Служба за развој на моноклонални антитела

Алфа Лајфтек може да обезбеди предвидување на епитопите, синтеза на пептиди, експресија на протеини, производство на поликлонални или моноклонални антитела, како и прочистување на антитела од клеточна култура, асцитна течност или цел серум.

КОНТАКТИРАЈТЕ НÈ

Служба за развој на моноклонални антитела

Алфа Лајфтек Инк.може да обезбеди предвидување на епитопите, синтеза на пептиди, експресија на протеини, производство на поликлонални или моноклонални антитела, како и прочистување на антителата од клеточна култура, асцитна течност или цел серум.

Алфа Лајфтек Инк.има искуство во обезбедување на различни услуги за стабилни клеточни линии на клиентите, вклучувајќи хибридомски клетки, клеточни линии за уредување на геном, нокаутирани клеточни линии и клеточни линии со прекумерна експресија. Се обидуваме да понудиме напредни услуги за клеточни линии по мерка на секој клиент, а нашите услуги се докажани и доверливи.

Стратегија за развој на антитела

1. Дизајн и подготовка на антиген
Овие антигени можат да бидат протеини, пептиди или други молекули. Дизајнирањето на имуногени бара сеопфатен пристап кој ги интегрира познавањата за структурата на антигените, имунологијата и системите за испорака. Алфа Лајфтек има технологија за дизајн на антигени која може да дизајнира имуногени за клиенти на кои им се потребни.
Алфа Лајфтек обезбедува рекомбинантни протеински производи за клиентите да можат да изберат. Имаме различни системи за експресија на протеини, како што се систем за експресија на E. coli, систем за експресија на квасец, систем за експресија на бакуловирус-инсект, систем за експресија на цицачи итн., за да ги произведеме рекомбинантните протеини што ви се потребни за истражување.

2. Имунизација на животни
Алфа Лајфтек може да им обезбеди имуногени на клиентите, а достапни ви се имуни животни како што се глувци, зајаци, овци, алпаки, заморчиња, хрчаци итн.

3. Методи за производство на моноклонални антитела

●Производство на МАБ со хибридом технологија
Хибридомот е хибридна клетка произведена со фузија на два вида клетки, имено клеточна линија на миелом од глушец и плазма клетки (лимфоцит Б), кај кои хетерозиготната клетка може да произведува континуирани антитела против антигенот од интерес ин витро. Производството на клеточна линија на хибридом се состои од три дела: дизајн на антиген (хаптени, мали молекули и пептиди), имунизација на животни, фузија на клетки и скрининг на позитивни клонови. Користејќи уникатни методологии за имунизација, добиваме исклучително висока ефикасност на фузија на клетки (1-10 хибридоми на илјада Б-клетки) и високи титри на антитела, максимизирајќи ја нашата стапка на успех во последователните аналитички тестови кои вклучуваат биохемиски скрининг, анализи базирани на клетки ин витро и студии на животни.

●Производство на МАБ со технологија на фажен дисплеј
Фажниот приказ нуди уште еден метод за генерирање моноклонални антитела. Б-лимфоцитите се изолирани од животинска крв и нивната mRNA се екстрахира. Преку PCR, оваа mRNA се претвора во cDNA, која ги засилува сите VH и VL сегменти. Овие сегменти потоа се клонираат во вектор, обично како едноверижни варијабилни фрагменти (scFv), заедно со PIII протеинот на бактериофаг. Последователно, овој конструкт се користи за инфицирање на E. coli, што резултира со создавање библиотека што содржи приближно 10^10 клетки преку инокулација со помошен фаг. E. coli потоа е во состојба да го лачи бактериофагот што ги крие VH и VL сегментите како дел од својата обвивка. После тоа, специфични VH и VL сегменти насочени кон антигенот од интерес можат да се изберат и да се користат за реинокулација на E. coli со бактериофагот. Клетките што го содржат плазмидот потоа се изолираат и секвенционираат.

4. Скрининг за фузија

●Фузија и селекција на клетки
Собраните Б-клетки потоа се спојуваат со клетки на миелом, кои се канцерогени клетки кои можат да се размножуваат на неодредено време во култура. Фузијата обично се постигнува со употреба на техника како што е фузија на полиетилен гликол (PEG).
По фузијата, хибридомските клетки се култивираат во селективен медиум кој им овозможува само на хибридомите да преживеат. Медиумот обично содржи аминоптерин, кој го спречува растот на нефузираните миеломски клетки.

●Скрининг и затнување
Добиените хибридомски клетки се скринираат за производство на антитела специфични за целниот антиген. Ова обично се прави со употреба на техники како што се ензимски поврзан имуносорбентен тест (ELISA), Western blot, имунопреципитација и проточна цитометрија.

Откако ќе се идентификуваат хибридомските клетки што го произведуваат антителото, тие се клонираат за да се генерира популација од идентични клетки. Ова осигурува дека антителото произведено од секоја хибридомска клетка е идентично.

5. Функционална верификација на антитела
Алфа Лајфтек обезбедува функционална валидација на антитела, како што се Western blotting, имунохистохемија или функционални анализи, за карактеризирање на моноклонални антитела и потврдување на специфичноста, афинитетот и функционалноста на антителата.

6. Оптимизација на антитела
Прочистувањето на антитела од супернатантот на културата со употреба на техники како што се афинитетна хроматографија на протеин А или протеин G, а Алфа Лајфтек исто така може да обезбеди методи за модификација на антитела за подобрување на афинитетот на антителата.

7. Производство на антитела
Алфа Лајфтек може да ги евалуира кандидатските антитела за апликации за скрининг со висок проток и производство на големи размери.

често поставувани прашањачесто поставувани прашања

Најчесто поставувани прашања за развој на моноклонални антитела

1

Како да се избере вистинскиот фузиониран хибридом?

За време на процесот на фузија, 10-15 микротитерски плочи од 96 бунари се засејуваат со смесата од фузиониран хибрид. Секоја плоча се храни со HAT-IMDM селекторски медиум и се одржува во инкубатор на јаглерод диоксид на 37 степени Целзиусови. 9-14 дена по фузијата, хибридните супернатанти се тестираат за присуство на специфичното антитело од интерес.
2

Како да се подобри ефикасноста на селекцијата?

Фузијата на плазма клетките со нивните миеломски еквиваленти не е 100% ефикасна. Дури и под оптимални услови и најефикасна стимулација, клеточната фузија сè уште произведува мешавина од нефлуентни и конфлуентни клетки кои треба да се одвојат. За да се подобри ефикасноста на процесот на селекција, на миеломските клетки што се користат за фузија им недостасува HGPRT, клучен ензим во патеката за спасување на нуклеотиди. Смесата потоа беше култивирана во HAT медиум, каде што само клетките со ензимот HGPRT, хибридоми што наследиле HGPRT од плазма клетките, беа одржливи.
3

Како да се скринираат хибридомски клеточни линии за активност на антитела?

Евалуацијата на хибридните сорти е клучен чекор. Вообичаено, скринингот на супернатантот на хибридоми, клонови и субклонови се обезбедува преку ензимски поврзан имуносорбентен тест (ELISA), тест за Western blot и сортирање на клетки со активирана флуоресценција (FACS). Ќе избереме да го спроведеме целото скрининг на супернатантот во наша сопствена лабораторија.
4

Дајте детални упатства за тоа како да се спроведе скрининг на активноста на антителата?

Супернатите на хибридомите што треба да се тестираат може да се движат од 500 до 1.440 примероци и ќе бидат подготвени за тестирање до 9-ти до 14-тиот ден. Може да се појавиме во период од три до пет дена или сите може да бидат подготвени истиот ден, па затоа е важно лабораторијата на клиентот да биде подготвена неколку недели однапред со работа на специфични секундарни скрининг анализи по избор.
5

Зошто позитивните хибридоми треба да се субклонираат?

Откако беа идентификувани позитивни бунари за време на почетната постапка на ELISA скрининг, хибридомите беа префрлени во поголем волумен, т.е. плочи со 24 бунари, како подготовка за постапката на субклонирање. Субклонирањето на хибридомите обично се изведува со метод на ограничено разредување за да се обезбеди изолација на стабилни моноклони. Техниката вклучува разредување на хибридомските култури и нивно дисперзирање во плочи со 96 бунари за да се постигне моноклоналност (една клетка по бунар). Треба да се извршат најмалку две ограничени разредувања за да се намали ризикот од развој на мешани популации на хибридоми.
6

Кои се придобивките од користењето на хибридом технологијата за откривање на антитела?

Хибридните клеточни линии се пофалени за нивната способност да произведуваат антитела со висок афинитет, стабилност и специфичност на најисплатлив начин.