1960-ൽ, ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡികൾ എന്ന ആശയം മുന്നോട്ടുവച്ചു. ബിസ്പെസിഫിക് മോണോക്ലോണൽ ആന്റിബോഡികൾ എന്നും അറിയപ്പെടുന്ന ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡികൾ, ജനിതക എഞ്ചിനീയറിംഗ് സാങ്കേതികവിദ്യ ഉപയോഗിച്ച് കൃത്രിമമായി സമന്വയിപ്പിച്ച ആന്റിബോഡികളാണ്. ഒരു എഞ്ചിനീയറിംഗ് കൃത്രിമ ആന്റിബോഡി എന്ന നിലയിൽ, ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡികൾ സാധാരണയായി IgG ഉപവിഭാഗത്തിൽ പെടുന്നു, കൂടാതെ CD3 ഉപയൂണിറ്റിനെ ലക്ഷ്യം വച്ചുള്ള ഒരു ആന്റിജൻ ബൈൻഡിംഗ് ഫ്രാഗ്മെന്റ് അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡികൾക്ക് രണ്ട് വ്യത്യസ്ത ആന്റിജനുകളെയോ ഒരു ആന്റിജന്റെ രണ്ട് വ്യത്യസ്ത എപ്പിറ്റോപ്പുകളെയോ ഒരേസമയം ബന്ധിപ്പിക്കാനും തിരിച്ചറിയാനും കഴിയുന്ന രണ്ട് നിർദ്ദിഷ്ട ആന്റിജൻ ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റുകളുണ്ട്. മോണോക്ലോണൽ ആന്റിബോഡികളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡികൾക്ക് ഒരു അധിക നിർദ്ദിഷ്ട ആന്റിജൻ ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റ് ഉണ്ട്, അതിനാൽ ശക്തമായ പ്രത്യേകതയും ടാർഗെറ്റിംഗ് കഴിവും ഉണ്ട്, ഇത് ട്യൂമർ കോശങ്ങളെ കൂടുതൽ കൃത്യമായി ടാർഗെറ്റുചെയ്യാനും ടാർഗെറ്റ് വിഷാംശം കുറയ്ക്കാനും കഴിയും. ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡികൾക്ക് ഒരേസമയം ഒന്നിലധികം ജൈവ പ്രവർത്തനങ്ങൾ നടത്താൻ കഴിയും, ഉദാഹരണത്തിന് രോഗപ്രതിരോധ കോശങ്ങളെ റിക്രൂട്ട് ചെയ്യുക, സിഗ്നലിംഗ് പാതകൾ തടയുക, ട്യൂമർ കോശങ്ങളെ നേരിട്ട് കൊല്ലുക. ആദ്യകാല ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡികൾ പ്രധാനമായും കെമിക്കൽ കൺജ്യൂഷൻ അല്ലെങ്കിൽ സെൽ ഫ്യൂഷൻ വഴിയാണ് തയ്യാറാക്കിയത്, എന്നാൽ ക്രമരഹിതമായ സംയോജനവും ടാർഗെറ്റ് കോമ്പിനേഷൻ ഒറ്റപ്പെടുത്തുന്നതിലെ ബുദ്ധിമുട്ടും കാരണം ഈ രീതി സാവധാനത്തിൽ പുരോഗമിച്ചിരിക്കാം. ജനിതക എഞ്ചിനീയറിംഗ് സാങ്കേതികവിദ്യയുടെ തുടർച്ചയായ വികസനത്തോടെ, നോട്ട്സ് ഇൻ ഹോളുകൾ (KIH), ക്രോസ്മാബ്, DVD Ig, തുടങ്ങിയ നിരവധി പുതിയ സാങ്കേതിക പ്ലാറ്റ്‌ഫോമുകൾ വികസിപ്പിച്ചെടുത്തിട്ടുണ്ട്. ഈ പ്ലാറ്റ്‌ഫോമുകൾ ഹെവി ചെയിൻ, ലൈറ്റ് ചെയിൻ പൊരുത്തക്കേടുകൾ പോലുള്ള പ്രശ്നങ്ങൾ ഫലപ്രദമായി പരിഹരിക്കുകയും ബൈസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡികളുടെ ഏകീകൃതതയും വിളവും മെച്ചപ്പെടുത്തുകയും ചെയ്യുന്നു.

ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡി ഉൽപാദനത്തിനുള്ള പ്രധാന രീതികളിൽ കെമിക്കൽ കപ്ലിംഗ്, ഫോർ സോഴ്‌സ് ഹൈബ്രിഡോമ, ജനിതക എഞ്ചിനീയറിംഗ് ആന്റിബോഡി തയ്യാറാക്കൽ എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്നു. അവയിൽ, കെമിക്കൽ കപ്ലിംഗ് രീതി രണ്ട് കേടുകൂടാത്ത IgG അല്ലെങ്കിൽ രണ്ട് F (ab ') 2 ആന്റിബോഡി ശകലങ്ങളെ ഫ്താലിമൈഡ്, ഡൈതിയോഅസൈൽബെൻസോയിക് ആസിഡ് തുടങ്ങിയ കെമിക്കൽ കപ്ലിംഗ് ഏജന്റുകൾ ഉപയോഗിച്ച് ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡികളിലേക്ക് ജോടിയാക്കുന്നു. ഈ രീതി ലളിതവും പ്രവർത്തിക്കാൻ എളുപ്പവുമാണ്, പക്ഷേ ഇത് ആന്റിജൻ ബൈൻഡിംഗ് സൈറ്റിനെ തകരാറിലാക്കുകയും ആന്റിബോഡി പ്രവർത്തനം കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്തേക്കാം, കൂടാതെ കപ്ലിംഗ് ഏജന്റിന് തന്നെ ഒരു നിശ്ചിത അളവിലുള്ള കാർസിനോജെനിസിറ്റിയും ഉണ്ട്. ഫോർ സോഴ്‌സ് ഹൈബ്രിഡോമ രീതി രണ്ട് വ്യത്യസ്ത ഹൈബ്രിഡോമ സെൽ ലൈനുകളിൽ നിന്നുള്ള സോമാറ്റിക് കോശങ്ങളുടെ സംയോജനത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ്, അതുപോലുള്ള മൗസ് IgG പ്രകടിപ്പിക്കുന്നു. ജനിതക എഞ്ചിനീയറിംഗ് സാങ്കേതികവിദ്യയിലൂടെ, ആന്റിബോഡികൾ ജനിതകമായി പരിഷ്കരിച്ച് ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡികൾ രൂപപ്പെടുത്താൻ കഴിയും. രണ്ട് വ്യത്യസ്ത മോണോക്ലോണൽ ആന്റിബോഡികൾ നിർമ്മിക്കപ്പെട്ടു, കൂടാതെ രണ്ട് ആന്റിബോഡികളുടെയും ഫാബ് ശകലങ്ങൾ അല്ലെങ്കിൽ ഹെവി ചെയിൻ, ലൈറ്റ് ചെയിൻ വേരിയബിൾ മേഖലകൾ വെവ്വേറെ പിളർന്നു. ക്രോസ്-ലിങ്കിംഗ് റിയാക്ഷൻ അല്ലെങ്കിൽ ചെയിൻ റീകോമ്പിനേഷൻ സാങ്കേതികവിദ്യ വഴി, രണ്ട് ശകലങ്ങളും സംയോജിപ്പിച്ച് ഒരു ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡി രൂപപ്പെടുത്തി. ജനിതക എഞ്ചിനീയറിംഗ് സാങ്കേതികവിദ്യയുടെ സങ്കീർണ്ണത താരതമ്യേന ഉയർന്നതാണെങ്കിലും, ആന്റിബോഡികളുടെ ഘടനയും പ്രവർത്തനവും ക്രമീകരിക്കുന്നതിന് ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡി ഉൽപാദനത്തിന് നിലവിൽ ഏറ്റവും സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന രീതിയാണിത്. ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡി ഡിസൈൻ നടത്തുമ്പോൾ, ആന്റിബോഡി ക്രോസ് റിയാക്റ്റിവിറ്റിയുടെ തത്വം ഉപയോഗപ്പെടുത്താം, എന്നാൽ ആന്റിബോഡി ക്രോസ് റിയാക്റ്റിവിറ്റി നിർദ്ദിഷ്ടമല്ലാത്ത പ്രതികരണങ്ങൾക്ക് കാരണമായേക്കാം, അതിനാൽ ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡി തെറാപ്പി പോലുള്ള ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡി ഡിസൈനിന്റെ പ്രായോഗിക പ്രയോഗത്തിൽ ഇത് ശ്രദ്ധാപൂർവ്വം പരിഗണിക്കും.

ഉയർന്ന പരിശുദ്ധിയുള്ള ടാർഗെറ്റ് ആന്റിബോഡികളെ വേർതിരിച്ച് ശുദ്ധീകരിക്കുന്ന പ്രക്രിയയാണ് ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡി ശുദ്ധീകരണം. ചില ലയിക്കുന്ന മാലിന്യങ്ങൾ നീക്കം ചെയ്യാൻ സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ, ഡീപ്പ് ഫിൽട്രേഷൻ എന്നീ രണ്ട് രീതികൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു. ടാർഗെറ്റ് ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡി തുടക്കത്തിൽ അഫിനിറ്റി ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി വഴി പിടിച്ചെടുക്കുന്നു. ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡികൾ പോലുള്ള IgG-കൾക്ക്, പ്രോട്ടീൻ A അഫിനിറ്റി ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി ഉപയോഗിക്കുന്നു, അതേസമയം ബിസ്പെസിഫിക് ആന്റിബോഡികൾ പോലുള്ള IgG-കളല്ലാത്തവയ്ക്ക്, ലൈറ്റ് ചെയിൻ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള അഫിനിറ്റി ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി ഉപയോഗിക്കാം. പിന്നീട്, ഒരു നിശ്ചിത സമയത്തേക്ക് കുറഞ്ഞ pH സാഹചര്യങ്ങളിൽ ആന്റിബോഡി ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുന്നു, ഇത് വൈറസ് ആവരണത്തിന്റെ ഉപരിതലത്തിലെ പ്രോട്ടീൻ ഘടനയെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നു, അതുവഴി കോശങ്ങളെ ബാധിക്കാനുള്ള കഴിവ് നഷ്ടപ്പെടുന്നു. ഹോസ്റ്റ് സെൽ പ്രോട്ടീനുകൾ (HCP) പോലുള്ള മാലിന്യങ്ങൾ കൂടുതൽ നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി ഇന്റർമീഡിയറ്റ് ഡീപ് ഫിൽട്രേഷൻ നടത്തുന്നു. അയോൺ എക്സ്ചേഞ്ച് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി പോലുള്ള രീതികളിലൂടെ ആന്റിബോഡികളുടെ പരിശുദ്ധി മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നു, കൂടാതെ ഏതെങ്കിലും അവശിഷ്ട വൈറസുകൾ നാനോഫിൽട്രേഷൻ അല്ലെങ്കിൽ അൾട്രാഫിൽട്രേഷൻ ടെക്നിക്കുകൾ വഴി നീക്കംചെയ്യുന്നു. ഒടുവിൽ, സാമ്പിൾ കേന്ദ്രീകരിച്ച് അനുയോജ്യമായ ഒരു ഫോർമുലേഷൻ ബഫർ ഉപയോഗിച്ച് മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുന്നു.