Dzīvnieku imunizācijas platforma

Alpha Lifetech dzīvnieku izcelsmes avoti ir skaidri, ar pārbaudes un karantīnas atļaujām, skaidru ģenētisko fonu, skaidru imunizācijas biežumu un detalizētu imunizācijas intervālu uzskaiti, nodrošinot ērtus pakalpojumus antivielu ražošanai. Tas galvenokārt imunizē kamieļveidīgos (alpakas un kamieļus), liekot pamatus nanoķermeņu ražošanai. Turklāt tas var imunizēt arī parastos dzīvniekus (piemēram, Jaunzēlandes baltos trušus, peles un citus dzīvniekus) atbilstoši klientu nepieciešamajam imunizācijas biežumam un imunogenitātes prasībām, ekstrahēt un izolēt tos PBMC un izmantot turpmākajos eksperimentos (piemēram, monoklonālo antivielu, poliklonālo antivielu izstrādē utt.). Klienti var nodrošināt savus imunogēnus, un mēs veiksim stingru kvalitātes kontroli. Ja klienti nodrošina vīrusu imunogēnus, tie ir jāinaktivē, un mēs veiksim inaktivācijas testus, lai nodrošinātu drošību. Tajā pašā laikā mēs varam arī pielāgot atbilstošos imunogēnus atbilstoši klientu vajadzībām.

Ievads dzīvnieku imunizācijā

Ražojot no dzīvniekiem iegūtas antivielas, piemēram, monoklonālās antivielas, poliklonālās antivielas un nanoķermeņus, pirmais solis ir dzīvnieku imunizācija un atbilstošo B šūnu, antivielu vai PBMC iegūšana, lai sagatavotos turpmākai antivielu ražošanai, veicinātu fundamentālus zinātniskos pētījumus, izstrādātu klīniskās diagnostikas rīkus un atvieglotu jaunu zāļu atklāšanu un izstrādi. Kamieļi, alpakas, liamas un citi kamieļi Camelidae dzimtas kamieļi var ražot nanoķermeņu (viena domēna antivielu) bibliotēkas, savācot imūnās asinis un ekstrahējot PBMC. Trušus un citus dzīvniekus var imunizēt, un no to ķermeņiem var ekstrahēt antivielas. Pēc attīrīšanas tos var izmantot poliklonālo antivielu ražošanai. Peles, žurkas utt. var izmantot monoklonālo antivielu ražošanai, sapludinot imūnās ekstrakcijas B šūnas ar mielomas šūnām. Pirms imunizācijas jāpievērš uzmanība 3R principiem (aizstāšana, samazināšana, pilnveidošana), kas var ievērojami samazināt izmantoto dzīvnieku skaitu līdz nepieciešamajam minimumam, uzlabot eksperimentālās procedūras un samazināt dzīvnieku ciešanas. Jāievēro arī pareizs eksperimenta dizains, atbilstošu antivielu izvēle un stingras validācijas procedūras.

Imunogēnu klasifikācija - nanoķermeņu ražošana

Imunogēnu veidi	Piemērs	Imunogēna sagatavošana	Piezīmes
Olbaltumvielu imunogēni	Fermenti, olbaltumvielas, baktēriju toksīni un citas vielas	Izvēlieties dažādas olbaltumvielu ekspresijas sistēmas: E. coli, raugs, kukaiņu šūnas, zīdītāju šūnas un bezšūnu sistēma	Pievērsiet uzmanību tādiem faktoriem kā temperatūra, laiks, pH un ieslēguma ķermeņi, kas ietekmē olbaltumvielu ekspresiju.
Nukleīnskābju imunogēni	DNS, RNS	DNS imunogēns: konstruēt plazmīdas DNS, klonēt piemērotus ekspresijas vektorus mērķa gēniem, kultivēt šūnas plazmīdas DNS amplifikācijai un iegūt augstas tīrības pakāpes plazmīdas DNS. RNS imunogēns: nepieciešams pievienot cepures struktūru un poliA asti, lai novērstu degradāciju	Sagatavojot DNS imunogēnus, uzmanība jāpievērš atbilstošām saimniekšūnām, un, gatavojot RNS imunogēnus, uzmanība jāpievērš RNS degradācijas novēršanai.
Vīrusu imunogēni	Pilna vīrusa inaktivēta vakcīna, apakšvienību vakcīna, vīrusu vektoru vakcīna (adenovīruss, lentivīruss u. c.), mRAN vakcīna.	Gatavojot vakcīnu ar pilnīgu inaktivāciju, vīruss vispirms tiek inaktivēts, lai palielinātu drošību. Toksicitātes testēšana tiek izmantota, lai noteiktu, vai inaktivācija ir pilnīga. Apakšvienību vakcīnām kā antigēni ir nepieciešami tikai vīrusa virsmas proteīni, un jāņem vērā imūnsistēmas efektivitāte.	Lai nodrošinātu imūnsistēmu, jāpievieno adjuvanti, jāpievērš uzmanība vīrusam, kas jāinaktivē, imūnsistēmas efekta nodrošināšanai nepieciešami atbilstoši vīrusa titri, un stingri jākontrolē sagatavošanas procesa drošība.

Dzīvnieku imunizācijas process vai laika skala

Dzīvnieku atlase un antigēnu sagatavošana

Dzīvnieku atlase: No veselīgām grupām atlasiet atbilstoša vecuma un veselīgas ķermeņa uzbūves alpakas un veiciet asins analīzes un slimību skrīningu, lai pārliecinātos, ka nav infekcijas slimību vai citu veselības problēmu.

Imunogēnu sagatavošana: Imunogēni ir galvenais imūnreakciju izraisīšanas elements, un to lietošanai ir nepieciešama atbilstošu olbaltumvielu, peptīdu vai citu piemērotu vielu izvēle, pamatojoties uz mērķa antivielu prasībām.

Alpaku var imunizēt ar 1–3 antigēniem vienlaikus, kopējam antigēna daudzumam esot 1–2 mg vienā imunizācijas reizē un tilpumam mazākam par 2 ml. Pirms imunizācijas antigēns un adjuvants tiek emulģēti attiecībā 1:1, veidojot viendabīgu maisījumu, ko uzglabā 4 °C temperatūrā.

Imunoloģiskā alpaka

Pierakstiet tukšo alpakas auss numuru un sāciet imunizācijas eksperimentu. Injicējiet limfmezglos pie alpakas kakla abās pusēs, ar 2 punktiem katrā pusē, un katrā punktā injicējiet aptuveni 0,4 ml emulgēta antigēna. Pēc imunizācijas novērojiet pusstundu, lai pārliecinātos, ka alpakai nav diskomforta simptomu. Imunizācija jāveic ik pēc 2 nedēļām, veicot vismaz 4 imunizācijas.

Asins savākšana

Pēc 4 imunizācijām 5-7 dienu laikā no alpakas kakla vēnas savāc 50 ml asiņu.

Seruma atdalīšana

Pirms katras antigēna imunizācijas imūnsistēmas novērtēšanai tiek ņemti asins paraugi, katru reizi paņemot 5 ml asiņu; Tajā pašā dienā asinis tika centrifugētas ar 400 x g 30 minūtes, izmantojot iepriekš atdzesētu centrifūgu līdz 25 ℃. Seruma augšējais slānis tika atdalīts un uzglabāts turpmākai antivielu titra pārbaudei.

Atsevišķi limfocīti

Vispirms pievienojiet 15 ml šūnu atdalīšanas šķīduma, pēc tam lēnām pievienojiet 15 ml asiņu 50 ml centrifūgas mēģenē. Pievienojot asinis, esiet uzmanīgi un lēni, lai novērstu asiņu un atdalīšanas šķīduma sajaukšanos. Iepriekš atdzesētu centrifūgu veiciet 25 ℃ temperatūrā, centrifugējiet ar 400 x g 30 minūtes un uzglabājiet augšējo serumu jaunā centrifūgas mēģenē -80 ℃ temperatūrā; Izmantojiet pipeti, lai aspirētu vidējās vates formas augšējā slāņa imūnās šūnas jaunā 50 ml centrifūgas mēģenē. Katrā mēģenē pievienojiet 10 ml PBS buferšķīduma istabas temperatūrā, centrifugējiet 25 ℃ temperatūrā un 400 x g 20 minūtes. Noņemiet supernatantu, katrā mēģenē pievienojiet 5 ml PBS buferšķīduma istabas temperatūrā, viegli samaisiet, aprēķiniet šūnu skaitu, izmantojot hemocitometru, un pēc tam centrifugējiet 25 ℃ temperatūrā un 400 x g 20 minūtes. Noņemiet supernatantu un izšķīdiniet ar RNAiso Plus iegūtos limfocītus atbilstoši šūnu skaitam, lai iegūtu 10^7/ml šūnu lizāta, ko uzglabā -80 ℃ temperatūrā.

1. attēls: Dažādu antivielu atklāšanas stratēģiju un iesaistīto eksperimentālo posmu shematisks attēlojums. (Attēla avots: Laustsen, Andreas H. u.c.)

Klienti nodrošina imunogēnu stingru kvalitātes kontroli

Imunogēnu veidi	Prasība	Kvalitātes kontroles metode
Peptīdu/mazu molekulu paraugi	Šķīdināšanas apstākļi (galvenokārt atkarībā no tā, vai tie inaktivēs fāgus), molekulārā struktūra/peptīdu secība, sintēzes pārskats (HPLC/MS/HNMR)	HPLC/MS noteikšana
Olbaltumvielu paraugi	SDS-PAGE/WB, rekonstitūcijas apstākļi, buferšķīdums, informācija par etiķeti, kopējais daudzums (20–50 μg), koncentrācija, tīrība utt.	SDS-PAGE/WB
Šūnu paraugi	Šūnu tips (primārās šūnas/gēnu rediģētas šūnas), šūnu forma (svaigas/saldētas atkausētas), augšanas tips (adherentas/suspendētas), barotnes prasības, nodrošināto šūnu skaits, nodrošināto šūnu skaits, gēnu rediģētas šūnas, lai nodrošinātu skrīninga mērķu stabilu ekspresiju (klientam atbilstošā primārā antiviela), saldētas atkausētas šūnas, lai noteiktu atgūšanas ātrumu	Galvenokārt mērķējot uz gēnu rediģētām šūnām, izmantojot klienta piegādātas primārās antivielas mērķa ekspresijas identifikācijai ar ELISA metodi (mūsu uzņēmums nodrošina HRP sekundārās antivielas), plūsmas citometrijas noteikšanai (mūsu uzņēmums var nodrošināt fluorescējošas sekundārās antivielas).

Kādi ir dzīvnieku imunitātes pielietojumi?

+

Poliklonālās antivielas var iegūt, imunizējot dzīvniekus, monoklonālās antivielas var iegūt, sapludinot B šūnas ar mielomas šūnām, un PBMC var iegūt no kamieļu avotiem (alpakām, kamieļiem, alpakām utt.), lai iegūtu dažādas antivielu fragmentu formas, piemēram, nanoķermeņus, Fab fragmentus, scFv antivielu fragmentus utt.
Kādi ir dzīvnieku imunitātes piesardzības pasākumi?

+

Lai iegūtu nanoantivielas kamieļveidīgajiem, nepieciešamas 5–6 imunizācijas. Pirms imunizācijas kontrolei jāsavāc asins paraugi, starp katru imunizāciju ievērojot 2 nedēļu intervālu. Pēc ceturtās imunizācijas ELISA analīzei jāsavāc pozitīvas asinis un neimunizētas negatīvas asinis. Ja titrs ir zem 10^6, imunizāciju skaits jāpalielina, līdz titrs sasniedz atbilstošu līmeni. Citu dzīvnieku imunizāciju, piemēram, trušu imunizācijas (optimālais jeb kopējā proteīna antigēna līmenis trušu imunizācijai ir 50–1000 µg), peļu imunizācijas (optimālais jeb kopējā proteīna antigēna līmenis peļu imunizācijai ir 5–50 µg, kas prasa 10^6 šūnas, ja tā ir šūna, un 10–50 µg nukleīnskābēm vai ogļhidrātiem), kazu imunizācijas (optimālais jeb kopējā proteīna antigēna līmenis kazu imunizācijai ir 250–5000 µg) u.c., uzmanība jāpievērš imunogēnu devai, drošībai un efektivitātei.
Kā izvēlēties imunizētus dzīvniekus?

+

Atkarībā no klienta nepieciešamā antivielu veida, ja nepieciešams ražot nanoķermeņus vai citus antivielu fragmentus, imunizācijai varat izvēlēties no kamieļiem iegūtus dzīvniekus (kamieļus, alpakas). Ja nepieciešams ražot monoklonālas vai poliklonālas antivielas, jāizvēlas atbilstošā suga, pamatojoties uz seruma, antigēna un antigēna avota daudzumu. Maksimālais seruma daudzums trušiem ir 500 ml, kam nepieciešams neliels antigēna daudzums, un tā ir galvenā izvēle poliklonālo antivielu ražošanai. Maksimālais seruma daudzums pelēm ir 2 ml, bet maksimālais seruma daudzums žurkām ir 20 ml, kas parasti ir optimālā izvēle monoklonālajām antivielām. Kazu ražotajām antivielām ir augsta afinitāte, un Alpha Lifetech var pielāgot jums ekskluzīvu imunizācijas plānu atbilstoši jūsu prasībām.
Vai antigēni jālieto kopā ar adjuvantiem? Kā izvēlēties?

+

Ir divu veidu adjuvanti: uz eļļas bāzes un uz ūdens bāzes. Saprātīga adjuvantu lietošana ir ļoti svarīga, lai izraisītu spēcīgu antivielu atbildes reakciju pret šķīstošajiem antigēniem. Adjuvantu ilgstoša izdalīšanās nozīmē, ka var izmantot mazāk antigēnu devu, un antivielu atbildes reakcija ir ilgstošāka. Pirmā injekcija jālieto kombinācijā ar adjuvantu. Parasti ieteicams lietot Freunda adjuvantu, ja imunogēna daudzums ir neliels.
Piesardzības pasākumi alpaku imunizācijai?

+

(1) Alpaku un imunitātes antigēnu izvēle ir veiksmīgas imunizācijas atslēga. Nav ieteicams izvēlēties labi proporcionālu kamieļa ķermeni. Imūno antigēnu tīrība un pareiza konformācija ir izšķiroša, lai pārbaudītu piemērotas antivielas turpmākai lietošanai pēc imunizācijas ar alpākām. Olbaltumvielu antigēnu tīrība parasti nav mazāka par 90%.

(2) Limfocītu atdalīšana: Savlaicīga šūnu atdalīšana var efektīvi novērst hemolīzi pēc asins savākšanas, lai sasniegtu vislabāko atdalīšanas efektu.

(3) Imūnsistēmas cikls var ietekmēt imūnreakciju: 1–2 nedēļu imūnās reakcijas intervāls ļauj alpākām iegūt labu imūnreakciju pret lielāko daļu antigēnu.

neatkarīgi izstrādāts adjuvants

Mūsu unikālā adjuvanta formula ir optimizēta alpaku imūnsistēmai, nodrošinot augstāku iedarbību un specifiskumu nekā tradicionālie adjuvanti.

Imunizācijas piegāde
standarta

Mēs apsolām pabeigt imunizāciju noteiktajā laikā, nodrošināt augsta titra serumu un reģistrēt katru soli detalizētos ziņojumos.

projekta kvalitātes kontrole

Katrs projekts tiek pakļauts stingrai kvalitātes kontrolei, lai nodrošinātu augstiem standartiem atbilstošu antivielu piegādi klientiem.

skaidriAlpakaFons

Mums ir veselīga alpaku populācija, kas nodrošina atbalstu dažādām imunizācijas programmām.

Ja jums ir kādi jautājumi, lūdzu, sazinieties ar mums jebkurā laikā.

Leave Your Message

Piedāvātais pakalpojums

0102