ວິສະວະກໍາ Antibody ແມ່ນຫຍັງ?

ດ້ວຍຄວາມຊ່ອຍເຫລືອຂອງວິສະວະກໍາພູມຕ້ານທານ, ມັນເປັນໄປໄດ້ທີ່ຈະດັດແປງຂະຫນາດໂມເລກຸນ, pharmacokinetics, immunogenicity, ຜູກມັດ, ຄວາມສະເພາະແລະຫນ້າທີ່ effector ຂອງພູມຕ້ານທານ. ຫຼັງຈາກການສັງເຄາະພູມຕ້ານທານ, ການຜູກມັດສະເພາະຂອງພູມຕ້ານທານເຮັດໃຫ້ພວກມັນມີຄຸນຄ່າສູງໃນການວິນິດໄສແລະການປິ່ນປົວ. ໂດຍຜ່ານວິສະວະກໍາພູມຕ້ານທານ, ພວກເຂົາສາມາດຕອບສະຫນອງຄວາມຕ້ອງການຂອງຢາແລະການພັດທະນາການວິນິດໄສເບື້ອງຕົ້ນ.

ຈຸດປະສົງຂອງວິສະວະກໍາພູມຕ້ານທານແມ່ນການອອກແບບແລະຜະລິດຫນ້າທີ່ສະເພາະສູງ, ສະຖຽນລະພາບທີ່ພູມຕ້ານທານທໍາມະຊາດບໍ່ສາມາດບັນລຸໄດ້, ວາງພື້ນຖານສໍາລັບການຜະລິດພູມຕ້ານທານການປິ່ນປົວ.

Alpha Lifetech, ດ້ວຍປະສົບການໂຄງການຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນວິສະວະກໍາພູມຕ້ານທານ, ສາມາດສະຫນອງການບໍລິການ antibody monoclonal ແລະ polyclonal ທີ່ກໍາຫນົດເອງສໍາລັບຊະນິດພັນຕ່າງໆ, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບການກໍ່ສ້າງຫ້ອງສະຫມຸດ antibody ແລະການກວດສອບ phage. Alpha Lifetech ສາມາດໃຫ້ລູກຄ້າມີພູມຕ້ານທານ biosimilar ທີ່ມີຄຸນນະພາບແລະຜະລິດຕະພັນທາດໂປຼຕີນຈາກ recombinant, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບການບໍລິການທີ່ສອດຄ້ອງກັນ, ເພື່ອຜະລິດພູມຕ້ານທານທີ່ມີປະສິດທິພາບ, ສະເພາະສູງ, ແລະຫມັ້ນຄົງ. ໂດຍການນໍາໃຊ້ພູມຕ້ານທານທີ່ສົມບູນແບບ, ແພລະຕະຟອມໂປຣຕີນແລະລະບົບການສະແດງຜົນຂອງ phage, ພວກເຮົາໃຫ້ບໍລິການກວມເອົາການຜະລິດພູມຕ້ານທານໃນຕອນຕົ້ນແລະລຸ່ມ, ລວມທັງການບໍລິການດ້ານວິຊາການເຊັ່ນ: ການເຮັດໃຫ້ພູມຕ້ານທານຂອງມະນຸດ, ການຊໍາລະພູມຕ້ານທານ, ການຈັດລໍາດັບ antibody, ແລະການກວດສອບພູມຕ້ານທານ.

ຂັ້ນຕອນການບຸກເບີກຂອງວິສະວະກໍາພູມຕ້ານທານແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບສອງເຕັກໂນໂລຢີ:

-- ເຕັກ​ໂນ​ໂລ​ຊີ DNA ຜະ​ສົມ​ຜະ​ສານ​

-- ເຕັກ​ໂນ​ໂລ​ຊີ Hybridoma​

ການພັດທະນາຢ່າງໄວວາຂອງວິສະວະກໍາພູມຕ້ານທານແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບສາມເຕັກໂນໂລຢີທີ່ສໍາຄັນ:

-- ເຕັກໂນໂລຍີ cloning gene ແລະປະຕິກິລິຍາຕ່ອງໂສ້ polymerase

--Protein expression: ທາດໂປຼຕີນຈາກ Recombinant ແມ່ນຜະລິດໂດຍລະບົບການສະແດງອອກເຊັ່ນ: ເຊື້ອລາ, ໄວຣັສທີ່ມີຮູບຊົງເປັນໄມ້ຢືນຕົ້ນ, ແລະພືດ.

--ຄອມ​ພິວ​ເຕີ​ຊ່ວຍ​ການ​ອອກ​ແບບ​ໂຄງ​ສ້າງ​

ລຸ້ນທຳອິດຂອງພູມຕ້ານທານໄດ້ຖືກສ້າງເປັນມະນຸດເພື່ອຜະລິດພູມຕ້ານທານຂອງ chimeric, ບ່ອນທີ່ພາກພື້ນທີ່ປ່ຽນແປງໄດ້ຂອງພູມຕ້ານທານ monoclonal ຂອງຫນູໄດ້ເຊື່ອມຕໍ່ກັບພາກພື້ນຄົງທີ່ຂອງໂມເລກຸນ IgG ຂອງມະນຸດ. ພາກພື້ນການຜູກມັດ antigen (CDR) ຂອງພູມຕ້ານທານ monoclonal ຂອງຫນູລຸ້ນທີສອງໄດ້ຖືກຖ່າຍທອດເຂົ້າໄປໃນ IgG ຂອງມະນຸດ. ຍົກເວັ້ນສໍາລັບພາກພື້ນ CDR, ພູມຕ້ານທານອື່ນໆທັງຫມົດແມ່ນເກືອບເປັນພູມຕ້ານທານຂອງມະນຸດ, ແລະຄວາມພະຍາຍາມໄດ້ຖືກດໍາເນີນເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການ induced human anti- mouse antibody (HAMA) ຕອບສະຫນອງໃນເວລາທີ່ການນໍາໃຊ້ antibodies clone ຫນູສໍາລັບການປິ່ນປົວຂອງມະນຸດ.

 

ເພື່ອສ້າງຫ້ອງສະຫມຸດສະແດງ phage, ຂັ້ນຕອນທໍາອິດແມ່ນເພື່ອໄດ້ຮັບ gene encoding antibodies, ເຊິ່ງສາມາດແຍກອອກຈາກຈຸລັງ B ຂອງສັດທີ່ມີພູມຕ້ານທານ (ການກໍ່ສ້າງຫ້ອງສະຫມຸດພູມຕ້ານທານ), ສະກັດໂດຍກົງຈາກສັດທີ່ບໍ່ມີພູມຕ້ານທານ (ການກໍ່ສ້າງຫໍສະຫມຸດທໍາມະຊາດ), ຫຼືແມ້ກະທັ້ງປະກອບຢູ່ໃນ vitro ກັບຊິ້ນຂອງເຊື້ອແອນຕິບໍດີ (ການກໍ່ສ້າງຫ້ອງສະຫມຸດສັງເຄາະ). ຫຼັງຈາກນັ້ນ, genes ໄດ້ຖືກຂະຫຍາຍອອກໂດຍ PCR, ໃສ່ເຂົ້າໄປໃນ plasmids, ແລະສະແດງອອກໃນລະບົບເຈົ້າພາບທີ່ເຫມາະສົມ (ການສະແດງອອກຂອງເຊື້ອລາ (ປົກກະຕິແລ້ວ Pichia pastoris), ການສະແດງອອກ prokaryotic (ປົກກະຕິແລ້ວ E. coli), ການສະແດງອອກຂອງຈຸລັງ mammalian, ການສະແດງອອກຂອງຈຸລັງພືດ, ແລະການສະແດງອອກຂອງຈຸລັງແມງໄມ້ທີ່ຕິດເຊື້ອໄວຣັດທີ່ມີຮູບຮ່າງຂອງ rod). ທົ່ວໄປທີ່ສຸດແມ່ນລະບົບການສະແດງອອກຂອງ E. coli, ເຊິ່ງລວມເອົາລໍາດັບ antibody ການເຂົ້າລະຫັດສະເພາະໃສ່ phage ແລະເຂົ້າລະຫັດຫນຶ່ງຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ phage (pIII ຫຼື pVIII). gene fusion ຂອງ, ແລະສະແດງຢູ່ດ້ານຂອງ bacteriophages. ຫຼັກການຂອງເຕັກໂນໂລຢີນີ້ແມ່ນການກໍ່ສ້າງຫ້ອງສະຫມຸດສະແດງ phage, ເຊິ່ງມີປະໂຫຍດຫຼາຍກວ່າຫ້ອງສະຫມຸດທໍາມະຊາດທີ່ມັນສາມາດມີການຜູກມັດສະເພາະ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ພູມຕ້ານທານທີ່ມີຄວາມສະເພາະຂອງ antigen ໄດ້ຖືກກວດກາໂດຍຜ່ານຂະບວນການຄັດເລືອກທາງຊີວະພາບ, antigens ເປົ້າຫມາຍໄດ້ຖືກແກ້ໄຂ, phages ທີ່ບໍ່ມີຂອບເຂດຖືກລ້າງອອກເລື້ອຍໆ, ແລະ phages ທີ່ຖືກຜູກມັດໄດ້ຖືກລ້າງອອກເພື່ອການເສີມສ້າງຕື່ມອີກ. ຫຼັງຈາກສາມຮອບຫຼືຫຼາຍກວ່າການຄ້າງຫ້ອງ, ຄວາມສະເພາະສູງແລະພູມຕ້ານທານທີ່ມີຄວາມສໍາພັນສູງແມ່ນຖືກແຍກອອກ.

Fig 3: ການສ້າງຫໍສະໝຸດ Antibody ແລະການກວດ

ເຕັກໂນໂລຍີ DNA ທີ່ປະສົມກັນສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອສ້າງຊິ້ນສ່ວນຂອງພູມຕ້ານທານ. ພູມຕ້ານທານ Fab ສາມາດໃນເບື້ອງຕົ້ນພຽງແຕ່ hydrolyzed ໂດຍ gastric protease ເພື່ອຜະລິດ (Fab ') 2 fragments, ເຊິ່ງໄດ້ຖືກຍ່ອຍສະຫຼາຍໂດຍ papain ເພື່ອສ້າງ fragments Fab ສ່ວນບຸກຄົນ. ຊິ້ນສ່ວນ Fv ປະກອບດ້ວຍ VH ແລະ VL, ເຊິ່ງມີຄວາມຫມັ້ນຄົງທີ່ບໍ່ດີເນື່ອງຈາກບໍ່ມີພັນທະບັດ disulfide. ດັ່ງນັ້ນ, VH ແລະ VL ແມ່ນເຊື່ອມຕໍ່ກັນໂດຍຜ່ານ peptide ສັ້ນຂອງ 15-20 ອາຊິດ amino ເພື່ອສ້າງເປັນຊິ້ນສ່ວນຕົວແປຂອງລະບົບຕ່ອງໂສ້ດຽວ (scFv) ພູມຕ້ານທານທີ່ມີນ້ໍາຫນັກໂມເລກຸນປະມານ 25KDa.

ການສຶກສາໂຄງສ້າງຂອງພູມຕ້ານທານໃນ Camelidae (Camel, LIama, ແລະ Alpaca) ໄດ້ອະທິບາຍວ່າພູມຕ້ານທານພຽງແຕ່ມີຕ່ອງໂສ້ຫນັກແລະບໍ່ມີສາຍຕ່ອງໂສ້ແສງສະຫວ່າງ, ດັ່ງນັ້ນພວກມັນຖືກເອີ້ນວ່າພູມຕ້ານທານລະບົບຕ່ອງໂສ້ຫນັກ (hcAb). ໂດເມນທີ່ປ່ຽນແປງໄດ້ຂອງພູມຕ້ານທານລະບົບຕ່ອງໂສ້ຫນັກເອີ້ນວ່າພູມຕ້ານທານໂດເມນດຽວຫຼື nanobodies ຫຼື VHH, ມີຂະຫນາດ 12-15 kDa. ໃນຖານະເປັນ monomers, ພວກເຂົາບໍ່ມີພັນທະບັດ disulfide ແລະມີຄວາມຫມັ້ນຄົງຫຼາຍ, ມີຄວາມໃກ້ຊິດສູງຫຼາຍສໍາລັບ antigens.

Fig 5: Heavy Chain Antibody ແລະ VHH/ Nanobody

ການສະແດງອອກທີ່ບໍ່ມີຈຸລັງໃຊ້ການສະແດງອອກຂອງ DNA ທໍາມະຊາດຫຼືສັງເຄາະເພື່ອບັນລຸການສັງເຄາະທາດໂປຼຕີນຈາກ vitro, ໂດຍປົກກະຕິການນໍາໃຊ້ລະບົບການສະແດງອອກຂອງ E. coli. ມັນຜະລິດທາດໂປຼຕີນຢ່າງໄວວາແລະຫຼີກເວັ້ນພາລະການເຜົາຜະຫລານຂອງທາດໂປຼຕີນແລະ cytotoxic ໃນຈຸລັງໃນເວລາທີ່ການຜະລິດທາດໂປຼຕີນຈາກ recombinant ຈໍານວນຫຼວງຫຼາຍໃນ vivo. ມັນຍັງສາມາດຜະລິດທາດໂປຼຕີນທີ່ມີຄວາມຫຍຸ້ງຍາກໃນການສັງເຄາະ, ເຊັ່ນວ່າມີຄວາມຫຍຸ້ງຍາກທີ່ຈະດັດແປງຫຼັງຈາກການແປຫຼືສັງເຄາະທາດໂປຼຕີນຈາກເຍື່ອ.