Эсрэг биеттэй холбоотой боловсрох үйлчилгээ

Alpha Lifetech Inc.мутаци, сонгон шалгаруулах технологийг ашиглан эсрэгбиеийн ойр дотно боловсорч гүйцэх үйлчилгээг санал болгож чадна. Бид ихэвчлэн scFv-ийг ойр дотны төлөвшилтийн үйл явцын эсрэгбие формат болон антиген холбох скрининг хийх явцад авидитийн нөлөөг бууруулахад ашигладаг моновалент дэлгэцийн фагемидын систем болгон ашигладаг. Манай мэргэжлийн баг нь нэг домэйн эсрэгбиемүүдэд ойртох боловсорч гүйцсэн үйлчилгээг үзүүлэх боломжтой.

Alpha Lifetech Inc.дэлхийн үйлчлүүлэгчдийн төрөл бүрийн хэрэгцээг хангах цогц үйлчилгээг санал болгож байгаадаа баяртай байна. Бидний зорилго бол янз бүрийн хэрэглэгчдийн эрэлт хэрэгцээг ойлгож, хангах, судалгааны ажилд удахгүй болох болон шинээр гарч ирж буй аливаа асуудлыг шийдвэрлэхэд туслах явдал юм.

Ойролцоох төлөвшил гэж юу вэ?

Ойролцоох төлөвшил гэдэг нь эсрэгбие нь тодорхой эсрэгтөрөгчтэй ойртох чадварыг нэмэгдүүлэхийн тулд давтан мутацид орж, сонгогдох үйл явц юм. Голчлон хоёрдогч лимфоид эрхтнүүдийн үр хөврөлийн төвд үүсдэг В эсүүд нь Т эс ба уутанцрын дендрит эсийн нөлөөн дор соматик гипермутаци, сонголтонд ордог.
Ойролцоох боловсорч гүйцсэн процессын үед гадаргуугийн иммуноглобулины рецептор багатай В эсүүд эсрэгтөрөгчтэй тулгарах үед идэвхжиж, тархалт, ялгаралт явагддаг. Соматик гипермутацийн ойрын төлөвшилтөөр иммуноглобулины генийн хувьсах бүсэд санамсаргүй нуклеотидын орлуулалт үүсдэг бөгөөд энэ нь эсрэгбиеийн янз бүрийн хувилбаруудыг үйлдвэрлэхэд хүргэдэг. Соматик гипермутацийн дараа эсрэгтөрөгчөөр удирдуулсан сонголтыг мутацилагдсан иммуноглобулины рецептортой В эсүүд дээр хийдэг. Антигенийн хамаарал ихэссэн эсрэгбие үүсгэдэг В эсүүд илүү сайн хадгалагдаж, үржихийг зөвшөөрдөг бол харьцангуй бага эсвэл өөрчлөгдөөгүй В эсүүд апоптозоор дамждаг. Мутаци ба сонгон шалгаруулалтын энэхүү давтагдах үйл явц нь В эсийн клоныг үйлдвэрлэхэд хүргэдэг бөгөөд эсрэгтөрөгчтэй аажмаар илүү их хамааралтай эсрэгбие үүсгэдэг.

Эсрэг биеттэй холбоотой боловсрох үйлчилгээ

ПГУ-д суурилсан аргуудын гол давуу тал нь мутаци нь олшруулсан фрагментийг яг нарийн чиглүүлдэг; алдааны түвшинг хянахад хялбар бөгөөд арга нь хурдан бөгөөд хялбар тохируулгатай бөгөөд химийн аюултай бодис ашигладаггүй. Так ДНХ полимераз нь 3'-5' нягтлах үйл ажиллагаа байхгүй тул ДНХ-ийг бага үнэнчээр хуулбарладгийг сайн мэддэг.Альфа Lifetechэсрэгбиеийн инженерчлэлийн платформ нь дэд номын сангийн барилгын явцад голчлон CDR бүс нутгуудыг мутацид оруулахын тулд алдаатай ПГУ-ын аргыг ашигладаг. Дэд номын сангийн генетикийн олон янз байдлыг нэмэгдүүлэхийн тулд бид ихэнхдээ VH ба VL хэсгүүдийн бүхэлдээ санамсаргүй байрлалаар мутаци үүсгэдэг. Алдаатай ПГУ-ын аргаар мутацитай эсрэгбиеийн генийн санг байгуулсны дараа өндөр хамааралтай хувилбаруудыг (scFv эсрэгбиеийн хамаарал нь 10^8 - 10^10 М хүрч болно) сонгохдоо уусмал дотор эргүүлэх эсвэл хурдаас хамааралгүй сонгоход оновчтой угаах нөхцөл бүхий хөдөлгөөнгүй антиген дээр хийгддэг.
  
ЭрдэмтэдAlpha Lifetech Inc.Escherichia coli мутатор омог mutAD5TM-ийг санамсаргүй мутац нэвтрүүлэх хэд хэдэн мутацийн стратегийн нэг болгон ашиглах, улмаар рекомбинант эсрэгбиеийн фрагментуудын ойр дотно байдал, экспрессийг өөрчлөх. Үйлдвэрлэлийн түвшин нэмэгдсэн эсрэгбиеийн хэсгүүдийг сонгох нөхцлийг өөрчилж болно. Escherichia coli мутатор эсийн өсөлтийн нөхцөлийг ДНХ-ийн нэг килобаза тутамд нэг санамсаргүй цэгийн мутацыг нэвтрүүлэхийн тулд тохируулж болно, энэ нь scFv фрагмент тутамд нэг кодоны өөрчлөлттэй бараг тэнцүү юм. Мутаци, дэлгэц, сонголтын хэд хэдэн мөчлөгийн дараа бид 10^5 - 10^6 М-ээс 10^8 - 10^10 М хүртэл ойртох тогтмолыг сайжруулж чадна.

Ойролцоох төлөвшлийн стратегийг сайжруулах

Ойролцоо байдлыг сайжруулахын тулд эсрэгбиеийн тодорхой байрлалыг тодорхой олон янз байдалд (бүх 20 амин хүчлүүдтэй бүрэн санамсаргүй байдлаар эсвэл сонгосон амин хүчлүүдтэй тогтсон хувь хэмжээгээр хэвийсэн санамсаргүй байдлаар) санамсаргүй байдлаар сонгож болно. Бид эсрэгбиеийн ойр дотны чанарыг сайжруулах хоёр стратегитай: нэгдүгээрт, мутацийг сайт руу чиглэсэн мутагенезаар нөхөж тодорхойлох бүс нутагт (CDRs) хязгаарлагдмал байрлалд нэвтрүүлдэг; Хоёрдугаарт, мутаци нь санамсаргүй мутагенезаар V-кодлогддог бүх мужид нэвтэрдэг. Эдгээр хоёр аргыг хэрэглэснээр хадгалагдсан амин хүчлийн дараалал эсвэл эсрэгбиеийн бүх хүрээг бусад амин хүчлүүдээр орлуулах бөгөөд энэ нь манай пептидийн номын сангийн сканнерын технологитой хослуулан сонирхож буй эсрэгбиемүүдийн ойр дотно байдлыг маш өндөр түвшинд хүргэх болно.

Фагийн дэлгэц-эсрэгбиеийн хамаарал

scFv мутант номын сан баригдсаны дараа скрининг хийх хоёр стратеги байдаг: биопаннинг ба хатуу эсрэгтөрөгчийг ялгах. Эхний тохиолдолд субстратын хасах концентрацийг өндөр хамааралтай эсрэгбиемийг тусгаарлахад ашигладаг, учир нь бага хамааралтай мутантууд угааж, өндөр авидиттай фагийн хэсгүүд үлдэх болно. Хоёрдахь стратеги нь уусмал дахь шошготой эсрэгтөрөгчийг ашиглах, тэнцвэрийн тогтмол (Kd) дээр тулгуурлан сонгох, холбох кинетик дээр үндэслэн сонгох, энэ сонголтын арга нь сайжруулсан Kd бүхий эсрэгбиеийн хувилбаруудыг ялгадаг.

Хэрэв танд асуух зүйл байвал бидэнтэй хүссэн үедээ холбоо барина уу.