Stabilu šūnu līniju būvniecības pakalpojums

Uzņēmums “Alpha Lifetech” jau daudzus gadus ir dziļi iesaistījies stabilu šūnu līniju konstruēšanas procesa izstrādē. Tas ir izveidojis perfektu stabilu šūnu līniju konstruēšanas procesa platformu ar vairāk nekā 300 audzēja šūnu un primāro šūnu veidiem, kas var nodrošināt stabilas šūnu līnijas, vienlaikus ietaupot laiku zinātniskajiem pētījumiem vai projektu pētījumiem un atvieglojot turpmāko ražošanu. “Alpha Lifetech” var sniegt klientiem arī tādus pakalpojumus kā celmu procesa izstrāde, celmu skrīnings, celmu konstruēšana, rekombinanto olbaltumvielu un antivielu ražošana, nodrošinot pētniecības bāzi jaunajām zālēm.

Alpha Lifetech ir lentivīrusu inficētu šūnu platforma, kas var pielāgot eksperimentālo procesu dažādiem šūnu stabilu transmutācijas celmu veidiem. CRISPR/Cas9 izslēgšanas šūnu līniju konstruēšanai mēs izmantojām gēnu izslēgšanas tehnoloģiju. Transmutācijas celmu stabilizēšanai tika izmantotas gēnu pārekspresijas un gēnu apklusināšanas metodes. Gēnu vietnes specifiska integrācija pabeidz virsotņu integrācijas šūnu līnijas konstruēšanas pakalpojumus.

Ievads stabilu šūnu līniju veidošanā

Stabila šūnu līnija ir šūnu līnija, kas integrē svešus gēnus saimniekšūnas genomā, lai svešos gēnus saimniekšūnā varētu stabili ekspresēt ilgu laiku. Princips ir reducēt svešo gēnu līdz vektoram ar noteiktu rezistenci, transfektēt saimniekšūnas, integrēt svešo gēnu saimnieka hromosomā un pārbaudīt vektorā esošos rezistences gēnus, lai iegūtu stabilas šūnu līnijas ar augstu mērķa proteīna ekspresiju vai stabilu mērķa gēna apklusināšanu, kas atbilst eksperimenta prasībām.

Uzņēmumam Alpha Lifetech ir neatkarīga uzglabāšanas darbnīca, perfekta šūnu sasaldēšanas un uzglabāšanas pārvaldības sistēma, kā arī vairāk nekā 300 audzēja šūnu un primāro šūnu veidu, no kuriem izvēlēties, kas paredzēti jūsu zinātniskajiem pētījumiem.

Stabils šūnu līnijas konstruēšanas process

Stabilas šūnu līnijas konstruēšanas metode

Stabilu šūnu līniju konstruēšanas metodes ietver lentivīrusu mediētu, transpozonu mediētu, CRISPR/Cas9 mediētu un plazmīdu skrīningu.

Lentivīrusu mediēta transkripcija ir viena no visbiežāk izmantotajām metodēm stabilu šūnu līniju konstruēšanai. Šīs pieejas priekšrocība ir gandrīz visu šūnu veidu inficēšana un ģenētiskā materiāla integrācija saimniekšūnas genomā stabilai ekspresijai ilgā laika periodā. Tomēr šai sistēmai ir zināmi ierobežojumi, un lentivīrusam ir ierobežota iepakošanas kapacitāte, tāpēc tas nav piemērots gēnu ar gariem transkripcijas reģioniem transkripcijai.

Salīdzinot ar lentivīrusu mediēto, transpozonu mediētajai metodei nav ierobežojumu attiecībā uz gēnu lielumu, un, nepārtraukti optimizējot tehnoloģiju, transpozonu ievietošanas efektivitāte ir vairākkārt uzlabojusies. Trūkums ir tāds, ka noteikti primāro šūnu ierobežojumi un šūnas ir grūti transfektēt.

CRISPR/Cas9 mediētais process ietver crispr gēna izslēgšanu un crispr gēna nokautu. Crispr gēna nokauts attiecas uz DNS dubultpavedienu pārraušanas ieviešanu, kā rezultātā tiek zaudēta mērķa gēna funkcija. Crispr gēna nokauts attiecas uz svešu DNS fragmentu ievietošanu specifiskos gēnos, kurus var izmantot, lai labotu bojātus gēnus vai ieviestu jaunus funkcionālus gēnus.

Plazmīdu skrīnings ir primitīvākā šūnu līnijas konstruēšanas shēma, kurā tikai veiksmīgi jātransfektē mērķa plazmīda šūnā un jāizmanto atbilstošā rezistence ilgtermiņa skrīningā. Tad ir zināma varbūtība iegūt stabilas šūnu līnijas.

Dažādu stabilu šūnu līniju konstruēšanas metodes

Starpniecības metode	Lentivīrusu sistēma	Transpozonu sistēma	CRISP/Cas9 mediēts	Plazmīdu skrīnings
Pārvadātāja ietilpība	5 KB	10 KB	5 KB	10 KB
Mediētā efektivitāte	Augsts	Normāls	Normāls	Zems
Laika skala	1–2 nedēļas	3–4 nedēļas	3–4 nedēļas	4–6 nedēļas
Priekšrocība	Ātri un efektīvi	Drošība un stabilitāte	Fiksēto punktu integrācija	Zemākas izmaksas
Trūkums	Biodrošības risks	Izteiksmes pārpilnība normāls	CAS9 transdukcija ir sarežģīta un dārga	Zema efektivitāte un nestabilitāte

Tehniskas grūtības stabilu šūnu līniju veidošanā

Pirms procesa palielināšanas neliels bioreaktors tiek izmantots, lai noteiktu tādus parametrus kā gāze, kultūras šķidruma sistēma, minimālais hidrodinamiskais spriegums, kas tiek piemērots šūnām, utt., lai nodrošinātu starpmēroga kultūru. Tomēr, pat ja atbilstošie procesa parametri tiek noteikti, lielo bioreaktoru vide ražotāja telpā būs nevienmērīga, un ir viegli kļūdīties. Alpha Lifetech ir daudzu gadu pieredze procesu mēroga kultūru veidošanā, kas ļauj zināmā mērā izvairīties no kļūdām, samazināt riskus un ievērojami uzlabot veiksmes rādītāju. Vienlaikus Alpha Lifetech nodrošina izmantoto izejvielu un barotņu partiju konsekvenci, samazinot šūnu kultūras procesa mēroga palielināšanas kļūmju līmeni.

Uzņēmumam Alpha Lifetech ir visaptveroša stabila šūnu līnijas procesa izstrādes platforma, lai nodrošinātu šūnu līniju stabilitāti ražošanas laikā. Mēs varam arī sniegt pielāgotus pakalpojumus, kas atbilst jūsu vajadzībām.

Stabilu šūnu līniju būvniecības pakalpojuma saturs

Saturs	Laika skala
Kultūras HEK293 šūnu līnija, ko nodrošina klients.	3–5 mēneši
sgRNA-Cas9 plazmīdas konstruēšana (ar skrīninga gēnu G418).
sgRNA-Cas9 un remonta DNS veidne tika kopīgi pārnesta uz HEK293 šūnu līniju.
Monoklonālo šūnu līniju skrīnings (GFP gēns knockīna pozitīvs klons).
Piegāde: Vektors, GFP gēna knock-in celms, sekvencēšanas rezultāti, visi neapstrādātie dati, laboratorijas ziņojums

Šūnas var izsekot

Šūnas tiek iegādātas no profesionālām organizācijām, piemēram, ATCC, un tās var sniegt pierādījumus, ka tās atbilst jūsu reģistrācijas prasībām.

Ražošanas priekšrocība

Uzņēmumam “Alpha Lifetech” ir daudzu gadu pieredze dažādu attīstības vajadzību apmierināšanā; mums ir dažādas šūnas, neatkarīga uzglabāšanas darbnīca, perfekta šūnu sasaldēšana un uzglabāšanas pārvaldības sistēma.

projekta kvalitātes kontrole

Katrs projekts tiek pakļauts stingriem kvalitātes kontroles procesiem, lai nodrošinātu, ka klientiem tiek piegādātas šūnu līnijas, kas atbilst augstiem standartiem.

Tehniskā priekšrocība

Papildus inženieriem ar plašu pieredzi šūnu jomā, mums ir arī uzlaboti tehnoloģiju evolūcijas algoritmi reaktoru apstākļu uzlabošanai un procesa parametru modificēšanai.

Ja jums ir kādi jautājumi, lūdzu, sazinieties ar mums jebkurā laikā.

Leave Your Message

Piedāvātais pakalpojums

0102