Технологијата на фажен дисплеј се состои во вметнување на туѓиот целен ген во специфичната позиција на протеинот на капсидот на фагот и експресија на туѓиот ген на површината на фагот без да се влијае на нормалната функција на фагот. По неколку рунди на скрининг, конечно е добиен целен протеин со силна специфичност и висока биолошка активност.

Со оваа технологија може да се генерираат библиотеки со антитела со висок капацитет. Циклусот на скрининг е краток, оперативниот процес е едноставен, а опсегот на апликации е широк, овозможувајќи идентификација на оптимални секвенци за целни пептиди или протеини. Во апликации поврзани со вируси, истражувачите можат да откријат антитела кои се врзуваат за критични вирусни епитопи со скрининг на големи библиотеки со антитела. Овој процес може да го попречи влегувањето, репликацијата или механизмите на имунолошко избегнување на вирусите, со што се воспоставува основа за третман на болести.

Технологијата на фажен дисплеј е пошироко користена од хибридом технологијата, која е ограничена на производство на мала количина на антитела против специфични имуногени. Спротивно на тоа, технологијата на фажен дисплеј може да претстави цела библиотека со антитела добиени од различни имуни видови.

Технологијата за прикажување на фази има широк спектар на апликации, вклучувајќи скрининг на рецепторите на патогени микроорганизми, проучување на интеракциите на протеините, следење на преносот на сигнали помеѓу клетките, дијагностицирање на болести кај животните и развој на вакцини, меѓу другите области.

Технологијата на фажен дисплеј нуди бројни предности и може да се примени во различни области. Сепак, примарниот предизвик во развојот на рекомбинантни антитела со користење на методот на фажен дисплеј е сложеноста и цената поврзана со процесот. Овој пристап бара интеграција на техники на молекуларна биологија, вклучувајќи мутација, клонирање и експресија, заедно со имунолошки, биохемиски и биофизички анализи за идентификување и карактеризирање на посакуваните антитела.

Презентацијата на антиген е многу важна алка. Методите на презентација на антиген главно вклучуваат директна презентација на обложен антиген, индиректна презентација на обложен антиген, презентација на антиген преку скрининг на цели клетки, презентација на антиген преку липозоми, нано-фосфолипидни дискови и VLP.

Методот на директно обложување е релативно едноставен, но конформацијата на антигенот е лесна за промена, а индиректната операција на обложување е комплицирана, но може да ја одржи конформацијата на антигенот и да ја подобри ефикасноста на презентацијата. Скринингот на клетките може да ја симулира вистинската сцена in vivo, но постои проблем со неспецифично врзување. Нано-фосфолипидниот диск има мала големина, висока ефикасност на испорака и добра стабилност; VLP се споени со антиген или обвиткани со антиген, кој има висока имуногеност и добра безбедност и може да предизвика силен имунолошки одговор.

Ако концентрацијата е прениска, веројатноста за врзување со фагот ќе се намали, што ќе резултира со намалена ефикасност на скринингот. Спротивно на тоа, претерано висока концентрација може да ја зголеми веројатноста за неспецифично врзување, да го зголеми позадинскиот сигнал и да го попречи идентификувањето на позитивните клонови.

За да се избегнат високи температури, силни киселини и алкалии, може да се примени метод на благ фиксирање. За да се намали оштетувањето на структурата на антигенот, користени се метод на индиректно обложување и систем биотин-стрептавидин. Ако антигенот е мембрански протеин, тој може да се прикаже на површината на интактни клетки или да се користи за симулирање на мембранската средина, како што е нано-диск, за да се одржи неговата природна конформација на мембранскиот протеин.

Покрај рутинските експерименти како што се ELISA, Western Blotting (WB) и имунофлуоресценција (IF), техниките за детекција со површинска плазмонска резонанца (SPR) и биослојна интерферометрија (BLI) може да се користат за следење на процесите на врзување и дисоцијација на антитела и антигени во реално време, овозможувајќи одредување на афинитет и кинетички параметри.

Фажниот дисплеј може да се користи за генерирање моноклонални антитела со висок афинитет за широк спектар на видови што произведуваат антитела, вклучувајќи, но не ограничувајќи се на луѓе, глувци, стаорци, зајаци, кокошки, камили, алпаки, крави, кучиња, овци, мајмуни и ајкули.

Технологијата на изградба на библиотеки со глувчешки антитела е добро воспоставена, економична и има кратко експериментално времетраење, што ја прави погодна за прелиминарно скрининг на антитела и основни истражувања. Зајачките антитела покажуваат силен афинитет и специфичност, со поширок опсег на препознавање на епитопите во споредба со глувчешките антитела. Човечките антитела можат директно да се добијат од библиотеките со човечки антитела, со што се избегнуваат потенцијални имунолошки реакции што можат да се појават кога хетерологни антитела се администрираат во човечкото тело. Овој пристап има значајна вредност во истражувањето и развојот на лекови, особено во создавањето на терапевтски антитела.

Животинските имуногени генерално се поделени на протеински антиген, полипептиден антиген, антиген на нуклеинска киселина и антиген поврзан со патоген, меѓу кои антигенот поврзан со патоген вклучува вирусен антиген (комплетна вирусна честичка, вирусен протеин, неструктурен вирусен протеин итн.), бактериски антиген (комплетен бактериски екстракт, компонента на клеточниот ѕид, секретиран протеин, токсин итн.) и паразитски антиген.

Прилагодете ги имуногените со замена на имуните антигени со рекомбинантни протеини и замена на честичките на вирусот за гаснење пожар со структурни протеини на вируси. Прилагодете го експерименталниот дизајн и изменете ја имунолошката доза.

Имуногеноста може да се зголеми со поврзување на антигени со протеини-носачи, како што е говедскиот серумски албумин. Дополнително, имунолошките адјуванси, вклучувајќи го Фројндовиот адјуванс и алуминиумскиот адјуванс, може да се користат за продолжување на времето на престој in vivo и стимулирање на активирањето и пролиферацијата на имуните клетки, со што се подобрува имуногеноста.

Библиотека на фажни антитела е колекција од разновидни фажни антитела создадени со составување на комплетен сет на гени со варијабилен регион од антитела во фажни вектори и нивно експресирање на површините на фагите. Овој процес резултира со формирање на библиотека на фажни антитела.

Општиот процес на фажно прикажување вклучува неколку клучни чекори: екстракција на периферни крвни мононуклеарни клетки (PBMC) од имунизирани животни, изолирање на вкупната РНК и нејзина транскрипција во комплементарна ДНК (cDNA), амплификација на целниот ген со користење на технологија на полимеразна верижна реакција (PCR), клонирање на целниот ген во фажен вектор и трансформирање на векторот во клетка домаќин за експресија. Овој процес резултира со изградба на библиотека за фажно прикажување, која може брзо да идентификува антитела со висок афинитет. Последователно, оваа библиотека може да послужи како вреден ресурс за развој на вакцини, терапевтски лекови и дијагностички реагенси.

Според изворот на библиотеката со антитела, библиотеките со фажни антитела можат да се категоризираат во библиотеки со имуни фажни антитела и библиотеки со нативни фажни антитела. Примарната разлика помеѓу овие два типа лежи во тоа дали животните се вакцинирани. Дополнително, библиотеките со нативни антитела можат да се генерираат преку полусинтеза или синтеза.

Постојат два основни индекси за оценување на квалитетот на библиотеката со антитела: капацитет за складирање и разновидност. Големиот капацитет за складирање, во комбинација со висока разновидност, обезбедува ефикасно скринирање на антитела со висок афинитет и специфичност.

Во процесот на биолошка елутриација, библиотеката за прикажување се инкубира со фиксни цели, а потоа се мие екстензивно за да се отстранат нереактивните фаги. Конјугатите обично се елуираат со употреба на кисел или раствор со висока содржина на сол, а потоа се амплификуваат во соодветни клетки домаќини за збогатување. По 3 до 5 рунди на скрининг, се добиваат антитела со висок афинитет.

Методите за скрининг на фаги првенствено вклучуваат панинг во цврста фаза, скрининг во течна фаза и скрининг базиран на клетки. Изборот на соодветен метод за скрининг треба да ги земе предвид карактеристиките на целните молекули, целите на процесот на скрининг и лабораториската средина.

Позитивното скрининг е најфундаменталниот метод за скрининг на фажни антитела кои се врзуваат за целните протеини. Негативното скрининг служи за елиминирање на неспецифични антитела. За време на процесот на скрининг на фажни антитела, неспецифични антитела може да се идентификуваат поради пречки од етикетата на целниот антиген, материјалите или други антигени со структурни сличности со целниот антиген. Во такви случаи, негативното скрининг може да ја зголеми ефикасноста на процесот на скрининг.

Методите за верификација на антитела обично вклучуваат ELISA, Western Blotting (WB), проточна цитометрија, имунопреципитација (IP), имунофлуоресценција (IF), имунохистохемија и разни други експериментални техники. Алфа Лајфтек поседува богато искуство во откривање на антитела и има професионален експериментален тим, кој ја обезбедува ефикасноста на антителата во последователните експерименти.