Aptamero kūrimo platforma

Aptamerai yra viengrandžiai oligonukleotidai (DNR, RNR arba XNR), pasižymintys dideliu afinitetu ir specifiškumu, kurie specifiškai jungiasi prie tikslinių molekulių, tokių kaip antikūnai, ir yra plačiai naudojami biosensorių kūrimui, diagnostikai ir terapijai.

„Alpha Lifetech“ teikiama aptamerų platforma apima dvi kategorijas: aptamerų sintezės platformą, kuri daugiausia apima SELEX aptamerų bibliotekos sintezės paslaugą ir aptamerų (DNR, RNR arba XNR) kūrimo paslaugą, ir aptamerų atrankos platformą, įskaitant baltymų, peptidų, ląstelių, mažų molekulių, metalo jonų ir kitų tikslinių molekulių atrankos paslaugas, pagrįstas SELEX technologija, taip pat aptamerų optimizavimo ir identifikavimo analizės paslaugas.

Aptamero sintezės platforma

SELEX aptamero bibliotekos sintezės paslauga

SELEX aptamerų bibliotekos sintezės paslauga daugiausia apima bibliotekos, kurioje yra daug atsitiktinių viengrandžių oligonukleotidų sekų, konstravimą in vitro cheminės sintezės būdu pagal tikslines molekules. Bibliotekos konstravimas yra SELEX technologijos atspirties taškas, nes ji suteikia gausybę kandidatų sekų vėlesniam atrankos procesui, sudarydama didžiules atsitiktines bibliotekas ir padidindama didelio afiniteto aptamerų atrankos galimybę.

Bibliotekos sintezė daugiausia skirstoma į šiuos etapus:

Žingsniai	Technologijos detalės
Nustatykite tikslines molekules	Nustatykite tikslines molekules, kurias reikia patikrinti dėl aptamerų – tai gali būti baltymai, nukleorūgštys, mažos molekulės, metalų jonai ir kt.
Atsitiktinės sekos dizainas	Atsitiktinis sekos ilgis, bazių sudėtis ir kiti parametrai buvo sukurti atsižvelgiant į tikslinių molekulių charakteristikas ir atrankos reikalavimus. Paprastai atsitiktinės sekos yra nuo dešimčių iki šimtų bazių ilgio.
Fiksuotų sekų sintezė	Suprojektuojami ir susintetinami oligonukleotidų fragmentai su fiksuotomis sekomis (pvz., PGR pradmenų sekomis) abiejuose galuose, kurie bus naudojami vėlesniame amplifikacijos ir atrankos procese.

Susintetinta biblioteka dar turi būti toliau apdorojama kokybės kontrolei. Bibliotekos koncentracija buvo nustatyta siekiant užtikrinti jos pritaikomumą vėlesniame atrankos procese. Atsitiktinių sekų bibliotekoje įvairovė ir tikslumas buvo patikrinti sekvenavimu ir kitais metodais, siekiant užtikrinti, kad bibliotekos kokybė atitiktų atrankos reikalavimus.

Atlikus aukščiau nurodytus veiksmus, galima susintetinti aukštos kokybės ir labai įvairią SELEX aptamerų biblioteką, kuri gali suteikti gausybę kandidatų sekų vėlesniam atrankos procesui.

Aptamerų kūrimo paslaugos (DNR, RNR arba XNR)

Aptamerai paprastai reiškia nukleorūgščių aptamerus. Nukleorūgščių aptamerai apima DNR aptamerus, RNR aptamerus ir XNA aptamerus, kurie yra chemiškai modifikuoti nukleorūgščių aptamerai. SELEX technika plačiai naudojama aptamerų kūrimui. Pagrindinis aptamerų kūrimo paslaugų darbo eiga apima bibliotekos kūrimą, taikinio susiejimą, išskyrimą ir gryninimą, amplifikaciją, kelis atrankos etapus ir sekos identifikavimą. Daugelį metų mes daugiausia dėmesio skyrėme bibliotekų kūrimui ir turime didelę patirtį aptamerų kūrimo srityje. Esame įsipareigoję teikti klientams geresnes paslaugas.

SELEX technologijos procesas

SELEX procesas susideda iš kelių etapų, kurių kiekvienas apima šiuos pagrindinius veiksmus:

Bibliotekos ir paskirties susiejimas

Sukonstruota nukleorūgščių biblioteka sumaišoma su specifinėmis tikslinėmis molekulėmis (pvz., baltymais, mažų molekulių junginiais ir kt.), kad bibliotekoje esančios nukleorūgščių sekos turėtų galimybę prisijungti prie tikslinių molekulių.

Nesurišusių molekulių išskyrimas

Prie tikslinės molekulės neprisijungusios nukleorūgščių sekos iš mišinio atskiriamos specifiniais metodais, tokiais kaip afininė chromatografija, magnetinių granulių atskyrimas ir kt.

Pririšamųjų molekulių amplifikacija

Prie tikslinės molekulės prijungta nukleorūgščių seka amplifikuojama, dažniausiai naudojant polimerazės grandininės reakcijos (PGR) technologiją. Vėlesniame atrankos etape amplifikuotos sekos bus naudojamos kaip pradinė biblioteka.

1 pav.: SELEX atrankos procesas

Aptamero atrankos platforma

Aptamero patikros paslauga

„Alpha Lifetech“ siūlo platų specializuotų aptamerų atrankos paslaugų spektrą, taikydama įvairias SELEX metodikas skirtingų tipų jūsų molekulėms:

Tiksliniai tipai	Techninės detalės
Baltymų aptamero atranka SELEX metodu	Pagrindinis baltymų aptamerų atrankos tikslas yra atrinkti aptamerus, kurie gali specifiškai jungtis prie tikslinių baltymų molekulių. Šie aptamerai yra paprasčiau sintetinami, stabilesni ir mažiau jautrūs aplinkos veiksniams.
Peptidų aptamero atranka SELEX metodu	Peptidų aptamerai yra trumpų peptidų sekų klasė, pasižyminti dideliu specifiškumu ir afinitetu, galinti specifiškai jungtis prie tikslinių medžiagų ir pasižyminti plačiu pritaikymo potencialu biomedicinos srityje. Taikant specifinį atrankos procesą, iš daugybės atsitiktinių peptidų sekų bibliotekų atrenkami peptidų aptamerai, kurie gali specifiškai jungtis prie tikslinių molekulių.
Ląstelei būdingas aptamero atrankos tyrimas (Cell-SELEX)	Kaip taikiniai paruošiamos ląstelės-taikiniai arba specifinės molekulės ląstelės paviršiuje. Taikiniai gali būti ištisos ląstelės, receptoriai ląstelės membranoje, baltymai arba kitos mažos molekulės.
Mažų molekulių aptamerių atranka naudojant „Capture SELEX“	„Capture SELEX“ yra in vitro atrankos technika, skirta mažų molekulių aptamerų, kurie yra SELEX variantas, atrankai. „Capture SELEX“ ypač gerai tinka mažų molekulių taikinių, kurie paprastai turi mažiau funkcinių grupių ir kuriuos sunku imobilizuoti tiesiogiai ant kietosios fazės atramų, aptamerų atrankai.
SELEX paslaugos, susijusios su gyvais gyvūnais	Gyvų gyvūnų pagrindu atliekama atrankinė patikra – tai eksperimentinė technika, plačiai naudojama biomokslų, medicinos ir biotechnologijų srityse, kai gyvi gyvūnai naudojami kaip eksperimentiniai modeliai, siekiant atrinkti ir įvertinti konkrečias molekules, vaistus, terapinius vaistus ar biologinius procesus. Šios paslaugos skirtos imituoti fiziologinę aplinką žmogaus organizme, kad būtų galima tiksliau numatyti ir įvertinti eksperimentinių rezultatų veiksmingumą ir saugumą žmogaus organizme.

Aptamero optimizavimo paslauga

Aptamerų hidrofiliškumas, didelis afiniteto praradimas gamybos metu ir greitas išsiskyrimas riboja jų taikymą. Šiuo metu tiriami įvairūs optimizavimo metodai, siekiant pagerinti aptamerų veikimą.

Taip pat turime įvairių aptamerų optimizavimo būdų, įskaitant sutrumpinimą, modifikacijas, konjugaciją su atitinkama grupe (tioliu, karboksigrupe, aminu, fluoroforu ir kt.).

Aptamero charakterizavimo analizės paslauga

Aptamero charakteristikų analizės paslauga – tai profesionali gauto aptamero veikimo vertinimo, struktūros išskyrimo ir funkcinio patikrinimo paslauga, siekiant užtikrinti, kad aptameras atitiktų specifinius prisijungimo gebėjimo, stabilumo ir specifiškumo reikalavimus. Ji daugiausia apima afiniteto ir specifiškumo analizę, stabilumo vertinimą ir biologinės funkcijos patikrinimą.