Амьтны дархлаажуулалтын платформ

Амьтны дархлаажуулалтын платформ нь голчлон тэмээний (Альпака Лиама, тэмээ) амьтдыг дархлаажуулж, нано биеийг үйлдвэрлэх үндэс суурийг тавьдаг.

БИДЭНД ХОЛБОО БАРИХ

Амьтны дархлаажуулалтын платформ

Альфа Lifetech-ийн малын эх үүсвэр нь тодорхой бөгөөд хяналт шалгалт, хорио цээрийн зөвшөөрөлтэй, тодорхой генетик суурьтай, тодорхой дархлаажуулалтын давтамж, дархлаажуулалтын интервалын нарийвчилсан бүртгэлтэй тул эсрэгбие үйлдвэрлэхэд тохиромжтой үйлчилгээ үзүүлдэг. Энэ нь голчлон тэмээний амьтдыг (Альпака Лиама, тэмээ) дархлаажуулж, нано хүн үйлдвэрлэх үндэс суурийг тавьдаг. Түүнчлэн энгийн амьтдыг (Шинэ Зеландын цагаан туулай, хулгана болон бусад амьтад) дархлаажуулалтын шаардлагатай давтамж, үйлчлүүлэгчдийн дархлаажуулалтын шаардлагад нийцүүлэн дархлаажуулж, тэдгээрийг ТТБМ-д гаргаж авч, тусгаарлаж, дараагийн туршилтуудад (моноклональ эсрэгбие, поликлональ эсрэгбие үүсгэх гэх мэт) ашиглах боломжтой. Үйлчлүүлэгчид өөрсдийн дархлаа үүсгэгч бодисыг өгөх боломжтой бөгөөд бид тэдгээрийн чанарын хатуу хяналтыг хийх болно. Хэрэв үйлчлүүлэгчид вирусын дархлаа үүсгэгч бодисоор хангадаг бол тэдгээрийг идэвхгүйжүүлэх шаардлагатай бөгөөд бид аюулгүй байдлыг хангах үүднээс идэвхгүйжүүлэх туршилтыг явуулна. Үүний зэрэгцээ бид харилцагчийн хэрэгцээнд нийцүүлэн тохирох иммуногенийг тохируулах боломжтой.

Амьтны дархлаажуулалтын танилцуулга

Моноклональ эсрэгбие, поликлональ эсрэгбие, нанобобие зэрэг амьтны гаралтай эсрэгбиемүүдийг үйлдвэрлэхдээ эхний алхам нь амьтдыг дархлаажуулж, эсрэгбиеийн цаашдын үйлдвэрлэлд бэлтгэх, шинжлэх ухааны суурь судалгааг сурталчлах, эмнэлзүйн оношилгооны хэрэгслийг хөгжүүлэх, эмнэлзүйн оношлогооны арга хэрэгслийг хөгжүүлэх, шинэ эм илрүүлэх, хөгжүүлэхэд туслах зорилгоор харгалзах В эс, эсрэгбие эсвэл PBMC-ийг авах явдал юм. Camelidae-ийн тэмээ, альпак, Лиама болон бусад тэмээ нь дархлааны цус цуглуулах, PBMC-ийг олборлох замаар нано биет (нэг домэйн эсрэгбие) санг үүсгэж чаддаг. Туулай болон бусад амьтдыг дархлаажуулж, бие махбодоос нь эсрэгбие гаргаж авах боломжтой. Цэвэршүүлсний дараа тэдгээрийг поликлональ эсрэгбие үүсгэхэд ашиглаж болно. Дархлаанаас гаргаж авсан В эсийг миелома эстэй хольж моноклональ эсрэгбие үүсгэхийн тулд хулгана, харх гэх мэтийг ашиглаж болно. Дархлаажуулалтын өмнө 3R зарчмуудыг (солих, багасгах, боловсронгуй болгох) анхаарч үзэх хэрэгтэй бөгөөд энэ нь шаардлагатай хамгийн бага хэмжээнд хэрэглэж буй амьтдын тоог мэдэгдэхүйц бууруулж, туршилтын журмыг сайжруулж, амьтдын зовлонг багасгах боломжтой. Туршилтын зөв загвар, тохирох эсрэгбиемүүдийг сонгох, баталгаажуулах хатуу журмыг мөн дагаж мөрдөх ёстой.

Дархлаа үүсгэгчийн ангилал - нано биений үйлдвэрлэл

Иммуногенийн төрлүүд	Жишээ	Иммуноген бэлдмэл	Тэмдэглэл
Уургийн иммуноген	Фермент, уураг, бактерийн хорт бодис болон бусад бодисууд	Төрөл бүрийн уураг илэрхийлэх системийг сонгоно уу: E. coli, мөөгөнцөр, шавьжны эс, хөхтөн амьтдын эс, эсгүй систем.	Уургийн илэрхийлэлд нөлөөлдөг температур, цаг хугацаа, рН, агуулагдах биетүүд зэрэг хүчин зүйлсийг анхаарч үзээрэй
Нуклейн хүчлийн иммуноген	ДНХ, РНХ	ДНХ-ийн иммуноген: Плазмидын ДНХ-г бүтээх, зорилтот генүүдэд тохирох экспрессийн векторуудыг клонжуулах, плазмидын ДНХ-ийг өсгөвөрлөх, өндөр цэвэршилттэй плазмидын ДНХ-г гаргаж авах. РНХ-ийн иммуноген: доройтлоос сэргийлэхийн тулд малгайны бүтэц, полиА сүүлийг нэмэх шаардлагатай	ДНХ-ийн иммуногенийг бэлтгэхдээ тохирох эзэн эсийг анхаарч, РНХ иммуногенийг бэлтгэхдээ РНХ-ийн задралаас урьдчилан сэргийлэхэд анхаарах хэрэгтэй.
Вирусын иммуноген	Вирусыг бүхэлд нь идэвхгүйжүүлсэн вакцин, дэд нэгж вакцин, вирусын вектор вакцин (аденовирус, лентивирус гэх мэт), mRAN вакцин.	Вирус идэвхгүйжүүлсэн бүхэл бүтэн вакциныг бэлтгэхдээ аюулгүй байдлыг нэмэгдүүлэхийн тулд эхлээд вирусыг идэвхгүйжүүлдэг. Идэвхгүйжүүлэлт дууссан эсэхийг тодорхойлохын тулд хордлогын сорилтыг ашигладаг. Дэд бүлгийн вакцинууд нь зөвхөн вирусын гадаргуугийн уурагуудыг эсрэгтөрөгч болгон шаарддаг бөгөөд дархлааны үр нөлөөг харгалзан үзэх шаардлагатай.	Дархлалын нөлөө үзүүлэхийн тулд туслах бодисыг нэмж оруулах, идэвхгүйжүүлэх шаардлагатай вирусыг анхаарч, дархлааны нөлөөг хангахын тулд вирусын зохих титрийг тогтоох, бэлтгэлийн үйл явцын аюулгүй байдлыг хатуу хянах шаардлагатай.

Амьтны дархлаажуулалтын үйл явц эсвэл цаг хугацаа

Амьтны сонголт ба антиген бэлтгэх

Амьтны сонголт: Эрүүл бүлгээс зөв нас, эрүүл бие галбиртай алпакаг сонгож, цусны шинжилгээ, халдварт өвчин болон бусад эрүүл мэндийн асуудалгүй эсэхийг баталгаажуулна.

Иммуноген бэлдмэл: Иммуногенүүд нь дархлааны хариу урвалыг өдөөх гол хүчин зүйл бөгөөд зорилтот эсрэгбиеийн шаардлагад үндэслэн тохирох уураг, пептид эсвэл бусад тохиромжтой бодисыг сонгохыг шаарддаг.

Альпака нь 1-3 эсрэгтөрөгчийг нэгэн зэрэг дархлаажуулж болно, нэг дархлаажуулалтад нийт эсрэгтөрөгчийн хэмжээ 1-2 мг, эзэлхүүн нь 2 мл-ээс бага байна. Дархлаажуулалт хийхээс өмнө эсрэгтөрөгч ба туслах бодисыг 1:1 харьцаагаар эмульсжүүлэн нэгэн төрлийн холимог үүсгэн, 4 хэмд хадгална.

Дархлаа судлалын альпака

Альпака чихний хоосон дугаарыг тэмдэглээд дархлаажуулалтын туршилтыг эхлүүлнэ үү. Альпакагийн хүзүүний ойролцоох тунгалгийн булчирхайд хоёр талдаа 2 цэгтэй, цэг бүрт ойролцоогоор 0.4 мл эмульсжүүлсэн эсрэгтөрөгчийг тарина. Дархлаажуулалтын дараа альпака нь таагүй шинж тэмдэггүй гэдгийг батлахын тулд хагас цагийн турш ажигла. Дархлаажуулалтыг 2 долоо хоног тутам, дор хаяж 4 удаа хийх ёстой.

Цус цуглуулах

5-7 хоногийн турш 4 удаа дархлаажуулалт хийсний дараа альпакагийн хүзүүний судлаас 50 мл цус цуглуулна.

Сийвэнг ялгах

Цусны дээжийг эсрэгтөрөгчийн дархлаажуулалт бүрийн өмнө дархлааны үнэлгээ хийх зорилгоор цуглуулж, тус бүрдээ 5 мл цус авна; Тухайн өдөр цусыг урьдчилан хөргөсөн 25 ℃ центрифуг ашиглан 400 хг-т 30 минутын турш центрифуглав. Сийвэнгийн дээд давхаргыг салгаж, дараагийн эсрэгбиеийн титрийн шинжилгээнд зориулж хадгалсан.

Тусдаа лимфоцитууд

Эхлээд 15 мл эсийг тусгаарлах уусмал нэмж, дараа нь 15 мл цусыг 50 мл центрифугийн хоолойд аажмаар нэмнэ. Цус болон ялгах уусмал холилдохоос сэргийлж цус нэмэхдээ болгоомжтой, удаан байх хэрэгтэй. Урьдчилан хөргөсөн центрифугийг 25 ℃ температурт, 400 xg-т 30 минутын турш центрифуг хийж, дээд ийлдсийг шинэ центрифугийн хоолойд -80 ℃ температурт хадгална; Пипеткээр дунд хөвөн хэлбэртэй дээд давхаргын дархлааны эсийг 50 мл центрифугийн шинэ хоолойд соруулна. Хоолой бүрт тасалгааны температурт 10 мл PBS буфер нэмж, 25 ℃ температурт центрифуг хийж, 400 xg-д 20 минут байлгана. Супернатантыг авч, гуурс бүрт тасалгааны температурт 5 мл PBS буфер нэмж, сайтар хольж, гемоцитометр ашиглан эсийн тоог тооцоолж, дараа нь 25 ℃ ба 400 хг-т 20 минутын турш центрифуг хийнэ. Супернатантыг зайлуулж, RNAiso Plus-ийн олж авсан лимфоцитуудыг эсийн тоонд үндэслэн уусгаж -80 ℃ температурт хадгалагдсан 10 ^ 7/мл эсийн лизатыг авна.

Зураг 1: Эсрэгбие илрүүлэх янз бүрийн стратеги ба туршилтын үе шатуудын бүдүүвч дүрслэл. (Зургийн эх сурвалж: Laustsen, Andreas H. et al.)

Үйлчлүүлэгчид иммуногенийг чанарын хатуу хяналтаар хангадаг

Иммуногенийн төрлүүд	Шаардлага	Чанарын хяналтын арга
Пептид / Жижиг молекулын дээж	Уусах нөхцөл (үндсэндээ фагуудыг идэвхгүйжүүлэх эсэхээс хамаарна), молекулын бүтэц/пептидийн дараалал, синтезийн тайлан (HPLC/MS/HNMR)	HPLC/MS илрүүлэх
Уургийн дээж	SDS-PAGE/WB, нөхөн сэргээх нөхцөл, буфер, шошгоны мэдээлэл, нийт хэмжээ (20-50ug), концентраци, цэвэр байдал гэх мэт	SDS-PAGE/WB
Эсийн дээж	Эсийн төрөл (анхдагч эсүүд/генийн засварласан эсүүд), эсийн хэлбэр (шинэ/хөлдөөсөн гэсгээсэн), өсөлтийн төрөл (наалдсан/ түдгэлзүүлсэн), өсгөвөрлөх орчинд тавигдах шаардлага, өгсөн эсийн тоо, өгсөн эсийн тоо, скринингийн зорилтот тогтвортой илэрхийлэлийг хангахын тулд генийн засварласан эсүүд (хэрэглэгчийн харгалзах анхдагч эсрэгбие), нөхөн сэргээх хурдыг тодорхойлох хөлдөөсөн гэсгээсэн эсүүд	Голчлон генийн засварласан эсүүдэд чиглүүлж, ELISA-ийн зорилтот илэрхийлэлийг тодорхойлох (манай компани HRP хоёрдогч эсрэгбие), урсгалын цитометр илрүүлэх (манай компани флюресцент хоёрдогч эсрэгбиемүүдийг өгөх боломжтой) зорилгоор үйлчлүүлэгчийн нийлүүлсэн анхдагч эсрэгбиемүүдийг ашигладаг.

Амьтны дархлааны хэрэглээ юу вэ?

+

Амьтдыг дархлаажуулснаар поликлональ эсрэгбие, В эсийг миелома эсүүдтэй нэгтгэснээр моноклон эсрэгбие, тэмээний эх үүсвэрээс (альпака, тэмээ, альпака гэх мэт) ялган авч нанободи, Фаб фрагмент, scFv гэх мэт эсрэгбиеийн янз бүрийн фрагмент хэлбэрийг гаргаж авах боломжтой.
Амьтны дархлааг хамгаалахын тулд ямар арга хэмжээ авах вэ?

+

Тэмээний гаралтай амьтдад наноэсрэгбие гаргахын тулд 5-6 удаа дархлаажуулалт хийх шаардлагатай. Дархлаажуулалт хийхээс өмнө цусны дээжийг хяналт болгон цуглуулж, дархлаажуулалт бүрийн хооронд 2 долоо хоногийн зайтай байх ёстой. Дөрөв дэх дархлаажуулалтын дараа титрийг тодорхойлохын тулд эерэг цус, дархлаагүй сөрөг цусыг ELISA шинжилгээнд авах шаардлагатай. Хэрэв титр 10 ^ 6-аас доош байвал титр зохих түвшинд хүрэх хүртэл дархлаажуулалтын тоог нэмэгдүүлнэ. Туулайн дархлаажуулалт (туулайн дархлаажуулалтын хамгийн оновчтой буюу нийтлэг уургийн эсрэгтөрөгчийн түвшин 50-1000 мг), хулганы дархлаажуулалт (хулганы дархлаажуулалтын хамгийн оновчтой буюу нийтлэг уургийн эсрэгтөрөгчийн түвшин нь 5-50 мг, хэрэв эс бол 10 ^ 6 эс, нуклейн хүчил, дархлаажуулалтад 10-50 мг) гэх мэт бусад амьтдын дархлаажуулалтын хувьд. дархлаажуулалт нь 250-5000ug) гэх мэт иммуногенийн тун, аюулгүй байдал, үр нөлөөг анхаарч үзэх хэрэгтэй.
Дархлаатай амьтдыг хэрхэн сонгох вэ?

+

Үйлчлүүлэгчийн шаардлагатай эсрэгбиеийн төрлөөс хамааран нанбоди болон бусад эсрэгбиеийн хэлтэрхий үйлдвэрлэх шаардлагатай бол тэмээний гаралтай амьтдыг (тэмээ, альпак, альпак) сонгож дархлаажуулалт хийх боломжтой. Хэрэв та моноклон эсвэл поликлональ эсрэгбие үүсгэх шаардлагатай бол ийлдэс, эсрэгтөрөгч, эсрэгтөрөгчийн эх үүсвэрийн хэмжээ дээр үндэслэн тохирох төрлийг сонгох хэрэгтэй. Туулайн ийлдсийн дээд хэмжээ нь 500 мл бөгөөд энэ нь бага хэмжээний эсрэгтөрөгч шаарддаг бөгөөд поликлональ эсрэгбие үүсгэх үндсэн сонголт юм. Хулганы сийвэнгийн хамгийн их хэмжээ нь 2 мл, харханд хамгийн их сийвэнгийн хэмжээ 20 мл байдаг бөгөөд энэ нь ихэвчлэн моноклональ эсрэгбиеийн хувьд хамгийн оновчтой сонголт юм. Ямааны эсрэгбие нь өндөр наалдацтай байдаг ба Alpha Lifetech таны хэрэгцээнд нийцүүлэн танд зориулсан дархлаажуулалтын онцгой төлөвлөгөөг тохируулах боломжтой.
Антигенийг туслах бодисуудтай хамт хэрэглэх шаардлагатай юу? Хэрхэн сонгох вэ?

+

Хоёр төрлийн туслах бодис байдаг: тос болон усан суурьтай. Туслах бодисыг зохистой ашиглах нь уусдаг антигенд хүчтэй эсрэгбиеийн хариу урвал үүсгэхэд чухал үүрэгтэй. Туслах бодисыг тогтвортой ялгаруулж байгаа нь эсрэгтөрөгчийг бага тунгаар хэрэглэж, эсрэгбиеийн хариу урвал илүү удаан үргэлжилдэг гэсэн үг юм. Эхний тарилгыг туслах бодистой хослуулан хэрэглэнэ. Ерөнхийдөө иммуногенийн хэмжээ бага байх үед Freund-ийн туслах бодисыг хэрэглэхийг зөвлөж байна.
Альпакагийн дархлаажуулалтын урьдчилан сэргийлэх арга хэмжээ?

+

(1) Альпака ба дархлааны эсрэгтөрөгчийг сонгох нь амжилттай дархлаажуулалтын түлхүүр юм. Сайн пропорциональ тэмээ сонгохыг зөвлөдөггүй. Дархлааны эсрэгтөрөгчийн цэвэр байдал, зөв хэлбэр нь альпакаар дархлаажуулсны дараа дараагийн хэрэглээнд тохирох эсрэгбиемүүдийг илрүүлэхэд маш чухал юм. Уургийн эсрэгтөрөгчийн цэвэршилт нь ерөнхийдөө 90% -иас багагүй байна.

(2) Лимфоцитыг салгах: Эсийг цаг тухайд нь салгах нь цусыг цуглуулсны дараа цус задралаас урьдчилан сэргийлэхэд хамгийн сайн үр дүнд хүрэх болно.

(3) Дархлааны мөчлөг нь дархлааны хариу урвалд нөлөөлж болно: 1-2 долоо хоногийн дархлааны интервал нь альпакагийн ихэнх эсрэгтөрөгчийн эсрэг сайн дархлаатай байх боломжийг олгодог.

бие даан боловсруулсан туслах

Манай өвөрмөц томъёоны туслах бодис нь альпакагийн дархлааны системийг оновчтой болгож, уламжлалт туслах бодисуудаас илүү өндөр хүч чадал, өвөрмөц байдлыг хангадаг.

Дархлаажуулалтын хүргэлт
стандарт

Дархлаажуулалтыг заасан хугацаанд бүрэн хийж, өндөр титртэй ийлдэс өгч, алхам бүрийг дэлгэрэнгүй тайлангаар бүртгэнэ гэдгээ амлаж байна.

төслийн Чанарын хяналт

Төсөл бүр өндөр стандартад нийцсэн эсрэгбиеийг хэрэглэгчдэд хүргэхийн тулд чанарын хатуу хяналт шалгалтыг явуулдаг.

тодорхойАльпакаСуурь

Бид янз бүрийн дархлаажуулалтын хөтөлбөрүүдэд дэмжлэг үзүүлдэг эрүүл альпака популяцитай.

Хэрэв танд асуух зүйл байвал бидэнтэй хүссэн үедээ холбоо барина уу.

Leave Your Message

Онцлох үйлчилгээ

0102