Bispecifisku antivielu izstrādes platforma

Alpha Lifetech var nodrošināt klientiem kvalitatīvus antivielu atklāšanas un rekombinanto olbaltumvielu produktus un pakalpojumus. Mēs varam sagatavot antivielas ar augstu efektivitāti, spēcīgu specifiskumu un labu stabilitāti. Alpha Lifetech piedāvā dažādus antivielu attīrīšanas instrumentus un iekārtas, kas var nodrošināt antivielu attīrīšanas pakalpojumus no dažādiem avotiem, piemēram, trušu, aitu, vistu un peļu monoklonālajām antivielām, kā arī A/G olbaltumvielu afinitātes attīrīšanas pakalpojumus un antivielu atdalīšanas un attīrīšanas pakalpojumus. Balstoties uz visaptverošo antivielu atklāšanas platformas, olbaltumvielu platformas u.c. platformas sistēmas konstrukciju, mēs aptveram antivielu ražošanas augšupējos un lejupējos pakalpojumus un varam sniegt tehniskos pakalpojumus, sākot no antivielu sagatavošanas, bispecifisku antivielu attīrīšanas un antivielu atdalīšanas un attīrīšanas, antivielu sekvencēšanas, antivielu validācijas u.c., ko var izmantot bispecifisku antivielu terapijā.

Monoklonālās antivielas attiecas uz imūnglobulīniem, ko ražo viena B šūna, kam ir augsta specifiskums pret antigēniem vai epitopiem. Monoklonālo antivielu ražošana sākotnēji tika veikta, izmantojot hibridomas tehnoloģiju, lai iegūtu peļu antivielas. Konkrēti, sapludinot imunizētu peļu liesas šūnas ar cilvēku vai peļu mielomas šūnām, tiek veidotas hibridomas šūnas, kas izdala specifiskas antivielas. Iegūtās peļu monoklonālās antivielas galvenokārt tiek izmantotas dzīvnieku pētījumos un slimību diagnostikā pēc attīrīšanas pakalpojumiem. Tomēr cilvēka organisms radīs imūnreakciju uz svešiem peļu proteīniem, tāpēc peļu monoklonālo antivielu ražošanas klīniskajā pielietojumā ir ievērojami ierobežojumi. Vēlāk cilvēki izmantoja "humanizāciju", lai iegūtu monoklonālās antivielas no pelēm, un izmantoja ģenētiskās inženierijas tehnoloģiju, lai modificētu peļu antivielas, lai tām būtu nemainīgs cilvēka imūnglobulīna reģions, lai samazinātu to imunogenitāti. Šāda veida antivielas ir pazīstamas arī kā humanizētas monoklonālās antivielas. Turklāt cilvēka šūnu izmantošana monoklonālo antivielu ražošanai tiek saukta par pilnīga cilvēka monoklonālo antivielu sagatavošanu. Monoklonālās antivielas tiek plaši izmantotas biomedicīnas un klīniskajos pielietojumos. Medicīniskajos pētījumos monoklonālās antivielas var izmantot kā imunomodulatorus, terapeitiskās monoklonālās antivielas var izmantot vēža ķīmijterapijai un vīrusu infekciju ārstēšanai, un monoklonālo antivielu konjugātu izstrāde galvenokārt tiek izmantota vēža ārstēšanai.

Ievads bispecifiskā antivielā

1960. gadā tika ierosināta bispecifisko antivielu koncepcija. Bispecifiskās antivielas, kas pazīstamas arī kā bispecifiskas monoklonālās antivielas, ir mākslīgi sintezētas antivielas, izmantojot gēnu inženierijas tehnoloģiju. Kā mākslīgi konstruētas antivielas, bispecifiskās antivielas parasti pieder pie IgG apakšklases un satur antigēnu saistošu fragmentu, kas vērsts pret CD3 apakšvienību. Bispecifiskām antivielām ir divas specifiskas antigēnu saistošas vietas, kas var vienlaikus saistīties un atpazīt divus dažādus antigēnus vai divus dažādus antigēna epitopus. Salīdzinot ar monoklonālajām antivielām, bispecifiskām antivielām ir papildu specifiska antigēnu saistoša vieta, tādējādi tām piemīt spēcīgāka specifiskums un mērķēšanas spēja, kas var precīzāk mērķēt uz audzēja šūnām un samazināt ārpus mērķa toksicitāti. Bispecifiskas antivielas var vienlaikus veikt vairākas bioloģiskas funkcijas, piemēram, piesaistīt imūnās šūnas, bloķēt signalizācijas ceļus un tieši iznīcināt audzēja šūnas. Agrīnās bispecifiskās antivielas galvenokārt tika sagatavotas, izmantojot ķīmisku konjugāciju vai šūnu saplūšanu, taču šī metode, iespējams, attīstījās lēni nejaušās kombinācijas un grūtību dēļ izolēt mērķa kombināciju. Līdz ar ģenētiskās inženierijas tehnoloģiju nepārtrauktu attīstību ir izstrādātas daudzas jaunas tehnoloģiju platformas, piemēram, mezgli caurumos (KIH), CrossMab, DVD Ig utt. Šīs platformas efektīvi risina tādas problēmas kā smago ķēžu un vieglo ķēžu neatbilstība un uzlabo bispecifisko antivielu vienveidību un ražu.

1. attēls. Vienkāršots shematisks pārskats par ierosinātajiem bispecifisko antivielu (bsAb) darbības mehānismiem onkoloģijas klīniskajos pētījumos.(Attēla avots: Bispecifisko antivielu un antivielu konstrukciju apskats onkoloģijā un klīniskās problēmās — ScienceDirect)

Bispecifisko antivielu ražošanas tehnoloģija

Galvenās bispecifisku antivielu iegūšanas metodes ietver ķīmisko savienošanu, četru avotu hibridomu un ģenētiskās inženierijas antivielu sagatavošanu. Starp tām ķīmiskās savienošanas metode savieno divus neskartus IgG vai divus F(ab ')2 antivielu fragmentus bispecifiskās antivielās, izmantojot ķīmiskos savienošanas līdzekļus, piemēram, ftalimīdu un ditioacilbenzoskābi. Šī metode ir vienkārša un viegli lietojama, taču tā var sabojāt antigēna saistīšanās vietu, samazināt antivielu aktivitāti, un pašam savienošanas līdzeklim ir arī zināma kancerogenitātes pakāpe. Četru avotu hibridomas metode balstās uz somatisko šūnu saplūšanu no divām dažādām hibridomas šūnu līnijām, lai ekspresētu atbilstošo peles IgG. Izmantojot ģenētiskās inženierijas tehnoloģiju, antivielas var ģenētiski modificēt, veidojot bispecifiskas antivielas. Tika konstruētas divas dažādas monoklonālās antivielas, un abu antivielu Fab fragmenti vai smagās ķēdes un vieglās ķēdes mainīgie reģioni tika atdalīti atsevišķi. Izmantojot šķērssaistīšanas reakciju vai ķēdes rekombinācijas tehnoloģiju, abi fragmenti tika apvienoti, veidojot bispecifisku antivielu. Lai gan ģenētiskās inženierijas tehnoloģijas sarežģītība ir relatīvi augsta, tā pašlaik ir visbiežāk izmantotā metode bispecifisku antivielu iegūšanai, lai pielāgotu antivielu struktūru un funkciju. Veicot bispecifisku antivielu izstrādi, var izmantot antivielu krusteniskās reaktivitātes principu, taču antivielu krusteniskā reaktivitāte var izraisīt nespecifiskas reakcijas, tāpēc tā tiks rūpīgi apsvērta bispecifisku antivielu dizaina praktiskajā pielietošanā, piemēram, bispecifisku antivielu terapijā.

Bispecifisku antivielu attīrīšana

Bispecifisko antivielu attīrīšana ir augstas tīrības pakāpes mērķa antivielu izolēšanas un attīrīšanas process. Dažu šķīstošo piemaisījumu noņemšanai tiek izmantotas divas metodes: centrifugēšana un dziļā filtrācija. Mērķa bispecifiskā antiviela sākotnēji tiek uztverta ar afinitātes hromatogrāfiju. IgG līdzīgām bispecifiskām antivielām tiek izmantota A proteīna afinitātes hromatogrāfija, savukārt ne-IgG līdzīgām bispecifiskām antivielām var izmantot uz vieglās ķēdes balstītu afinitātes hromatogrāfiju. Pēc tam antiviela noteiktu laiku tiek inkubēta zemā pH apstākļos, izjaucot vīrusa apvalka virsmas olbaltumvielu struktūru un tādējādi zaudējot spēju inficēt šūnas. Lai vēl vairāk noņemtu piemaisījumus, piemēram, saimniekšūnu proteīnus (HCP), tiek veikta starpposma dziļā filtrācija. Antivielu tīrība tiek uzlabota, izmantojot tādas metodes kā jonu apmaiņas hromatogrāfija, un visi atlikušie vīrusi tiek noņemti, izmantojot nanofiltrācijas vai ultrafiltrācijas metodes. Visbeidzot, paraugs tiek koncentrēts un aizstāts ar piemērotu formulas buferšķīdumu.

Bispecifisko antivielu ražošanas pakalpojuma darbplūsma

Soļi	Pakalpojuma saturs	Laika skala
Gēnu sintēze	Līdz pat 3 dažādu secību dizaina shēmu ģenerēšana, rekombinanto antivielu DNS plazmīdu de novo ģenerēšana	2–3 nedēļas
Maza mēroga tests	Bispecifisku antivielu proteīnu ražošana → Neliela mēroga ekspresija zīdītāju šūnu līnijās → Validācija ar SDS-PAGE → Saistīšanās analīze ar rekombinantiem proteīnu antigēniem, izmantojot ELISA → Klonu salīdzinājums ar vecāku antivielām	5–6 nedēļas
Identificēt	Pirmo divu pilna garuma bispecifisko antivielu ekspresija → Saistīšanās analīze ar ELISA → Antivielu, ko atpazīst peles antivielas, novērtējums ar ELISA metodi	1 nedēļa
Antivielu ražošana	Liela mēroga antivielu ražošana	3–4 nedēļas

Mūsu priekšrocības

Mēs piedāvājam antivielu ražošanas augšupējos un lejupējos pakalpojumus, kā arī tehniskos pakalpojumus, sākot no antivielu sagatavošanas, bispecifisko antivielu attīrīšanas un antivielu atdalīšanas un attīrīšanas, antivielu sekvencēšanas, antivielu validācijas utt., ko var izmantot bispecifisko antivielu terapijā.

Augsta izteiksme

Augsta olbaltumvielu ekspresija CHO šūnās.
Stabila uzglabāšana

>2 nedēļas serumā 37 °C temperatūrā.
Nav šķīdības problēmu

>30 mg/ml
Stabilas šūnu līnijas

Ir izstrādātas daudzas stabilas šūnu līnijas ar audzēja antigēniem, lai validētu daudzas bispecifiskas antivielas.