Хамаарлын хэмжилтийн платформ

Octet болон Biacore-T2000 платформ дээр суурилсан Alpha Lifetech нь найдвартай хамаарлын тодорхойлолтын үйлчилгээ үзүүлж чадна. Бид эсрэгбие, эс, уураг, жижиг молекул гэх мэт олон дээжинд хамаарлын тодорхойлолт хийж чадна. Гадаргуугийн плазмон резонанс (SPR) болон био давхаргын интерференцийн (BLI) хамаарлын тодорхойлолт зэрэг янз бүрийн хамаарлын тодорхойлолтын аргууд байдаг.

Alpha Lifetech нь ELISA-г хамаарлын тодорхойлолттой хослуулсан мэргэжлийн, нарийвчлалтай хамаарлын тодорхойлолтын платформтой бөгөөд дэлхий даяарх үйлчлүүлэгчдэд мэргэжлийн, үр ашигтай, хурдан бөгөөд нарийвчлалтай хамаарлын тодорхойлолтын үр дүнг өгдөг. Бид үйлчлүүлэгчдэд сонгох хоёр аргыг санал болгож чадна: Шуурхай хамаарлын тодорхойлолт болон Нарийвчилсан хамаарлын тодорхойлолт. Шуурхай хамаарлын тодорхойлолт нь нэг концентрацийн тодорхойлолт бөгөөд нарийн хамаарлын тодорхойлолт нь өөр өөр концентрацийн хамаарлыг хэмжиж чаддаг. Төрөл бүрийн жижиг молекулын нэгдлүүд, пептид, уураг, олигонуклеотид, олигомерууд, түүнчлэн липид, бактериофаг, вирус, эсүүдийн хоорондын харилцан үйлчлэлийг судлахад хэрэглэгддэг. Хамаарлын хэмжилтийн платформ нь хамаарлын эмийн шинжилгээ, скрининг, эсрэгбие илрүүлэх, дараагийн судалгааг хөнгөвчлөх үндэс суурийг тавьж чадна.

Холбоостой холбоотой байдлын танилцуулга

Молекул хоорондын харилцан үйлчлэлийг үнэлэх, эмийн хамаарлын шинжилгээ, эмийн скрининг хийхэд хамаарал чухал үүрэгтэй. Молекул хоорондын харилцан үйлчлэлийг дараах тэгшитгэлээр тодорхойлж болно: L + R = LR, энд L нь чөлөөт лиганд, R нь холбоогүй рецептор, LR нь холбоогүй лиганд-рецепторын цогцолборыг илэрхийлнэ. Холбох урвал нь тэнцвэрт байдалд хүрэх хүртэл урвалын явцад холбогдсон ба холбоогүй төлөвүүдийн хооронд динамик солилцоо явагддаг молекул хоорондын харилцан үйлчлэлийг тодорхойлдог. Үүнийг урвалын хоёр хурдны тогтмол болох Kon (холбох хурдны тогтмол) ба Koff (диссоциацийн хурдны тогтмол)-аар тодорхойлж болно. Холбох тогтмол (Ka)-ийн урвуу утга болох Kd утга нь урвалын хамаарлын чухал тогтмол болох Koff/Kon юм. Тиймээс хоёр молекулын хоорондох холболт нягт байх тусам хамаарал өндөр болно. Kd утга бага байх тусам эсрэгээрээ. Энэ тэгшитгэлийг хагас логарифмын график дээр S хэлбэрийн муруй хэлбэрээр дүрсэлж болох бөгөөд лиганд концентраци нь x тэнхлэг дээр (логарифмын масштабын тэнхлэг дээр), бутархай хил нь y тэнхлэг дээр байна. Тасархай шугам нь 0.5 холбох фракцтай Kd (1 нМ) дэх лигандийн концентрацийг илэрхийлнэ.

Зураг 1: Эсийн гадаргуугийн рецептортой холбогдсон лигандийн янз бүрийн концентрацийн сигмоид холболтын муруй. (Лавлах эх сурвалж: Хантер SA, Кокран JR. Уураг-уургийн харилцан үйлчлэлийн хамаарлыг тодорхойлох эсийн холболтын шинжилгээ: Технологи ба анхаарах зүйлс.)

Хамаарлыг тодорхойлох аргууд

ELISA холболтын хамаарлын шинжилгээ

Эсрэгбиеийн хамаарлыг судлах өргөн хэрэглэгддэг арга нь ELISA аргад суурилдаг бөгөөд энэ нь тохиромжтой байдал, хурд, энгийн байдал, өндөр мэдрэмж, хүчтэй өвөрмөц чанараараа онцлог юм. Энэ нь бага хэмжээний урвалж (өөрөөр хэлбэл эсрэгбие ба антиген) ашиглаж, цэвэршүүлэх урвалж шаардлагагүйгээр эсрэгбиеийн хамаарлыг хэмжиж чаддаг. Антигенийг хатуу гадаргуу дээр хөдөлгөөнгүй болгож, анхдагч эсрэгбие ашиглан илрүүлснээр шошготой хоёрдогч эсрэгбие нь анхдагч эсрэгбиетэй урвалд орж, ферменттэй холбоотой иммуносорбент шинжилгээ (ELISA) уншигч дахь өгөгдлийг уншиж, шинжилдэг.

Зураг 2: Зохион бүтээсэн пептидүүдийг тэдгээрийн зорилтот түвшинд холбохыг үнэлэх ELISA төст шинжилгээнүүд. (Лавлагаа эх сурвалж: Хажикаримлу, Мариам нар, 2022. SARS-CoV-2 гадаргуугийн уураг S-ийг илрүүлдэг пептидийг хурдан зохион бүтээх тооцооллын арга.)

Гадаргуугийн плазмон резонанс (SPR) холболтын хамаарлын шинжилгээ

SPR технологи нь голчлон хугарлын индексийн өөрчлөлтийг илрүүлдэг. Уламжлалт оптик үзэгдэл болон гэрлийн резонансын үзэгдлийн тусламжтайгаар биомолекулуудын харилцан үйлчлэлийн биосенсорын шинжилгээний технологийг бий болгож, биосенсорын чип дээрх лиганд ба аналитуудын харилцан үйлчлэлийг илрүүлж болно. Биологийн урвалын үед SPR өнцгийн динамик өөрчлөлтийг хянах замаар биомолекулуудын хоорондын холболт ба харилцан үйлчлэлийн тодорхой дохиог олж авч болно.

Зураг 3: H10/AGR2 холболтын гадаргуугийн плазмон резонансын (SPR) шинжилгээ. (Лавлах эх сурвалж: Гарри, Каролина нар, 2018. Урд талын градиент гомолог 2 (AGR2)-ын эсрэг шинэ пептидийг тодорхойлох, тодорхойлох, хэрэглэх нь.)

Био давхаргын интерференцийн (BLI) холболтын хамаарлын шинжилгээ

Био хальсны интерференцийн технологи нь шошгогүй, бодит цагийн хяналтын оптик илрүүлэх арга бөгөөд голчлон молекул хоорондын харилцан үйлчлэлийн цогц тоон шинжилгээ болон уургийн концентрацийг тодорхойлоход ашиглагддаг. Энэхүү технологи нь дээж дээрх био хальсны зузааны өөрчлөлтийг шууд илрүүлэхийн тулд датчик дээр суурилсан биосенсорыг ашигладаг. Интерференцийн спектрийн шилжилтийн өөрчлөлтийг илрүүлснээр мэдрэгчийн гадаргуу дээр харилцан үйлчилж буй биомолекулуудын хоорондох холболт ба диссоциацийг илрүүлж, интерференцийн спектрийн бодит цагийн шилжилтийг (нм) харуулдаг.

Зураг 4: aLDRG болон хитинолигосахаридын хоорондох био давхаргын интерферометрийн (BLI) шинжилгээ. (Лавлах эх сурвалж: Ли, Бинг, 2023. LysM домэйнд анхаарлаа хандуулан мөөгөнцрийн симбиозд оролцдог Armillaria sp. 541-ийн Rhizomorphs болон Hyphae-ийн харьцуулсан транскриптомын шинж тэмдэг.)

BLI болон SPR технологийн харьцуулалт

Технологийн нэр	BLI (Био давхаргын интерферометр)	SPR (Гадаргуугийн плазмоны резонанс)
Зарчим	Мэдрэгчийн гадаргуу дээрх ойсон гэрлийн интерференцийн хэв маягийн өөрчлөлтийг хэмжиж, био давхарга дээрх оптик зузааны өөрчлөлтөөр дамжуулан молекулын харилцан үйлчлэлийг илрүүлдэг. Энэ нь бодит цагийн холболтын муруйг (шууд хэмжилт) өгдөг.	Мэдрэгчийн чипийн гадаргуугийн ойролцоох хугарлын илтгэгчийн дохионы өөрчлөлтийг илрүүлэх замаар молекулын харилцан үйлчлэлийг хэмждэг (гэрэл нь алт болон шилэн интерфейстэй харилцан үйлчилж, хугарлын илтгэгчийн өөрчлөлтөд хүргэх үед үүсдэг). Өгөгдлийг резонансын өнцгийн өөрчлөлт хэлбэрээр тусгадаг (шууд бус хэмжилт).
Үйлдвэрлэгч	Сарториус	GE
Хөгжмийн зэмсэг	ForteBio Биосенсорууд	Нээлттэй SPR багаж
Систем	ForteBio октет систем (молекулын харилцан үйлчлэлийн шинжилгээнд зориулагдсан)	TraceDrawer (Шведийн Ridgeview Instruments компани боловсруулсан)
Давуу талууд	1. Дээжийн өргөн хүрээтэй нийцтэй байдал, маш сайн тогтвортой байдал, ялангуяа жижиг молекулуудыг илрүүлэхэд (дээжийн цэвэршилт болон буферийн нөхцөлд тавигдах тодорхой шаардлага нь бага хатуу байдаг). SSA чип нь холболтын судалгаанд өртөг хэмнэлттэй байдаг. 2. SPR-тэй харьцуулахад илүү хурдан нэвтрүүлэх чадвар болон туршилтын хугацаа богино.	1. BLI-тэй харьцуулахад илүү өндөр мэдрэмжийг санал болгодог урт хугацааны хөгжлийн түүх. 2. Өндөр хамааралтай болон өвөрмөц байдлын өгөгдөлтэй ховор эсвэл үнэ цэнэтэй уургийг илрүүлэх гэх мэт тодорхой хэрэглээнд илүү нарийвчлалтай, бат бөх чанар.
Сул талууд	1. Өгөгдлийн нарийвчлал нь SPR-тэй харьцуулахад арай бага. 2. Багажны болгоомжтой засвар үйлчилгээ шаарддаг. 3. SSA чипний өртөг харьцангуй өндөр.	1. Маш жижиг молекулуудыг илрүүлэх буферийн нөхцөл нь хүнд байж болох бөгөөд энэ нь илрүүлэлтийн алдаа гарах эрсдлийг нэмэгдүүлдэг. 2. Чипс нь ерөнхийдөө BLI-д ашигладаг чипсээс илүү үнэтэй байдаг. 3. Урт хугацааны туршилтын үед дээжийн ууршилт нь асуудал үүсгэж болзошгүй.
Чипийн төрөл	SSA чип	NTA чип

Хамаарлын хэмжилтийн хүрээ

Хамаарлын тодорхойлолтод антиген-эсрэгбие (хүчтэй антиген-эсрэгбие, сул антиген-эсрэгбие), уураг-уураг, уураг-пептид, уураг-жижиг молекул, уургийн ДНХ/РНХ (аптамер) зэрэг орно. KD-г хэмжихдээ молийн концентрацийн аль нэгийг мэдэх шаардлагатай. Жижиг молекулууд холбогдох үед нэг молекулын жин 150 далтоноос бага байж болохгүй.

Төрөл	Хамрах хүрээ	Урьдчилан сэргийлэх
1. Антиген-эсрэгбие	10^-6-аас 10^-12 хүртэл	Ихэнх эсрэгбиеийн Kd утга нь 10^-6-10^-7-оос 10^-9 хооронд байдаг. Өндөр хамааралтай эсрэгбие нь 10^-9 дотор, өндөр хамааралтай гэж ерөнхийдөө үздэг. Эсрэгбие нь 10^-12 дотор байдаг.
2. Уураг - Жижиг молекулууд	10^-4-ээс 10^-5 хүртэл	Жижиг молекулууд болон уургуудын KD нь 10^-4 ба 10^-5 хооронд байдаг бол 10^-3 ба 10^-7 нь хэвийн бөгөөд 10^-10 хүрч чадахгүй. Ковалент жижиг молекулууд 10^-10 хүрч болно.
3. Авидин-Биотин	10^-14	Аффинитет нь өвөрмөц бус холболтод амархан орж болох бөгөөд стрептавидин эсвэл дегликозилжүүлсэн аффинитетийг ашиглаж болно.
4. ДНХ-Уураг	10^-8-аас 10^-10 хүртэл	Өндөр чанартай, бүрэн ДНХ; электрофорезын нөлөөллөөс урьдчилан сэргийлэхэд анхаарна уу.

Харилцан хамаарлыг тодорхойлох дээжийн шаардлага

Дээж	Шаардлага
1. Том молекулын дээж	Уураг > 50 мкг, эсрэгбие > 100 мкг, биотинжүүлсэн уураг > 200 мкг; биотингүй уураг > 2 мг, цэвэршилтийн шаардлага > 90%, буфер уусмал: PBS, HEPBS. Имидазолын бүлгийг агуулж болохгүй; чанарын хяналт шаардлагатай.
2. Жижиг молекулын дээж	Тоо хэмжээ нь >1мг, нунтаг эсвэл шингэн, шингэн нь ус эсвэл DMSO-д уусдаг байх шаардлагатай. Глицерол, имидазол, трехалоз болон бусад давс агуулаагүй байхыг хичээгээрэй; буферт Tris зэрэг амин бүлэгтэй урвалжуудаас зайлсхийхийг хичээгээрэй, ерөнхийдөө PBS, HEPPS гэх мэт органик урвалжгүй.

Affinity Measurement Platform-ийн давуу талууд

Олон түүврийн шинжилгээ

Alpha Lifetech нь эсрэгбие, эс, уураг болон бусад биомолекулууд зэрэг янз бүрийн дээжинд хамаарлын шинжилгээ хийж чаддаг.

Хөгжилтэй технологийн платформ

Бид спр холболтын шинжилгээ, бли холболтын шинжилгээ, элиза холболтын шинжилгээ зэрэг дэвшилтэт технологитой.

Уян хатан төслийн сонголт

Хэрэглэгчид хурдан хамаарлын тодорхойлолт болон нарийн хамаарлын тодорхойлолтын аль нэгийг нь сонгох боломжтой.

Өндөр нарийвчлалтай үр дүн

Манай мэргэжлийн техникийн баг үр ашигтай, үнэн зөв, найдвартай хамаарлын тодорхойлолтын үр дүнг баталгаажуулж чадна.

Кейс судалгааТОХИОЛДОЛ

BLI-ийн хурдан холбоо тогтоох шинжилгээний эсрэгбие ба аптамерын холбоо тогтоох шинжилгээ

SA датчикийн өвөрмөц чанар бүхий биотинилжүүлсэн аптамеруудыг барьж аваад уусгана. Дээжийг тогтмол концентрацитай болтол нь уусгаж шингэлж, датчикт тохирсон 1-5 зорилтот аппамеруудыг хатууруулж, дохио ханалтын дараа дээжинд холбоно. Дараа нь тэдгээрийг 96 нүхтэй хавтан дээр нэмнэ.

Зураг 5: 96 нүхтэй хавтангийн дээжийн илрүүлэх байрлалын тархалт. B нь мэдрэгчийг тэнцвэржүүлэх болон диссоциацид ашигладаг буферийг хэлнэ. L: Биотины зорилтот 1-5 аптамер, 221: Дээж.

Өгөгдлийн тогтвортой байдал, нарийвчлалыг хангахын тулд өрөмдлөгт анхаарлаа хандуулж, үр дүнг авахын тулд харгалзах програмыг тохируулна уу:

Зураг 6: Бай 1, 2, 3-р аппамерууд болон дээжүүдийн хоорондох харилцан үйлчлэлийн тохируулгын диаграмм. (CH 1 \ 3 \ 5 нь хатуурсан Бай 1 \ 2 \ 3 аппамеруудын датчик болон дээжийн хоорондох харилцан үйлчлэлийн дохио болон өгөгдлийг илэрхийлнэ.)

Зураг 7: Бай 4 ба 5-р аппамер болон дээжийн хоорондох харилцан үйлчлэлийн тохируулгын диаграмм. (CH 1 \ 3 нь хатуурсан Бай 4 \ 5-р аппамер датчик болон дээжийн хоорондох харилцан үйлчлэлийн дохио болон өгөгдлийг илэрхийлнэ.)

үр дүнгүүд харуулж байна

Дараах үр дүнг гаргалаа: Target 1 адаптерийг суурилуулсны дараа дээжинд ойртуулах чадвар 9.41 ^ -8 байсан; Target 2 адаптерийг суурилуулсны дараа дээжинд ойртуулах чадвар 8.32 ^ -8 байсан; Target 3 адаптерийг суурилуулсны дараа дээжинд ойртуулах чадвар 8.64 ^ -8 байсан; Target 4 адаптерийг суурилуулсны дараа дээжинд ойртуулах чадвар 3.70 ^ -8 байсан; Target 5 адаптерийг суурилуулсны дараа дээжинд ойртуулах чадвар 3.01 ^ -8 байсан.

Хэрэв танд асуулт байвал бидэнтэй хэзээ ч холбогдоно уу.

Leave Your Message

Онцлох үйлчилгээ

0102