Hibridomas tehnoloģiju platforma
Uzņēmumam “Alpha Lifetech” ir bagāta pieredze antivielu izstrādes jomā. Gadu gaitā “Alpha Lifetech” ir izveidojis visaptverošu antivielu izstrādes platformu (tostarp monoklonālo antivielu izstrādi, poliklonālo antivielu izstrādi, rekombinanto monoklonālo antivielu izstrādi un citus antivielu sagatavošanas un izstrādes pakalpojumus).
Alpha Lifetech nodrošina klientiem kvalitatīvus antivielu un rekombinanto antivielu produktus un pakalpojumus, un sagatavotajām antivielām ir spēcīga specifiskums un laba stabilitāte. Vairāki antivielu attīrīšanas instrumenti un iekārtas var tikt izmantotas, lai nodrošinātu antivielu attīrīšanas pakalpojumus no dažādiem avotiem, piemēram, trušu, aitu, vistu, peļu monoklonālajām antivielām, kā arī olbaltumvielu A/G afinitātes attīrīšanas pakalpojumus un antivielu atdalīšanas pakalpojumus.
Balstoties uz dažādām antivielu sagatavošanas metodēm, piemēram, hibridomas šūnu tehnoloģiju, Alpha Lifetech var nodrošināt pielāgotus pakalpojumus dažādu sugu monoklonālajām un poliklonālajām antivielām. Turklāt var tikt nodrošināts arī plašs pakalpojumu klāsts, sākot no augstas caurlaidības sekvencēšanas, antivielu sagatavošanas, antivielu attīrīšanas līdz antivielu validācijai. Attīrīšanas metodi izvēlēsimies, pamatojoties uz klienta konkrēto mērķi. Balstoties uz visaptverošām platformu sistēmām, piemēram, antivielu izstrādes platformu un olbaltumvielu platformu, Alpha Lifetech aptver antivielu ražošanas augšupējos un lejupējos pakalpojumus, nodrošinot antivielu attīrīšanu, antivielu augstas caurlaidības sekvencēšanu, antivielu validāciju un citus tehniskos pakalpojumus.
Hibridomas tehnoloģija
Hibridomas tehnoloģiju var izmantot monoklonālo antivielu pagatavošanai. Sapludinot imunizētu peļu liesas šūnas ar cilvēku vai peļu mielomas šūnām, tiek veidotas hibridomas šūnas, kas izdala specifiskas antivielas. Iegūtās no pelēm iegūtās monoklonālās antivielas var izmantot zinātniskos pētījumos, piemēram, enzīmu imūnsorbcijas testā, radioimunoanalīzē, imūnhistoķīmijā, plūsmas citometrijā, olbaltumvielu attīrīšanā utt. Monoklonālo antivielu paraugi ietver ascītu, hibridomas supernatantu utt. Paraugu, kas iegūts, injicējot hibridomas šūnas dzīvnieku vēdera dobumā un izmantojot dzīvnieka vēdera dobuma fizioloģisko vidi antivielu ražošanai, sauc par ascīta paraugu. Hibridomas šūnas, kas injicētas dzīvnieku vēdera dobumā, var vairoties un izdalīt monoklonālās antivielas, kas var uzkrāties ascītā. Tā kā šajās antivielās var būt piemaisījumi (dzīvnieku olbaltumvielas, hormoni utt.), ir nepieciešama attīrīšana. Pamatojoties uz B limfocītu sekrēcijas funkciju, kultivējot hibridomas šūnas, monoklonālās antivielas bieži tiek izdalītas barotnē. Šķidrumu, kas satur monoklonālās antivielas barotnē, sauc par hibridomas supernatantu. Monoklonālo antivielu tīrība supernatantā ir relatīvi augsta, taču liela mēroga sagatavošanai ir nepieciešama turpmāka attīrīšana, jo tās iegūst in vitro kultūrā.
Antivielu attīrīšana var izolēt augstas tīrības pakāpes antivielas no kompleksiem. Pašlaik antivielu afinitātes attīrīšana un antivielu atdalīšana un attīrīšana ir plaši izmantotas antivielu attīrīšanas metodes, galvenokārt ietverot A/G proteīna attīrīšanu, jonu apmaiņas hromatogrāfiju, gēla filtrāciju, nogulsnēšanu un hidrofobās mijiedarbības hromatogrāfiju. Starp tām A/G proteīna afinitātes attīrīšanas pakalpojums ir plaši populārs dažādos antivielu attīrīšanas pielietojumos. Alpha Lifetech monoklonālo antivielu sagatavošanas process, pamatojoties uz hibridomas tehnoloģiju, ir parādīts 1. attēlā.
1. att. Monoklonālo antivielu sagatavošanas procesa diagramma, kuras pamatā ir hibridomas tehnoloģija.
Antivielu zāļu konjugātu un hibridomu tehnoloģija
Antivielu un zāļu konjugāts (ADC) ir jauns bioloģisks aģents, kas ķīmiski savieno antivielas ar citotoksiskām zālēm. Antivielu un zāļu konjugāts apvieno antivielu specifisko atpazīšanas spēju ar citotoksisko zāļu spēcīgo nonāvējošo iedarbību un precīzi piegādā citotoksiskas zāles audzēja šūnās, izmantojot antivielas, tādējādi panākot precīzu ārstēšanu. ADC zāļu antivielu daļa bieži tiek sagatavota, izmantojot hibridomu tehnoloģiju vai citas antivielu ražošanas metodes, piemēram, ģenētiskās inženierijas antivielu tehnoloģiju. Hibridomas tehnoloģija nodrošina augstas kvalitātes antivielu izejvielas ADC zālēm. ADC zālēm un monoklonālajām antivielām, kas sagatavotas, izmantojot hibridomu tehnoloģiju, ir svarīga loma tādās jomās kā vēža ārstēšana. Tās var lietot atsevišķi vai kombinācijā, lai uzlabotu terapeitisko efektivitāti.
Ar hibridomas tehnoloģiju sagatavotām monoklonālām antivielām ir augsta specifiskums, tās var precīzi saistīties ar specifiskiem antigēniem un tos atpazīt, un tās var ražot plašā mērogā. Izmantojot hibridomas sekvencēšanas tehnoloģiju, hibridomas šūnās esošos antivielu gēnus var ekstrahēt un sekvencēt, lai iegūtu atbilstošas sekvences, kas ir labvēlīgi turpmākai antivielu ekspresijai. Ar hibridomas tehnoloģiju sagatavotas monoklonālās antivielas var izmantot specifisku slimību marķieru, piemēram, audzēja marķieru, vīrusu antigēnu utt., noteikšanai, nodrošinot spēcīgu atbalstu slimību agrīnai diagnostikai. Turklāt to var izmantot arī tādos eksperimentos kā imūnblotings un imūnhistoķīmija, lai pētītu olbaltumvielu ekspresiju, lokalizāciju, struktūru un funkciju.
Hibridomas tehnoloģijas ražošanas antivielu pakalpojuma darbplūsma
| Soļi | Pakalpojuma saturs | Laika skala |
| 1. darbība: dzīvnieku imunizācija | (1) Dzīvnieku imunizācija 4 reizes, revakcinācija 1 deva, kopā imunizētas 5 devas. (2) Pirms imunizācijas tika savākts negatīvs serums, un ceturtajai devai tika veikta ELISA, lai noteiktu seruma titru. (3) Ja ceturtās devas seruma antivielu titrs atbilst prasībām, 7 dienas pirms asins analīzes paņemšanas tiks ievadīta vēl viena imunizācijas deva. Ja tā neatbilst prasībām, tiks turpināta standarta imunizācija. (4) Kvalificēta iedarbība. Liesas šūnas tiek izolētas šūnu saplūšanai. | 10–12 nedēļas |
| 2. solis: sapludināšana un skrīnings | (1) Saplūšana: Pēc imunizācijas peļu liesas šūnas tika savāktas un sapludinātas ar mielomas šūnām. (2) Proliferācija un skrīnings: Iegūtās hibridomas šūnas tika pakļautas proliferācijas un ELISA skrīningam, lai iegūtu ļoti efektīvus klonus. | 6 nedēļas |
| 3. solis: subklonēšana | 15–25 pozitīvu mātes šūnu subklonēšana, izmantojot ierobežotas atšķaidīšanas metodi, un visbeidzot 10–15 pozitīvu klonu noteikšana | 3–4 nedēļas |
| 4. solis: ascīta veidošanās un antivielu attīrīšana | (1) Ascīta iegūšana: pelēm ascīta iegūšanai tiek izmantoti 10–15 hibridomas celmi (ja tiek iegūts liels skaits hibridomas celmu, tie tiks nosūtīti šūnu formā). (2) Ascīta identifikācija: ascīta ELISA noteikšana, iedarbība (olbaltumviela/vīruss>10^5, maza molekula/peptīds>10^4) tālākai attīrīšanai (3) A/G proteīna attīrīšana: ascīta attīrīšana | 3–4 nedēļas |
| 5. darbība: Piegāde | (1) Nodrošiniet 3–5 monoklonālo antivielu hibridomas celmus. (2) Katra hibridomas šūna nodrošina 1 mg attīrītas antivielas (ascīta attīrīšana). (3) Eksperimentālā procesa ziņojums | 1 nedēļa |