Ойролцоо хэмжих платформ

Octet болон Biacore-T2000 платформ дээр суурилсан Alpha Lifetech нь ойр дотно байдлыг тодорхойлох найдвартай үйлчилгээг үзүүлж чадна. Бид эсрэгбие, эс, уураг, жижиг молекул гэх мэт олон дээжинд ойртох чадварыг тодорхойлох боломжтой. Гадаргуугийн плазмоны резонанс (SPR) болон био давхаргын интерференц (BLI) хамаарлыг тодорхойлох янз бүрийн аргууд байдаг.

Альфа Лайфтек нь ELISA-г ойр дотныхоо тодорхойлолттой хослуулсан мэргэжлийн, үнэн зөв тодорхойлох платформтой бөгөөд дэлхий даяарх үйлчлүүлэгчдэд мэргэжлийн, үр ашигтай, хурдан бөгөөд нарийн ойр дотно байдлыг тодорхойлох үр дүнг өгдөг. Бид үйлчлүүлэгчдэдээ сонгох хоёр аргыг санал болгож болно: Шуурхай хамаарлыг тодорхойлох ба Нарийвчлалтай холбоо тогтоох. Ойролцоох чадварыг хурдан тодорхойлох нь нэг концентрацийн тодорхойлолт байдаг бол нарийн хамаарлыг тодорхойлох нь янз бүрийн концентрацийн хамаарлыг хэмжих боломжтой. Төрөл бүрийн жижиг молекулын нэгдэл, пептид, уураг, олигонуклеотид, олигомер, түүнчлэн липид, бактериофаг, вирус, эс хоорондын харилцан үйлчлэлийг судлахад ашигладаг. Ойролцоох чадварыг хэмжих платформ нь эмийн ойр дотно байдлын шинжилгээ, скрининг, эсрэгбие илрүүлэх үндэс суурийг тавьж, дараагийн судалгааг хөнгөвчлөх боломжтой.

Binding Affinity-ийн танилцуулга

Ойролцоох байдал нь молекул хоорондын харилцан үйлчлэл, эмийн ойр дотно байдлын шинжилгээ, эмийн скрининг зэрэгт чухал ач холбогдолтой. Молекул хоорондын харилцан үйлчлэлийг тэгшитгэлээр тодорхойлж болно: L + R = LR, L нь чөлөөт лигандыг, R нь холбоогүй рецепторуудыг, LR нь холбосон лиганд-рецепторын цогцолборыг илэрхийлнэ. Холбох урвалууд нь молекул хоорондын харилцан үйлчлэлийг тодорхойлдог бөгөөд тэнцвэрт байдалд хүрэх хүртэл урвалын явцад холбогдсон ба холбоогүй төлөвүүдийн хооронд динамик солилцоо явагддаг. Үүнийг урвалын Кон (холбох хурдны тогтмол) ба Кофф (диссоциацийн хурдны тогтмол) гэсэн хоёр хурдны тогтмолоор тодорхойлж болно. Холболтын тогтмол (Ka)-ийн эсрэг утга болох Kd утга нь урвалын хамаарлын чухал тогтмол болох Кофф/Кон юм. Иймээс хоёр молекулын хоорондох холбоо нь илүү нягт байх тусам ойр дотно байдал өндөр болно. Kd утга бага байх тусам эсрэгээрээ. Энэ тэгшитгэлийг хагас логарифмын график дээр S хэлбэрийн муруй хэлбэрээр дүрсэлж болох ба x тэнхлэг дээр лигандын концентраци (логарифмын хуваарийн тэнхлэгт), y тэнхлэгт бутархайн хил хязгаартай байна. Тасархай шугам нь 0.5 холбох фракцын Kd (1 nM) дахь лигандын концентрацийг илэрхийлнэ.

Зураг 1: Эсийн гадаргуугийн рецептортой холбогдсон лигандын янз бүрийн концентрацийн сигмоидын холболтын муруй. (Лавлах эх сурвалж: Хантер С.А., Кочран ЖР. Уураг-уургийн харилцан үйлчлэлийн хамаарлыг тодорхойлох эсийг холбох шинжилгээ: технологи ба анхаарах зүйлс.)

Ойролцоог тодорхойлох аргууд

ELISA-тай холбогдох хамаарлын шинжилгээ

Эсрэгбиеийн ойр дотно байдлыг судлах өргөн хэрэглэгддэг арга нь ELISA арга дээр суурилдаг бөгөөд энэ арга нь тав тухтай, хурд, энгийн, өндөр мэдрэмжтэй, хүчтэй өвөрмөц чанараараа онцлог юм. Энэ нь бага хэмжээний урвалж (өөрөөр хэлбэл эсрэгбие ба эсрэгтөрөгч) ашиглаж, цэвэршүүлэх урвалжгүйгээр эсрэгбиеийн ойр байдлыг хэмжих боломжтой. Хатуу гадаргуу дээр эсрэгтөрөгчийг хөдөлгөөнгүй болгож, анхдагч эсрэгбие ашиглан илрүүлснээр шошготой хоёрдогч эсрэгбие нь анхдагч эсрэгбиетэй урвалд орж, фермент холбоот дархлалын сорил (ELISA) уншигчийн өгөгдлийг уншиж, дүн шинжилгээ хийдэг.

Зураг 2: Зохион бүтээгдсэн пептидүүдийг зорилтот түвшинд нь холбохыг үнэлэх ELISA-тай төстэй шинжилгээ. (Лавлах эх сурвалж: Hajikarimlou, Maryam, et al., 2022. SARS-CoV-2 гадаргуугийн уураг S-ийг илрүүлдэг пептидүүдийг хурдан зохион бүтээх тооцооллын арга.)

Гадаргуугийн плазмоны резонансын (SPR) холболтын хамаарлын шинжилгээ

SPR технологи нь хугарлын илтгэгчийн өөрчлөлтийг голчлон илрүүлдэг. Уламжлалт оптик үзэгдлүүд болон гэрлийн резонансын үзэгдлийн тусламжтайгаар биомолекулуудын харилцан үйлчлэлийн био мэдрэхүйн шинжилгээний технологийг бий болгож, био мэдрэгчтэй чип дээрх лиганд ба аналитуудын харилцан үйлчлэлийг илрүүлэх боломжтой. Биологийн урвалын үед SPR өнцгийн динамик өөрчлөлтийг хянах замаар биомолекулуудын хоорондын холболт ба харилцан үйлчлэлийн тодорхой дохиог олж авч болно.

Зураг 3: H10/AGR2 холболтын гадаргуугийн плазмоны резонансын (SPR) шинжилгээ. (Лавлах эх сурвалж: Garri, Carolina, et al., 2018. Урд градиент гомолог 2 (AGR2) эсрэг шинэ пептидийг тодорхойлох, шинж чанар, хэрэглээ.)

Био давхаргын хөндлөнгийн оролцоо (BLI) холболтын хамаарлын шинжилгээ

Биофильм интерференцийн технологи нь голчлон молекул хоорондын харилцан үйлчлэлийн иж бүрэн тоон шинжилгээ, уургийн концентрацийг тодорхойлоход хэрэглэгддэг шошгогүй, бодит цагийн хяналтын оптик илрүүлэх арга юм. Энэ технологи нь сорьц дээр суурилсан биосенсор ашиглан дээж дээрх био хальсны зузаан дахь өөрчлөлтийг шууд илрүүлдэг. Интерференцийн спектрийн шилжилтийн өөрчлөлтийг илрүүлснээр мэдрэгчийн гадаргуу дээр харилцан үйлчлэлцэж буй биомолекулуудын хоорондын холболт ба диссоциацийг илрүүлж, интерференцийн спектрийн бодит цагийн шилжилтийг (nm) харуулна.

Зураг 4: aLDRG ба хитинолигосахаридын хоорондох био давхаргын интерферометрийн (BLI) шинжилгээ. (Лавлах эх сурвалж: Li, Bing, 2023. Rhizomorphs болон Hyphae of Armillaria sp. 541 LysM домайныг онцолж мөөгөнцрийн симбиозд оролцох.)

BLI болон SPR технологийн харьцуулалт

Технологийн нэр	BLI (Био давхаргын интерферометр)	SPR (гадаргуугийн плазмоны резонанс)
зарчим	Мэдрэгчийн гадаргуу дээрх ойсон гэрлийн интерференцийн өөрчлөлтийг хэмжиж, био давхаргын оптик зузаанын өөрчлөлтөөр молекулын харилцан үйлчлэлийг илрүүлдэг. Энэ нь бодит цагийн холболтын муруйг (шууд хэмжилт) өгдөг.	Мэдрэгч чипийн гадаргуугийн ойролцоох хугарлын илтгэгчийн дохионы өөрчлөлтийг илрүүлэх замаар молекулын харилцан үйлчлэлийг хэмждэг (гэрэл нь алт болон шилний интерфэйстэй харилцан үйлчилж, хугарлын илтгэгчийн өөрчлөлтийг үүсгэх үед үүсдэг). Өгөгдлийг резонансын өнцгийн өөрчлөлт (шууд бус хэмжилт) хэлбэрээр тусгадаг.
Үйлдвэрлэгч	Сарториус	Г.Е
Багаж хэрэгсэл	ForteBio био мэдрэгч	SPR хэрэгслийг нээнэ үү
Систем	ForteBio Octet System (молекулын харилцан үйлчлэлийн шинжилгээнд зориулагдсан)	TraceDrawer (Швед улсын Ridgeview Instruments боловсруулсан)
Давуу тал	1. Дээжний өргөн нийцтэй байдал, маш сайн тогтвортой байдал, ялангуяа жижиг молекулуудыг илрүүлэхэд зориулагдсан (дээжний цэвэр байдал, буферийн нөхцөлд тавигдах тусгай шаардлага бага хатуу). SSA чип нь заавал судлахад хэмнэлттэй байдаг. 2. SPR-тай харьцуулахад илүү хурдан дамжуулалт, богино туршилтын хугацаа.	1. BLI-тай харьцуулахад илүү өндөр мэдрэмжтэй, илүү урт хөгжлийн түүхтэй. 2. Ховор, үнэ цэнэтэй уураг илрүүлэх зэрэг тусгай хэрэглээнд илүү нарийвчлал, бат бөх байдал.
Сул тал	1. Өгөгдлийн нарийвчлал нь SPR-тай харьцуулахад арай бага. 2. Багаж хэрэгсэлд болгоомжтой засвар үйлчилгээ хийх шаардлагатай. 3. SSA чипний зардал харьцангуй өндөр.	1. Хэт жижиг молекулуудыг илрүүлэх буферийн нөхцөл нь хүнд хэцүү байх нь илрүүлэлт амжилтгүй болох эрсдэлийг нэмэгдүүлдэг. 2. Чипс нь ерөнхийдөө BLI-д хэрэглэгддэгээс илүү үнэтэй байдаг. 3. Өргөтгөсөн туршилтын үед дээжийн ууршилт нь асуудал байж болно.
Чипийн төрөл	SSA чип	NTA чип

Ойролцоох хэмжилтийн хамрах хүрээ

Ойролцоо тодорхойлоход эсрэгтөрөгч-эсрэгбие (хүчтэй эсрэгтөрөгч-эсрэгбие, сул эсрэгтөрөгч-эсрэгбие), уураг-уураг, уураг-пептид, уураг-жижиг молекул, уургийн ДНХ/РНХ (аптамер) орно. KD-ийг хэмжихдээ молийн концентрацийн аль нэгийг мэдэх шаардлагатай. Жижиг молекулууд холбогдох үед нэг молекулын жин 150 далтоноос бага байж болохгүй.

Төрөл	Хамрах хүрээ	Урьдчилан сэргийлэх
1. Антиген-эсрэгбие	10^-6-аас 10^-12 хүртэл	Ихэнх эсрэгбиемүүдийн Kd утга нь 10^-6-10^-7-10^-9 хооронд байна. Ерөнхийдөө өндөр хамааралтай эсрэгбие нь 10^-9 дотор байдаг бол өндөр хамааралтай байдаг гэж үздэг. Эсрэгбие нь 10^-12 дотор байна.
2. Уураг - Жижиг молекулууд	10^-4-өөс 10^-5 хүртэл	Жижиг молекул, уургийн KD нь 10^-4 ба 10^-5 хооронд байдаг бол 10^-3 ба 10^-7 нь хэвийн бөгөөд 10^-10 хүрч чадахгүй. Ковалентын жижиг молекулууд 10^-10 хүрч болно.
3. Авидин-Биотин	10^-14	Ойролцоох нь өвөрмөц бус холболтод амархан ордог бөгөөд стрептавидин эсвэл дегликозилжсэн хамаарлыг ашиглаж болно.
4. ДНХ-уураг	10^-8-аас 10^-10 хүртэл	Өндөр чанартай, бүрэн ДНХ; электрофорезын нөлөөллөөс урьдчилан сэргийлэхийн тулд болгоомжтой байгаарай.

Ойролцоог тодорхойлох жишээ шаардлагууд

Дээж	Шаардлага
1. Том молекулын дээж	Уураг > 50 мкг, эсрэгбие > 100 мкг, биотинжүүлсэн уураг > 200 мкг; биотингүй уураг > 2 мг, цэвэр байдлын шаардлага > 90%, буфер уусмал: PBS, HEPBS. Имидазолын бүлгийг агуулж болохгүй; чанарын хяналт шаардлагатай.
2. Жижиг молекулын дээж	Тоо хэмжээ>1мг, нунтаг эсвэл шингэн, шингэн нь ус эсвэл DMSO-д уусдаг байх шаардлагатай. Глицерол, имидазол, трегалоз болон бусад давс агуулаагүй байхыг хичээ; буферт Tris гэх мэт амин бүлэгтэй урвалжууд, ерөнхийдөө PBS, HEPPS гэх мэт органик урвалжгүй бодисуудаас зайлсхийхийг хичээ.

Ойролцоох хэмжилтийн платформын давуу тал

Олон түүврийн шинжилгээ

Alpha Lifetech нь эсрэгбие, эс, уураг болон бусад биомолекул зэрэг янз бүрийн дээжүүдэд ойр дотно байдлын шинжилгээ өгөх боломжтой.

Хөгжилтэй технологийн платформ

Бид spr binding assay, bli binding assay, elisa binding assay зэрэг дэвшилтэт технологиудтай.

Төслийн уян хатан сонголт

Үйлчлүүлэгчид ойр дотно байдлыг хурдан тодорхойлох болон ойр дотно байдлыг нарийн тодорхойлох хоёрын хооронд сонголт хийх боломжтой.

Өндөр нарийвчлалтай үр дүн

Манай мэргэжлийн техникийн баг нь үр дүнтэй, үнэн зөв, найдвартай хамаарлыг тодорхойлох үр дүнг баталгаажуулж чадна.

Кейс судалгааCASE

BLI-ийн хурдан хамаарлын шинжилгээний эсрэгбие ба аптамерын хамаарлын шинжилгээ

Биотинжуулсан аптамеруудыг SA датчикийн өвөрмөц шинж чанартайгаар барьж, уусгана. Дээжийг тогтмол концентраци хүртэл уусгаж шингэлж, датчикт тусгайлан авсан зорилтот 1-5 аптамерыг хатууруулж, дохио ханасаны дараа дээжтэй холбоно. Дараа нь тэдгээрийг 96 цооногийн хавтан дээр нэмнэ.

Зураг 5: 96 худагтай хавтангийн дээжийг илрүүлэх байрлалын хуваарилалт. B нь мэдрэгчийг тэнцвэржүүлэх, салгахад ашигладаг буферийг хэлнэ. L: Биотин зорилтот 1-5 аптамер, 221: Дээж.

Өгөгдлийн тогтвортой байдал, үнэн зөв байдлыг хангахын тулд өрөмдлөг хийхэд анхаарлаа хандуулж, үр дүнг авахын тулд тохирох програмыг тохируулна уу.

Зураг 6: Зорилтот 1, 2, 3-р аптамер ба дээжийн хоорондын харилцан үйлчлэлийн схем. (CH 1 \ 3 \ 5 нь хатуужуулсан Зорилтот 1 \ 2 \ 3 аптамер датчик ба дээж хоорондын харилцан үйлчлэлийн дохио ба өгөгдлийг илэрхийлнэ.)

Зураг 7: Зорилтот 4 ба 5 аптамер ба дээжийн хоорондын харилцан үйлчлэлийн диаграмм. (CH 1 \ 3 нь хатуужуулсан Зорилтот 4 \ 5 аптамер датчик ба дээжийн хоорондын харилцан үйлчлэлийн дохио ба өгөгдлийг илэрхийлнэ.)

үр дүн харуулж байна

Дараах үр дүнг олж авлаа: Зорилтот 1 адаптерын тохируулгын дараа дээжтэй ойртох байдал 9.41 ^ -8; тохируулсны дараа Зорилтот 2 адаптерийн түүвэрт тохирох байдал 8.32 ^ -8; тохируулсны дараа Зорилтот 3 адаптерийн түүвэрт тохирох байдал 8.64 ^ -8; тохируулсны дараа Зорилтот 4 адаптерийн түүвэрт тохирох байдал 3.70 ^ -8; Зорилтот 5 адаптерыг тохируулсны дараа дээжтэй харьцах харьцаа 3.01 ^ -8 байна.

Хэрэв танд асуух зүйл байвал бидэнтэй хүссэн үедээ холбоо барина уу.

Leave Your Message

Онцлох үйлчилгээ

0102