Амьтны дархлаажуулалтын платформ

Амьтны дархлаажуулалтын платформ нь голчлон тэмээний амьтдыг (альпака лиама, тэмээ) дархлаажуулж, нано биет үйлдвэрлэх үндэс суурийг тавьдаг.

ХОЛБОО БАРИХ

Амьтны дархлаажуулалтын платформ

Alpha Lifetech-ийн амьтны эх үүсвэр нь тодорхой бөгөөд үзлэг, хорио цээрийн зөвшөөрөл, тодорхой генетикийн үндэслэл, тодорхой дархлаажуулалтын давтамж, дархлаажуулалтын интервалын нарийвчилсан бүртгэлтэй тул эсрэгбие үйлдвэрлэхэд тохиромжтой үйлчилгээ үзүүлдэг. Энэ нь голчлон Camelidae амьтдыг (Alpaca Liama, тэмээ) дархлаажуулж, нано биет үйлдвэрлэх үндэс суурийг тавьдаг. Үүнээс гадна, үйлчлүүлэгчдийн шаардлагатай дархлаажуулалтын давтамж болон дархлааны шаардлагын дагуу энгийн амьтдыг (жишээлбэл, Шинэ Зеландын цагаан туулай, хулгана болон бусад амьтад) дархлаажуулж, тэдгээрийг PBMC болгон ялгаж, дараагийн туршилтуудад (жишээлбэл, моноклональ эсрэгбие, поликлональ эсрэгбие боловсруулах гэх мэт) ашиглаж болно. Үйлчлүүлэгчид өөрсдийн дархлаа үүсгэгчийг өгөх боломжтой бөгөөд бид тэдгээрийн чанарын хатуу хяналтыг хийх болно. Хэрэв үйлчлүүлэгчид вирусын дархлаа үүсгэгчийг өгвөл тэдгээрийг идэвхгүй болгох шаардлагатай бөгөөд бид аюулгүй байдлыг хангахын тулд идэвхгүйжүүлэх шинжилгээ хийх болно. Үүний зэрэгцээ бид харгалзах дархлаа үүсгэгчийг үйлчлүүлэгчдийн хэрэгцээнд нийцүүлэн өөрчлөх боломжтой.

Амьтны дархлаажуулалтын танилцуулга

Моноклональ эсрэгбие, поликлональ эсрэгбие, нано биет зэрэг амьтны гаралтай эсрэгбие үйлдвэрлэхдээ эхний алхам бол амьтдыг дархлаажуулж, харгалзах В эс, эсрэгбие буюу PBMC-ийг олж авахын тулд цаашид эсрэгбие үйлдвэрлэхэд бэлтгэх, шинжлэх ухааны үндсэн судалгааг дэмжих, клиник оношилгооны хэрэгслийг боловсруулах, шинэ эмийг нээх, хөгжүүлэхэд дэмжлэг үзүүлэх явдал юм. Тэмээ, альпака, Лиама болон бусад тэмээ нь дархлааны цус цуглуулах, PBMC-ийг гаргаж авах замаар нано биет (ганц домэйн эсрэгбие)-ийн санг үүсгэж чаддаг. Туулай болон бусад амьтдыг дархлаажуулж, биеэс нь эсрэгбие гаргаж авах боломжтой. Цэвэршүүлсний дараа тэдгээрийг поликлональ эсрэгбие үйлдвэрлэхэд ашиглаж болно. Хулгана, харх гэх мэтийг дархлааны аргаар гаргаж авсан В эсийг миелома эсүүдтэй нэгтгэснээр моноклональ эсрэгбие үйлдвэрлэхэд ашиглаж болно. Дархлаажуулалтын өмнө 3R зарчимд (орлуулах, бууруулах, сайжруулах) анхаарлаа хандуулах хэрэгтэй бөгөөд энэ нь ашигласан амьтдын тоог шаардлагатай хамгийн бага хэмжээнд хүртэл бууруулж, туршилтын журмыг сайжруулж, амьтдын зовлонг багасгах боломжтой. Туршилтын зохих загвар, тохирох эсрэгбие сонгох, хатуу баталгаажуулалтын журмыг дагаж мөрдөх ёстой.

Дархлаа үүсгэгчдийн ангилал - нано биетийн үйлдвэрлэл

Дархлаа үүсгэгчдийн төрлүүд	Жишээ	Дархлааны бэлтгэл	Тэмдэглэл
Уургийн иммуногенүүд	Ферментүүд, уураг, бактерийн хор болон бусад бодисууд	Өөр өөр уургийн илэрхийлэлийн системийг сонгоно уу: E. coli, мөөгөнцөр, шавьжны эс, хөхтөн амьтны эс болон эсгүй систем	Уургийн илэрхийлэлд нөлөөлдөг температур, цаг хугацаа, рН, орцын биетүүд зэрэг хүчин зүйлүүдэд анхаарлаа хандуулаарай
Нуклейн хүчлийн иммуногенүүд	ДНХ, РНХ	ДНХ-ийн иммуноген: Плазмид ДНХ-г бүтээх, зорилтот генүүдэд тохирох экспрессийн векторуудыг клонжуулах, плазмид ДНХ-г олшруулах өсгөврийн эсүүд болон өндөр цэвэршилттэй плазмид ДНХ-г гаргаж авах РНХ иммуноген: Задралаас урьдчилан сэргийлэхийн тулд малгайны бүтэц болон PolyA сүүл нэмэх шаардлагатай байна	ДНХ-ийн дархлаа үүсгэгч бэлтгэхдээ зохих эзэн эсүүдэд анхаарлаа хандуулах хэрэгтэй бөгөөд РНХ-ийн дархлаа үүсгэгч бэлтгэхдээ РНХ-ийн задралаас урьдчилан сэргийлэхэд анхаарах хэрэгтэй.
Вирусын дархлаа үүсгэгчид	Вирусын бүхэл идэвхгүйжүүлсэн вакцин, дэд нэгжийн вакцин, вирусын векторын вакцин (аденовирус, лентивирус гэх мэт), mRAN вакцин.	Вирусын идэвхгүйжүүлсэн вакциныг бүхэлд нь бэлтгэхдээ аюулгүй байдлыг нэмэгдүүлэхийн тулд эхлээд вирусыг идэвхгүйжүүлдэг. Идэвхгүйжүүлэлт бүрэн хийгдсэн эсэхийг тодорхойлохын тулд хордлогын шинжилгээг ашигладаг. Дэд нэгжийн вакцинууд нь зөвхөн вирусын гадаргуугийн уургийг антиген болгон ашигладаг бөгөөд дархлааны үр нөлөөг харгалзан үзэх шаардлагатай.	Дархлааны нөлөө үзүүлэхийн тулд туслах бодис нэмэх, идэвхгүйжүүлэх шаардлагатай вируст анхаарлаа хандуулах, дархлааны нөлөөг хангахын тулд зохих вирусын титр шаардлагатай бөгөөд бэлтгэлийн үйл явцын аюулгүй байдлыг хатуу хянах шаардлагатай.

Амьтны дархлаажуулалтын үйл явц эсвэл цагийн хуваарь

Амьтны сонголт ба эсрэгтөрөгч бэлтгэх

Амьтны сонголт: Эрүүл бүлгүүдээс зөв нас, эрүүл бие бялдартай альпакаг сонгож, халдварт өвчин болон бусад эрүүл мэндийн асуудал байхгүй эсэхийг баталгаажуулахын тулд цусны шинжилгээ, өвчний илрүүлэг хий.

Дархлааны урвалыг өдөөх гол түлхүүр нь дархлааны урвал юм. Дархлааны урвалыг өдөөх гол хүчин зүйл нь дархлааны эсрэгбиеийн шаардлагад үндэслэн тохирох уураг, пептид эсвэл бусад тохиромжтой бодисыг сонгох явдал юм.

Альпакаг 1-3 эсрэгтөрөгчөөр нэгэн зэрэг дархлаажуулж болох бөгөөд нийт антигенийн хэмжээ нь нэг дархлаажуулалтад 1-2 мг, эзэлхүүн нь 2 мл-ээс бага байна. Дархлаажуулалтын өмнө эсрэгтөрөгч болон туслах бодисыг 1:1 харьцаатай эмульсжүүлж нэгэн жигд холимог үүсгэж, 4°C-д хадгална.

Дархлаа судлалын альпака

Хоосон альпака чихний дугаарыг тэмдэглээд дархлаажуулалтын туршилтыг эхлүүлнэ. Альпакагийн хүзүүний ойролцоох тунгалгийн булчирхайд хоёр талаас нь тарьж, тал бүр дээр нь 2 цэг, цэг бүрт ойролцоогоор 0.4 мл эмульсжүүлсэн эсрэгтөрөгч тарина. Дархлаажуулалтын дараа альпакад тав тухгүй байдлын шинж тэмдэг илрээгүй эсэхийг баталгаажуулахын тулд хагас цагийн турш ажиглана. Дархлаажуулалтыг 2 долоо хоног тутамд, дор хаяж 4 удаа дархлаажуулалт хийх шаардлагатай.

Цус цуглуулах

5-7 хоногийн турш 4 удаа дархлаажуулалт хийсний дараа альпакагийн хүзүүний судаснаас 50 мл цус цуглуулна.

Сийвэнгийн ялгарал

Антигенийн эсрэг дархлаажуулалт бүрийн өмнө дархлааны үнэлгээнд зориулж цусны дээж цуглуулж, тус бүрдээ 5 мл цус авдаг; Тухайн өдөр цусыг 25 ℃ температурт урьдчилан хөргөсөн центрифугээр 400 xg-д 30 минутын турш центрифугээр ялгасан. Сийвэнгийн дээд давхаргыг ялгаж, дараагийн эсрэгбиеийн титрийн шинжилгээнд зориулж хадгалсан.

Лимфоцитуудыг тусад нь

Эхлээд 15 мл эсийн ялгах уусмал нэмээд, дараа нь 50 мл центрифугийн хоолойд 15 мл цусыг аажмаар нэмнэ. Цус болон ялгах уусмал холилдохоос сэргийлж цус нэмэхдээ болгоомжтой, удаан байгаарай. 25 ℃-д урьдчилан хөргөсөн центрифуг хийж, 400 xg-д 30 минут центрифуг хийж, дээд ийлдсийг шинэ центрифугийн хоолойд -80 ℃-д хадгална; Дунд хөвөн хэлбэртэй дээд давхаргын дархлааны эсүүдийг пипеткээр соруулж, шинэ 50 мл центрифугийн хоолойд хийнэ. Хоолой бүрт өрөөний температурт 10 мл PBS буфер нэмж, 25 ℃ ба 400 xg-д 20 минут центрифуг хийнэ. Дээд давхаргыг аваад, хоолой бүрт өрөөний температурт 5 мл PBS буфер нэмж, зөөлөн холино, гемоцитометр ашиглан эсийн тоог тооцоолж, дараа нь 25 ℃ ба 400 xg-д 20 минут центрифуг хийнэ. Дээд давхаргыг авч, эсийн тоонд үндэслэн RNAiso Plus-аар гаргаж авсан лимфоцитуудыг уусгаж, 10 ^ 7/мл эсийн лизат гаргаж аваад -80°C-д хадгална.

Зураг 1: Эсрэгбие илрүүлэх янз бүрийн стратеги ба үүнд хамаарах туршилтын үе шатуудын схемийн дүрслэл. (Зураг эх сурвалж: Лаустсен, Андреас Х. нар.)

Үйлчлүүлэгчид дархлааны системийн чанарын хатуу хяналтыг хангадаг

Дархлаа үүсгэгчдийн төрлүүд	Шаардлага	Чанарын хяналтын арга
Пептид / Жижиг молекулын дээж	Уусалтын нөхцөл (голчлон фагуудыг идэвхгүйжүүлэх эсэхээс хамаарна), молекулын бүтэц/пептидийн дараалал, синтезийн тайлан (HPLC/MS/HNMR)	HPLC/MS илрүүлэлт
Уургийн дээж	SDS-PAGE/WB, сэргээлтийн нөхцөл, буфер, шошгоны мэдээлэл, нийт хэмжээ (20-50 мкг), концентраци, цэвэршилт гэх мэт	SDS-PAGE/WB
Эсийн дээж	Эсийн төрөл (анхдагч эсүүд/генийн засварласан эсүүд), эсийн хэлбэр (шинэхэн/хөлдөөсөн гэсгээсэн), өсөлтийн төрөл (наалдсан/түдгэлзүүлсэн), өсгөврийн орчны шаардлага, өгсөн эсийн тоо, өгсөн эсийн тоо, скрининг байг тогтвортой илэрхийлэхийг хангахын тулд генийн засварласан эсүүд (хэрэглэгчийн харгалзах анхдагч эсрэгбие), нөхөн сэргэлтийн түвшинг тодорхойлохын тулд хөлдөөсөн гэссэн эсүүд	Голчлон генийн засварласан эсүүдийг онилдог бөгөөд зорилтот экспрессийг ELISA аргаар тодорхойлох (манай компани HRP хоёрдогч эсрэгбие өгдөг), урсгалын цитометрийн илрүүлэлт (манай компани флуоресцент хоёрдогч эсрэгбие өгөх боломжтой)-д зориулж хэрэглэгчийн нийлүүлсэн анхдагч эсрэгбиеийг ашигладаг.

Амьтны дархлааны хэрэглээ юу вэ?

+

Поликлональ эсрэгбиеийг амьтдыг дархлаажуулах замаар, моноклональ эсрэгбиеийг В эсийг миелома эсүүдтэй нэгтгэх замаар, мөн PBMC-ийг тэмээний эх үүсвэрээс (альпака, тэмээ, альпака гэх мэт) гаргаж авч нанобие, Fab фрагмент, scFv эсрэгбиеийн фрагмент гэх мэт янз бүрийн эсрэгбиеийн фрагментийн хэлбэрийг гаргаж авч болно.
Амьтны дархлааг хамгаалахын тулд ямар урьдчилан сэргийлэх арга хэмжээ авах вэ?

+

Тэмээний гаралтай амьтдад нано эсрэгбие үйлдвэрлэхийн тулд 5-6 удаа дархлаажуулалт хийх шаардлагатай. Дархлаажуулалтын өмнө хяналтын цусны дээж авах бөгөөд дархлаажуулалт бүрийн хооронд 2 долоо хоногийн зайтай байх ёстой. Дөрөв дэх удаагийн дархлаажуулалтын дараа титрийг тодорхойлохын тулд ELISA шинжилгээнд эерэг цус болон дархлаажуулалтад ороогүй сөрөг цус цуглуулах шаардлагатай. Хэрэв титр 10 ^ 6-аас доош байвал титр зохих түвшинд хүрэх хүртэл дархлаажуулалтын тоог нэмэгдүүлэх шаардлагатай. Туулайн дархлаажуулалт (туулайн дархлаажуулалтын оновчтой буюу нийтлэг уургийн эсрэгтөрөгчийн түвшин 50-1000 мкг), хулганы дархлаажуулалт (хулганы дархлаажуулалтын оновчтой буюу нийтлэг уургийн эсрэгтөрөгчийн түвшин 5-50 мкг бөгөөд хэрэв эс бол 10 ^ 6 эс, нуклейн хүчил эсвэл нүүрс усны хувьд 10-50 мкг шаардлагатай), ямааны дархлаажуулалт (ямааны дархлаажуулалтын оновчтой буюу нийтлэг уургийн эсрэгтөрөгчийн түвшин 250-5000 мкг) гэх мэт бусад амьтдын дархлаажуулалтын хувьд дархлаа үүсгэгч бодисын тун, аюулгүй байдал, үр нөлөөнд анхаарлаа хандуулах хэрэгтэй.
Дархлаатай амьтдыг хэрхэн сонгох вэ?

+

Үйлчлүүлэгчийн шаардлагатай эсрэгбиеийн төрлөөс хамааран, хэрэв та нано биет эсвэл бусад эсрэгбиеийн хэлтэрхий үйлдвэрлэх шаардлагатай бол дархлаажуулалтад тэмээний гаралтай амьтдыг (тэмээ, альпака, альпака) сонгож болно. Хэрэв та моноклональ эсвэл поликлональ эсрэгбие үйлдвэрлэх шаардлагатай бол ийлдэс, антиген, антигенийн эх үүсвэрийн хэмжээгээр харгалзах зүйлийг сонгох хэрэгтэй. Туулайн ийлдсийн дээд хэмжээ нь 500 мл бөгөөд энэ нь бага хэмжээний антиген шаарддаг бөгөөд поликлональ эсрэгбие үйлдвэрлэх үндсэн сонголт юм. Хулганы ийлдсийн дээд хэмжээ нь 2 мл, хархны ийлдсийн дээд хэмжээ нь 20 мл бөгөөд энэ нь ихэвчлэн моноклональ эсрэгбиеийн хувьд хамгийн оновчтой сонголт юм. Ямааны гаралтай эсрэгбие нь өндөр хамааралтай байдаг бөгөөд Alpha Lifetech нь таны шаардлагад нийцүүлэн танд зориулсан онцгой дархлаажуулалтын төлөвлөгөөг өөрчлөх боломжтой.
Антигенийг туслах бодисуудтай хамт хэрэглэх шаардлагатай юу? Хэрхэн сонгох вэ?

+

Туслах бодисууд нь хоёр төрөл байдаг: тосонд суурилсан ба усан суурьтай. Туслах бодисуудыг зохистой хэрэглэх нь уусдаг антигенд хүчтэй эсрэгбиеийн хариу урвалыг өдөөхөд чухал үүрэгтэй. Туслах бодисууд удаан хугацаанд ялгардаг тул антигенийг бага тунгаар хэрэглэж болох бөгөөд эсрэгбиеийн хариу урвал илүү удаан үргэлжилдэг. Эхний тарилгыг туслах бодистой хамт хэрэглэх хэрэгтэй. Дархлаа үүсгэгч бодисын хэмжээ бага байх үед Фройндийн туслах бодисыг хэрэглэхийг ерөнхийд нь зөвлөж байна.
Альпакагийн дархлаажуулалтын урьдчилан сэргийлэх арга хэмжээ?

+

(1) Альпака болон дархлааны эсрэгтөрөгчийг сонгох нь дархлаажуулалтыг амжилттай хийх гол түлхүүр юм. Зөв пропорциональ тэмээ сонгохыг зөвлөдөггүй. Дархлааны эсрэгтөрөгчийн цэвэр байдал болон зөв хэлбэржилт нь альпакагаар дархлаажуулсны дараа дараагийн хэрэглээнд тохиромжтой эсрэгбиеийг илрүүлэхэд чухал үүрэгтэй. Уургийн эсрэгтөрөгчийн цэвэр байдал ерөнхийдөө 90%-иас багагүй байдаг.

(2) Лимфоцитуудыг ялгах: Эсийг цаг тухайд нь ялгах нь цус цуглуулсны дараа гемолизийг үр дүнтэй урьдчилан сэргийлэхийн тулд хамгийн сайн ялгах үр дүнд хүрэх боломжтой.

(3) Дархлааны мөчлөг нь дархлааны хариу урвалд нөлөөлж болно: 1-2 долоо хоногийн дархлааны завсарлага нь альпака загасыг ихэнх антигенд сайн дархлааны хариу урвал үзүүлэх боломжийг олгодог.

бие даан боловсруулсан туслах бодис

Манай өвөрмөц найрлагатай туслах бодис нь альпакагийн дархлааны системд тохируулан боловсруулсан бөгөөд уламжлалт туслах бодисуудаас илүү өндөр үр нөлөө, өвөрмөц чанарыг өгдөг.

Дархлаажуулалтын хүргэлт
стандарт

Бид тогтоосон хугацаанд дархлаажуулалтыг дуусгаж, өндөр титртэй ийлдэс өгч, алхам бүрийг дэлгэрэнгүй тайлангаар бүртгэнэ гэж амлаж байна.

төслийн чанарын хяналт

Төсөл бүр нь өндөр стандартад нийцсэн эсрэгбиеийг үйлчлүүлэгчдэд хүргэхийн тулд чанарын хяналтын хатуу процессыг явуулдаг.

тодорхойАльпакаАрын дэвсгэр

Бид янз бүрийн дархлаажуулалтын хөтөлбөрийг дэмждэг эрүүл альпака загасны популяцитай.

Хэрэв танд асуулт байвал бидэнтэй хэзээ ч холбогдоно уу.

Leave Your Message

Онцлох үйлчилгээ

0102