Monoklonālās antivielas (mAb) kā antivielu zāļu pionieris, vairāk nekā 100 monoklonālās antivielas ir apstiprinātas vēža, infekcijas slimību un zāļu izstrādes tirgus ārstēšanai, un tās parāda savu unikālo terapeitisko vērtību. Atsevišķu B šūnu antivielu tehnoloģija kā jaunas paaudzes antivielu izstrādes tehnoloģija var efektīvi un ātri izolēt antivielas no atsevišķām B šūnām, kas ir izrāviens antivielu ražošanas tehnoloģijā pēc hibridomas un fāgu displeja. Atsevišķu B šūnu šķirošanas tehnoloģiju var izmantot antivielu ģenerēšanai pret vairākām sugām, piemēram, trušiem, pelēm, kamieļiem, aitām un vistām. Atsevišķu B šūnu tehnoloģijai ir izcilas priekšrocības, piemēram, augsta specifiskums, augsta aktivitāte un augsta afinitāte. Balstoties uz atsevišķu B šūnu šķirošanas platformu, Alpha Lifetech ir priekšrocības skrīninga laikā un augstas kvalitātes antivielu iegūšanā. Tā var nodrošināt antigēnu dizainu, sintēzi un modifikāciju, dzīvnieku imunitāti, atsevišķu B šūnu bagātināšanas skrīningu, atsevišķu šūnu sekvencēšanu, augstas caurlaidības skrīningu, ekspresiju un attīrīšanu, kā arī vienas pieturas tehniskos pakalpojumus, piemēram, funkcionālo verifikāciju, lai apmierinātu klientu dažādās vajadzības.

Izvēlieties eksperimentālajiem dzīvniekiem (piemēram, pelēm, trušiem utt.) atbilstošu antigēnu imūnstimulācijai, lai tie varētu ražot specifiskas antivielas pret antigēnu.

Dzīvnieku imunizācija ir antivielu ģenerēšanas sākotnējais posms. Dzīvnieku imunizācija ir organisma paša humorālās imūnās atbildes mehānisma izmantošana, nepārtraukti stimulējot antigēnus, dzīvnieki rada spēcīgu imūnreakciju un pēc tam izdala specifiskas antivielas pret specifiskiem antigēniem.

B šūnas tika izolētas no imūnizētu dzīvnieku perifērajām asinīm, liesas vai limfmezgliem. Šīs B šūnas ir imunoloģiski stimulētas, lai tās ražotu antivielas pret specifiskiem antigēniem.

Ar fizikālām vai ķīmiskām metodēm (piemēram, blīvuma gradienta centrifugēšanu, magnētisko lodīšu atdalīšanu utt.) B šūnu bagātināšana, piemaisījumu šūnu atdalīšana uzlabo B šūnu tīrību un sekojošās atdalīšanas efektivitāti.

Lai atsijātu atsevišķas B šūnas no bagātinātām B šūnām, lai iegūtu mērķtiecīgas antivielas, var izmantot fluorescences aktivētu šūnu šķirošanu (FACS), magnētisko šūnu atdalīšanu (MACS), mikrofluidisko šūnu šķirošanu (MCS) vai citas augstas caurlaidības skrīninga metodes apvienojumā ar antigēniem specifisku marķēšanu.

Kad no jauktas B šūnu populācijas tiek izolēta viena B šūna, tās antivielu gēni ir jāsekvencē, izmantojot vienas šūnas sekvencēšanas tehnoloģiju, un jāanalizē, lai iegūtu smagās ķēdes mainīgā reģiona (VH) un vieglās ķēdes mainīgā reģiona (VL) DNS sekvences informāciju. Vienas šūnas sekvencēšanas tehnoloģija galvenokārt ietver trīs soļus: vienas šūnas izolēšanu, intracelulāru nukleīnskābju amplifikāciju un sekvencēšanas analīzi. Vienas šūnas sekvencēšanas princips ir amplificēt izolētu atsevišķu šūnu visa genoma DNS vai RNS pēdas, lai iegūtu pilnīgu genomu vai transkriptomu ar augstu pārklājumu augstas caurlaidības sekvencēšanai.

Ar augstas caurlaidības skrīninga palīdzību vienlaikus var iegūt tūkstošiem B šūnu antivielu gēnu sekvences, ievērojami paātrinot antivielu atklāšanas ātrumu. Šo sekvenču informāciju var tālāk izmantot antivielu bibliotēkas veidošanai un skrīningam.

2. att. Atsevišķu B šūnu uztveršanas, bibliotēkas veidošanas, augstas caurlaidības skrīninga un sekvencēšanas shematiska diagramma.(Atsauces avots: Masīvi paralēla vienas šūnas B šūnu receptoru sekvencēšana ļauj ātri atklāt dažādas antigēniem reaģējošas antivielas.)

(1) Rekombinants proteīns: ≥2,5 mg, proteīna tīrība >85%, proteīna molekulmasa lielāka par 10 kDa, šķīstošā proteīna koncentrācija no 0,5 līdz 5 mg/ml. Ja nepieciešama antigēna afinitātes attīrīšana, nepieciešami papildu 10 mg rekombinanta proteīna.

(2) Polipeptīdi un mazas molekulas: tīrs peptīds ≥10 mg, peptīda tīrība >90%, ne mazāk kā 10 AA, savieno KLH/BSA/OVA vai citus nesējproteīnus; Mazām molekulām iepriekš nepieciešama strukturāla novērtēšana.