Antivielu afinitātes nobriešanas pakalpojums

Alpha Lifetech Inc.Var piedāvāt antivielu afinitātes nobriešanas pakalpojumu, izmantojot mutāciju un selekcijas tehnoloģijas. Afinitātes nobriešanas procesos mēs parasti izmantojam scFv kā antivielu formātu un monovalentu displeja fāgemīdu sistēmu, kas ir izmantota, lai samazinātu aviditātes efektus antigēnu saistīšanās skrīninga laikā. Mūsu profesionālā komanda var nodrošināt arī afinitātes nobriešanas pakalpojumus viena domēna antivielām.

Alpha Lifetech Inc.ar lepnumu piedāvā visaptverošus pakalpojumus, lai apmierinātu klientu dažādās vajadzības visā pasaulē. Mūsu mērķis ir izprast un apmierināt dažādu klientu prasības, kā arī palīdzēt risināt visas iespējamās un jaunās problēmas pētniecības darbā.

Kas ir afinitātes nobriešana?

Afinitātes nobriešana ir process, kurā antivielas tiek pakļautas atkārtotām mutācijām un selekcijai, lai pastiprinātu to afinitāti pret specifiskiem antigēniem. B šūnas, kas galvenokārt notiek sekundāro limfoīdo orgānu germinālajā centrā, T šūnu un folikulu dendrītisko šūnu ietekmē tiek pakļautas somatiskām hipermutācijām un selekcijai.
Afinitātes nobriešanas procesā B šūnas ar zemas afinitātes virsmas imūnglobulīnu receptoriem tiek aktivizētas, saskaroties ar antigēniem, un tās piedzīvo proliferāciju un diferenciāciju. Somatiskā hipermutācijas afinitātes nobriešanas rezultātā imūnglobulīnu gēnu mainīgajā reģionā notiek nejaušas nukleotīdu aizvietošanas, kas noved pie dažādu antivielu variantu veidošanās. Pēc somatiskās hipermutācijas B šūnām ar mutētiem imūnglobulīnu receptoriem tiek veikta antigēna virzīta selekcija. B šūnas, kas ražo antivielas ar paaugstinātu antigēnu afinitāti, tiek priekšroku saglabātas un tām ļauj vairoties, savukārt B šūnas ar samazinātu vai nemainīgu afinitāti tiek apoptozētas. Šis iteratīvais mutāciju un selekcijas process noved pie B šūnu klonu veidošanās, ražojot antivielas ar pakāpeniski lielāku afinitāti pret antigēnu.

Antivielu afinitātes nobriešanas pakalpojums

Galvenās uz PCR balstīto metožu priekšrocības ir tādas, ka mutācijas ir precīzi mērķētas uz amplificēto fragmentu; kļūdu līmeni ir viegli kontrolēt, metode ir ātra un vienkārši uzstādāma, un tajā netiek izmantotas bīstamas ķīmiskas vielas. Ir labi zināms, ka Taq DNS polimerāze dublē DNS ar zemu precizitāti, galvenokārt tāpēc, ka nav 3' līdz 5' korektūras aktivitātes.Alpha LifetechAntivielu inženierijas platforma izmanto kļūdu riska PCR pieeju, lai mutētu galvenokārt CDR reģionus apakšbibliotēkas veidošanas laikā. Un bieži vien mēs veidojam mutācijas pilnīgi nejaušās pozīcijās visā VH un VL fragmentos, lai palielinātu apakšbibliotēkas ģenētisko daudzveidību. Pēc mutētu antivielu gēnu bibliotēkas konstruēšanas, izmantojot kļūdu riska PCR, augstas afinitātes variantu atlase (scFv antivielu afinitāte var sasniegt 10^8 - 10^10 M) tiek veikta vai nu ar panēšanu šķīdumā, vai uz imobilizēta antigēna ar mazgāšanas apstākļiem, kas ir optimizēti no novirzes ātruma atkarīgai atlasei.
  
ZinātniekiAlpha Lifetech Inc.Izmantot Escherichia coli mutatorcelmus mutAD5TM kā vienu no vairākām mutāciju stratēģijām, lai ieviestu nejaušas mutācijas un tādējādi modificētu rekombinanto antivielu fragmentu afinitāti un ekspresiju. Atlases apstākļus var modificēt antivielu fragmentiem ar palielinātu ražošanas līmeni. Augšanas apstākļus Escherichia coli mutatoršūnās var pielāgot, lai ieviestu vienu nejaušu punkta mutāciju uz DNS kilobāzi, kas ir gandrīz līdzvērtīgi vienai kodona maiņai uz katru scFv fragmentu. Pēc vairākiem mutācijas, displeja un atlases cikliem mēs varam uzlabot afinitātes konstanti no 10^5 - 10^6 M līdz 10^8 - 10^10 M.

Uzlabojiet afinitātes nobriešanas stratēģijas

Noteiktas antivielu pozīcijas var tikt nejaušināti sadalītas noteiktā daudzveidībā (piemēram, pilnīga nejaušināšana ar visām 20 aminoskābēm vai neobjektīva nejaušināšana ar izvēlētām aminoskābēm fiksētos procentos), lai uzlabotu afinitāti. Mums ir divas stratēģijas antivielu afinitātes uzlabošanai: pirmkārt, mutācijas tiek ieviestas ierobežotās pozīcijās komplementaritāti noteicošajos reģionos (CDR), izmantojot vietvirzītu mutaģenēzi; otrkārt, mutācijas tiek ieviestas visos V kodēšanas reģionos, izmantojot nejaušu mutaģenēzi. Izmantojot šīs divas metodes, konservētās aminoskābju sekvences vai viss antivielas karkasa reģions tiks aizstāts ar citām aminoskābēm, kas apvienojumā ar mūsu peptīdu bibliotēkas skenēšanas tehnoloģijām varētu ievērojami palielināt interesējošo antivielu afinitāti ļoti augstā līmenī.

Fāgu displeja antivielu afinitāte

Kad scFv mutantu bibliotēka ir izveidota, ir pieejamas divas skrīninga stratēģijas: biopanning un cieto antigēnu šķirošana. Pirmajā gadījumā augstas afinitātes antivielu izolēšanai tiek izmantota substrāta subtraktīva koncentrācija, jo zemas afinitātes mutanti tiktu izskaloti, atstājot augstas aviditātes fāga daļiņas. Otrajā stratēģijā tiek izmantots iezīmēts antigēns šķīdumā, atlase, kuras pamatā ir līdzsvara konstante (Kd), un atlase, kuras pamatā ir saistīšanās kinētika. Šī atlases pieeja izdala antivielu variantus ar uzlabotu Kd.

Ja jums ir kādi jautājumi, lūdzu, sazinieties ar mums jebkurā laikā.