Fāgu displeja bibliotēkas būvniecības pakalpojums

Uzņēmumam Alpha Lifetech ir visaptveroša M13/T7 fāgu displeja platforma, lai nodrošinātu antivielu bibliotēku izveidi un ražošanu. Mēs varam arī sniegt pielāgotus pakalpojumus, piemēram, antivielu scFv ražošanu, lai apmierinātu jūsu vajadzības.

SAZINIETIES AR MUMS

Fāgu displeja bibliotēkas būvniecības pakalpojums

Alpha Lifetech jau daudzus gadus ir dziļi iesaistījies fāgu displeja tehnoloģijā. Tas ir izveidojis perfektu, stabilu fāgu displeja tehnoloģijas platformu, kas ietaupa laiku zinātniskajiem pētījumiem vai projektu pētījumiem un atvieglo turpmāko ražošanu. Alpha Lifetech var sniegt klientiem arī tādus pakalpojumus kā vhh antivielu ražošana, scFv antivielu ražošana, Fab antivielu ražošana.

Uzņēmumam Alpha Lifetech ir visaptveroša M13/T7 fāgu displeja platforma, lai nodrošinātu antivielu bibliotēku izveidi un ražošanu. Mēs varam sniegt arī pielāgotus pakalpojumus, piemēram, antivielu scFv ražošanu un augstas caurlaidības antivielu skrīningu, lai apmierinātu jūsu vajadzības.

Ievads fāgu displejā

Fāgu displeja tehnoloģija ir metode, kurā fāgi (vīruss, kas inficē baktērijas) tiek izmantoti, lai meklētu specifisku olbaltumvielu vai peptīdu funkcionālās saistošās molekulas. Fāgu antivielu bibliotēkas konstruēšanas metodes ietver Fab antivielu bibliotēkas konstruēšanu, antivielu scFv bibliotēkas konstruēšanu, nanodaļiņu bibliotēkas konstruēšanu utt. Atkarībā no bakteriofāgu veida tos var iedalīt M13, T7, T4, λ un citās sistēmās. Atkarībā no bibliotēkas veida to var iedalīt nejaušo peptīdu bibliotēkā, kDNS bibliotēkā, antivielu bibliotēkā un olbaltumvielu bibliotēkā. Fāgu displeja tehnoloģija ir vienkārši lietojama un lēta. Tomēr šī metode ierobežo molekulārās ģenētikas daudzveidību bibliotēkā, kas nevar ekspresēt pārāk garas sekvences,

Pašlaik plaši tiek izmantota fāgu displeja tehnoloģija. Starp tām ir ievērojami sasniegumi jaunu vakcīnu (lētu un efektīvu sintētisko vakcīnu) izpētē un izstrādē, antivielu zāļu (skrīninga enzīmu inhibitoru) izstrādē, šūnu signālu pārraidē (simulētu epitopu skrīnings) un antigēnu epitopu izpētē (monoklonālo antivielu sagatavošana).

Ievads T7 bakteriofāgā

T7 bakteriofāgs ir divpavedienu DNS, DNS garums ir 40 kb, un tā ir ietīta kapsīdā ar diametru 60 nm. Savienotājs starp galvu un asti ir gredzenveida struktūra, kas sastāv no vairākām gp8 kopijām. T7 bakteriofāga galva un kodols veido cilindrisku struktūru, kas saistās ar gp8 un var savienot galvu un asti.

1. attēls. T7 bakteriofāga shematisks attēlojums.(Atsauce: T7 fāgu displeja sistēmas attīstība (pārskats))

Ievads M13 bakteriofāgā

Bakteriofāgs M13 pieder pie pavedienveida fāgu grupas, ko kopā sauc par Ff fāgiem. Tā garums ir 900 nm un platums 6,5 nm. Tas satur vienpavedienu DNS (ssDNS) genomu ar 6407 bp garumu, kas sastāv no deviņiem gēniem, kas kodē 11 dažādus proteīnus. Starp tiem pieci proteīni ir apvalka proteīni, un seši proteīni ir iesaistīti fāga replikācijā un montāžā. Vislielākā apvalka proteīnu koncentrācija ir kapsīda proteīnā G8P, kas sastāv no aptuveni 2700 proteīna vienībām un veido apvalku ap hromosomu.

2. att. Bakteriofāga M13 shematisks attēlojums.(Atsauce: Antivielu fāgu displeja tehnoloģijas pamati)

Ievads fāgu displeja antivielu bibliotēkā

Antivielu atklāšana mūsdienu medicīnā ir kļuvusi arvien svarīgāka. Pastāv dažādas antivielu atklāšanas pieejas, taču medicīnas zinātnē vairāk tiek izmantota fāgu displeja antivielu bibliotēka.

Kopš 1990. gada fāgu bibliotēku konstruēšanai tiek izmantoti dažādi antivielu formāti, tostarp VH, VHH, scFv, diaķermeņi un Fab antivielas. scFv, kas sastāv no VH un VL strukturālajiem domēniem, ir vienas ķēdes antivielas, ko izmanto antivielu scFv bibliotēku konstruēšanai. scFv raksturo īss pussabrukšanas periods un zema imunogenitāte. Fab antivielu bibliotēka sastāv no VH, VL, CL un CH1, kas var ātri atsijāt ideālās antivielas ar augstu afinitāti. Pašlaik nanoķermeņu bibliotēku veido mazākā vienība, kas var saistīties ar mērķa antigēnu-VHH. VHH ir tādas priekšrocības kā vienkārša struktūra, mazs tilpums, augsta šķīdība, laba stabilitāte un vienkārša sagatavošana un ekspresija. Sintētiskās nanoķermeņu (Nb) bibliotēkas kļūst par pievilcīgu alternatīvu dzīvnieku imunizācijai stabilai, augstas afinitātes sintētiskai nanoķermenim. Parasti šie antivielu fragmenti tiek sapludināti ar M13 fāga G3P, un, klonējot lielu skaitu gēnu, kas kodē antivielu fragmentu, var ģenerēt lielas fāgu displeja antivielu bibliotēkas, no kurām var atlasīt daudzas dažādas antivielas.

Fāgu bibliotēkas izveides process

Fāgu bibliotēkas konstruēšanas process ir šāds: PCR amplifikācijai tiek izstrādāti specifiski primeri, kas iegūst produktus, kurus ar enzīmu ligē ar T7/M13 fāgu vektoru, un rekombinantā fāgu plazmīda tiek veiksmīgi konstruēta. Rekombinantā fāgu plazmīda tika transformēta TG1 receptoru šūnās, pēc tam pārklāta ar barotni, kas satur atbilstošas antibiotikas, un pēc transformatoru skrīninga tika veikta paplašināta kultūra. Pēc vairākiem kultivēšanas cikliem fāgs replicē replikācijas laikus baktērijās un veiksmīgi ekspresē mērķa proteīnu vai polipeptīdu. Pēc tam fāgu bibliotēka tiek attīrīta, lai noņemtu dažus piemaisījumus un nesaistītos fāgus.

Mainīgie reģioni (VH un VL) korelēja ar antivielu daudzveidību, un VH un VL tika ievietoti fāga vektorā kopā ar secību, kas kodē fāga proteīnu PIII. Pēc salikšanas fāga daļiņa tiek eksponēta un sapludināta ar minorā apvalka proteīna III N-terminālu, veidojot funkcionālu antivielu fragmentu, iegūstot bibliotēku, kas satur antivielu DNS secību.

Pēc imunizācijas beigām tika noteikts titrs, un pēc titra kvalificēšanas tika ņemtas dzīvnieka asinis. No asinīm tika izolēti limfocīti, ekstrahēta RNS, ar RT-PCR amplificēta mērķa fragmenta un iegūts V reģiona gēna fragments. V gēns tiek amplificēts, izmantojot specifisku praimeru.

Izveidotās dabiskās bibliotēkas ietver dzīvnieku vāji imunogēnas antivielas, kas var mērķēt uz jebkuru mērķi. Fāgu antivielas, kas specifiski saistās ar antigēnu, var savākt, izmantojot skrīninga metodes, kas fiksē vai iezīmē antigēnu.

Mērķa antigēns tiek fiksēts uz cieta nesēja, piemēram, mikroplates cauruma, vai savienots ar magnētisku lodīti. Pēc tam pievieno fāgu antivielu bibliotēku, lai to saistītu ar antigēnu. Pēc vairākām eluācijām zemas afinitātes vai nespecifiskie fāgi tiek noskaloti, un tie, kuriem ir specifiskas antivielas, tiek saglabāti.

Fāgu displeja pielietojums

*Antivielu atklāšana mūsdienu medicīnā kļūst arvien svarīgāka. Pastāv dažādas antivielu atklāšanas pieejas, taču medicīnas zinātnē vairāk tiek izmantota fāgu displeja tehnoloģija. Kopš 1990. gada fāgu bibliotēku veidošanai ir izmantoti dažādi antivielu formāti, tostarp VH, VHH, scFv, diaķermeņi un Fab antivielas.
*Fāgu peptīdu bibliotēkas ļauj ātri noteikt olbaltumvielu epitopu secību un ir kļuvušas par spēcīgu instrumentu epitopu un antigēnu receptoru mijiedarbības izpētei.
*Antivielu fragmenti tiek sapludināti ar M13 fāga G3P, un, klonējot lielu skaitu gēnu, kas kodē antivielu fragmentu, var ģenerēt lielas fāgu displeja antivielu bibliotēkas, no kurām var atlasīt daudzas dažādas antivielas.
*T7 fāgu displeja sistēmai ir daudz priekšrocību, tostarp vienkāršība, augsta drošība, stabilitāte, viegla uzglabāšana un transportēšana, tāpēc sistēma tiek izmantota profilaktiskās un terapeitiskās vakcīnās.
*T7 fāgu displeja sistēma var noteikt dažādus antigēnus, piemēram, patogēno mikroorganismu virsmas antigēnus un vēža antigēnus.

Fāgs