການ PCR ທີ່ມີຄວາມຜິດພາດໃນການກາຍພັນສ່ວນໃຫຍ່ໃນພາກພື້ນ CDR ໃນລະຫວ່າງການສ້າງຫ້ອງສະໝຸດຍ່ອຍ. ແລະເລື້ອຍໆພວກເຮົາສ້າງການກາຍພັນຢູ່ໃນຕຳແໜ່ງແບບສຸ່ມຢ່າງສົມບູນໃນທົ່ວຊິ້ນສ່ວນ VH ແລະ VL ທັງໝົດ, ເພື່ອເພີ່ມຄວາມຫຼາກຫຼາຍທາງພັນທຸກໍາຂອງຫ້ອງສະໝຸດຍ່ອຍ. ຫຼັງຈາກການກໍ່ສ້າງຫ້ອງສະໝຸດ gene ພູມຕ້ານທານທີ່ກາຍພັນໂດຍ PCR ທີ່ມີຄວາມຜິດພາດ, ການເລືອກຕົວແປທີ່ມີຄວາມຜູກພັນສູງ (ຄວາມຜູກພັນຂອງພູມຕ້ານທານ scFv ສາມາດບັນລຸ 10^8 - 10^10 M) ແມ່ນປະຕິບັດໂດຍການ panning ໃນສານລະລາຍ ຫຼື ໃນ antigen ທີ່ຖືກ immobilized ດ້ວຍເງື່ອນໄຂການລ້າງທີ່ດີທີ່ສຸດສໍາລັບການຄັດເລືອກທີ່ຂຶ້ນກັບອັດຕາ.
  
ນັກວິທະຍາສາດໃນບໍລິສັດ ອັລຟາ ໄລຟ໌ເທັກໃຊ້ເຊື້ອ Escherichia coli mutAD5TM ເປັນໜຶ່ງໃນຫຼາຍຍຸດທະສາດການກາຍພັນເພື່ອແນະນຳການກາຍພັນແບບສຸ່ມ, ແລະ ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງດັດແປງຄວາມສຳພັນ ແລະ ການສະແດງອອກຂອງຊິ້ນສ່ວນພູມຕ້ານທານທີ່ປັບປຸງໃໝ່. ເງື່ອນໄຂການຄັດເລືອກສາມາດດັດແປງໄດ້ສຳລັບຊິ້ນສ່ວນພູມຕ້ານທານທີ່ມີລະດັບການຜະລິດເພີ່ມຂຶ້ນ. ເງື່ອນໄຂການເຕີບໂຕໃນຈຸລັງການກາຍພັນ Escherichia coli ສາມາດປັບໄດ້ເພື່ອແນະນຳການກາຍພັນຈຸດສຸ່ມດຽວຕໍ່ກິໂລເບສຂອງ DNA, ເກືອບເທົ່າກັບການປ່ຽນແປງໂຄດອນໜຶ່ງຕໍ່ຊິ້ນສ່ວນ scFv. ຫຼັງຈາກຫຼາຍຮອບຂອງການກາຍພັນ, ການສະແດງ, ແລະ ການຄັດເລືອກ, ພວກເຮົາສາມາດປັບປຸງຄ່າຄົງທີ່ຄວາມສຳພັນຈາກ 10^5 - 10^6 M ເປັນ 10^8 - 10^10 M.

ປັບປຸງຍຸດທະສາດການເຕີບໂຕຂອງ Affinity

ຕຳແໜ່ງທີ່ແນ່ນອນຂອງພູມຕ້ານທານສາມາດຖືກສຸ່ມໃນຄວາມຫຼາກຫຼາຍທີ່ກຳນົດໄວ້ (ເຊັ່ນ: ການສຸ່ມເຕັມຮູບແບບດ້ວຍກົດອະມິໂນທັງໝົດ 20 ຊະນິດ ຫຼື ການສຸ່ມແບບອະຄະຕິດ້ວຍກົດອະມິໂນທີ່ເລືອກໄວ້ໃນອັດຕາສ່ວນຄົງທີ່) ເພື່ອປັບປຸງຄວາມຜູກພັນ. ພວກເຮົາມີສອງຍຸດທະສາດເພື່ອປັບປຸງຄວາມຜູກພັນຂອງພູມຕ້ານທານ: ທຳອິດ, ການກາຍພັນຖືກນຳສະເໜີຢູ່ໃນຕຳແໜ່ງທີ່ຈຳກັດໃນພາກພື້ນທີ່ກຳນົດຄວາມສົມບູນ (CDRs) ໂດຍການກາຍພັນທີ່ຊີ້ນຳໂດຍສະຖານທີ່; ອັນທີສອງ, ການກາຍພັນຖືກນຳສະເໜີເຂົ້າໄປໃນພາກພື້ນລະຫັດ V ທັງໝົດໂດຍການກາຍພັນແບບສຸ່ມ. ໂດຍການໃຊ້ສອງວິທີນີ້, ລໍາດັບກົດອະມິໂນທີ່ຖືກອະນຸລັກໄວ້ ຫຼື ພາກພື້ນຂອບທັງໝົດຂອງພູມຕ້ານທານຈະຖືກທົດແທນດ້ວຍກົດອະມິໂນອື່ນໆ, ເຊິ່ງລວມກັບເຕັກໂນໂລຊີການສະແກນຫ້ອງສະໝຸດ peptide ຂອງພວກເຮົາ, ສາມາດເພີ່ມຄວາມຜູກພັນຂອງພູມຕ້ານທານທີ່ສົນໃຈໃຫ້ສູງຂຶ້ນຫຼາຍ.

ຄວາມສຳພັນລະຫວ່າງ Phage Display-Antibody

ເມື່ອຫ້ອງສະໝຸດການກາຍພັນ scFv ໄດ້ຖືກສ້າງຂຶ້ນແລ້ວ, ມີສອງຍຸດທະສາດການກວດຄັດທີ່ສາມາດໃຊ້ໄດ້ຄື: ການວິເຄາະທາງຊີວະພາບ ແລະ ການຈັດຮຽງແອນຕິເຈນແຂງ. ໃນອັນກ່ອນໜ້ານີ້, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງການຫັກລົບຂອງຊັບສະເຕຣດຖືກນຳໃຊ້ເພື່ອແຍກແອນຕິບໍດີທີ່ມີຄວາມຜູກພັນສູງ, ຍ້ອນວ່າການກາຍພັນທີ່ມີຄວາມຜູກພັນຕ່ຳຈະຖືກລ້າງອອກ, ເຮັດໃຫ້ອະນຸພາກຟາຈທີ່ມີຄວາມຢາກສູງເຫຼືອຢູ່. ຍຸດທະສາດທີສອງໃຊ້ແອນຕິເຈນທີ່ມີປ້າຍຊື່ໃນສານລະລາຍ, ການຄັດເລືອກໂດຍອີງໃສ່ຄ່າຄົງທີ່ສົມດຸນ (Kd), ແລະ ການຄັດເລືອກໂດຍອີງໃສ່ຈลະວະການຜູກມັດ, ວິທີການຄັດເລືອກນີ້ແຍກຕົວແປແອນຕິບໍດີທີ່ມີ Kd ທີ່ດີຂຶ້ນ.

ຖ້າທ່ານມີຄໍາຖາມໃດໆ, ກະລຸນາຕິດຕໍ່ຫາພວກເຮົາໄດ້ທຸກເວລາ.