Эсрэгбиеийн хамаарлын боловсорч гүйцэх үйлчилгээ

Альфа Лайфтек ХХКмутаци болон сонголтын технологийг ашиглан эсрэгбиеийн хамаарлын боловсролтын үйлчилгээг санал болгож чадна. Бид ихэвчлэн scFv-ийг хамаарлын боловсролтын үйлчилгээний процесст эсрэгбиеийн формат болгон ашигладаг бөгөөд антиген холбох скрининг хийх үед авидын нөлөөллийг бууруулахад ашиглагдаж ирсэн моновалент дэлгэцийн фагемид систем юм. Манай мэргэжлийн баг мөн дан домэйнтэй эсрэгбиеийн хамаарлын боловсролтын үйлчилгээг үзүүлж чадна.

Альфа Лайфтек ХХКдэлхийн хэмжээний үйлчлүүлэгчдийн олон янзын хэрэгцээг хангах цогц үйлчилгээг санал болгож байгаадаа баяртай байна. Бидний зорилго бол янз бүрийн үйлчлүүлэгчдийн эрэлт хэрэгцээг ойлгож, хангах, судалгааны ажилд гарч буй болон шинээр гарч ирж буй аливаа асуудлыг шийдвэрлэхэд туслах явдал юм.

Хамаарлын төлөвшил гэж юу вэ?

Аффинит боловсролт гэдэг нь эсрэгбие нь тодорхой эсрэгтөрөгчийн хувьд хамааралтай байдлаа нэмэгдүүлэхийн тулд давтан мутаци болон сонголтод ордог үйл явц юм. Голчлон хоёрдогч лимфоид эрхтний үр хөврөлийн төвд тохиолддог В эсүүд нь Т эсүүд болон фолликулын дендрит эсүүдийн нөлөөгөөр соматик гипермутаци болон сонголтод ордог.
Хамтралын боловсорлын процессын үед бага хамааралтай гадаргуугийн иммуноглобулины рецептортой В эсүүд нь антигентэй тулгарснаар идэвхжиж, үржил шим, ялгаралтад ордог. Соматик гипермутацийн хамаарлын боловсорлын замаар иммуноглобулины генийн хувьсах хэсэгт санамсаргүй нуклеотидын орлуулалт үүсч, янз бүрийн эсрэгбиеийн хувилбарууд үүсдэг. Соматик гипермутацийн дараа мутацид орсон иммуноглобулины рецептортой В эсүүд дээр антигенээр удирдуулсан сонголт хийгддэг. Антигенийн хамаарал нэмэгдсэн эсрэгбие үүсгэдэг В эсүүд хадгалагдаж, үржихийг зөвшөөрдөг бол хамаарал буурсан эсвэл өөрчлөгдөөгүй В эсүүд апоптозоор дамждаг. Мутаци ба сонголтын энэхүү давтагдах үйл явц нь В эсийн клонуудыг үүсгэхэд хүргэдэг бөгөөд эсрэгтөрөгчтэй аажмаар илүү өндөр хамааралтай эсрэгбие үүсгэдэг.

Эсрэгбиеийн хамаарлын боловсорч гүйцэх үйлчилгээ

ПГУ-д суурилсан аргуудын гол давуу талууд нь мутаци нь олшруулсан фрагментэд яг тохирсон байдагт оршино; алдааны түвшинг хянах нь хялбар бөгөөд аргыг тохируулахад хурдан бөгөөд хялбар бөгөөд аюултай химийн бодис ашигладаггүй. Taq ДНХ полимераза нь ДНХ-ийг бага нарийвчлалтайгаар хуулбарладаг нь мэдэгдэж байгаа бөгөөд энэ нь 3'-5' хянан засварлах идэвхжил байхгүйтэй холбоотой юм.Альфа ЛайфтекийнЭсрэгбиеийн инженерчлэлийн платформ нь дэд номын сангийн барилгын явцад голчлон CDR бүс нутгуудыг мутацид оруулахын тулд алдаа гарах магадлалтай PCR аргыг хэрэглэдэг. Мөн бид дэд номын сангийн генетикийн олон янз байдлыг нэмэгдүүлэхийн тулд VH болон VL фрагментуудын бүхэлд нь санамсаргүй байрлалд мутаци үүсгэдэг. Алдаа гарах магадлалтай PCR-ээр мутацид орсон эсрэгбиеийн генийн санг байгуулсны дараа өндөр хамааралтай хувилбаруудыг (scFv эсрэгбиеийн хамааралтай байдал 10^8 - 10^10 M хүрч болно) сонгох ажлыг уусмалд хийх эсвэл хөдөлгөөнгүй антиген дээр хурдаас хамааралтай сонголтод оновчтой болгосон угаах нөхцөлтэйгөөр гүйцэтгэдэг.
  
ЭрдэмтэдАльфа Лайфтек ХХКEscherichia coli мутатор омгийн mutAD5TM-ийг санамсаргүй мутацийг нэвтрүүлэх хэд хэдэн мутацийн стратегийн нэг болгон ашиглаж, улмаар рекомбинант эсрэгбиеийн хэлтэрхийнүүдийн хамаарал ба экспрессийг өөрчлөх. Үйлдвэрлэлийн түвшин нэмэгдсэн эсрэгбиеийн хэлтэрхийнүүдийн хувьд сонголтын нөхцлийг өөрчилж болно. Escherichia coli мутатор эсийн өсөлтийн нөхцлийг ДНХ-ийн килобаз тутамд нэг санамсаргүй цэгийн мутацийг нэвтрүүлэхээр тохируулж болох бөгөөд энэ нь scFv хэлтэрхий тутамд нэг кодоны өөрчлөлттэй бараг тэнцүү юм. Мутаци, дэлгэц, сонголтын хэд хэдэн мөчлөгийн дараа бид хамаарлын тогтмолыг 10^5 - 10^6 M-ээс 10^8 - 10^10 M хүртэл сайжруулж чадна.

Хамаарлын төлөвшлийн стратегиудыг сайжруулах

Эсрэгбиеийн тодорхой байрлалыг тодорхой олон янз байдалд санамсаргүй байдлаар тохируулж (жишээлбэл, бүх 20 амин хүчлээр бүрэн санамсаргүй байдлаар тохируулах эсвэл сонгосон амин хүчлүүдээр тогтмол хувиар хазайсан санамсаргүй байдлаар тохируулах), хамаарлыг сайжруулах боломжтой. Эсрэгбиеийн хамаарлыг сайжруулах хоёр стратеги бидэнд бий: нэгдүгээрт, мутацийг сайтын чиглэлт мутагенезээр дамжуулан комплементар чанарыг тодорхойлох бүс нутгуудад (CDRs) хязгаарлагдмал байрлалд нэвтрүүлдэг; хоёрдугаарт, мутацийг санамсаргүй мутагенезээр V-кодлох бүх бүс нутгуудад нэвтрүүлдэг. Эдгээр хоёр аргыг ашигласнаар хадгалагдсан амин хүчлийн дараалал эсвэл эсрэгбиеийн бүхэл бүтэн хүрээний бүсийг бусад амин хүчлээр орлуулах бөгөөд энэ нь бидний пептидийн сангийн сканнердах технологитой хослуулан сонирхлын эсрэгбиеийн хамаарлыг маш өндөр түвшинд нэмэгдүүлэх боломжтой.

Фагийн дэлгэц-эсрэгбиеийн хамаарал

scFv мутант санг байгуулсны дараа хоёр скрининг стратеги байдаг: биопаннинг ба хатуу антиген ялгах. Эхнийх нь өндөр хамааралтай эсрэгбиеийг ялгахын тулд субстратын хасагдах концентрацийг ашигладаг бөгөөд учир нь бага хамааралтай мутантууд угааж, өндөр хамааралтай фагийн хэсгүүд үлддэг. Хоёр дахь стратеги нь уусмал дахь шошготой антигенийг ашиглан тэнцвэрийн тогтмол (Kd) дээр үндэслэн сонгож, холболтын кинетик дээр үндэслэн сонгож, энэхүү сонголтын арга нь сайжруулсан Kd бүхий эсрэгбиеийн хувилбаруудыг ялгаж өгдөг.

Хэрэв танд асуулт байвал бидэнтэй хэзээ ч холбогдоно уу.