Эсрэгбиеийн инженерчлэл гэж юу вэ?

Эсрэгбиеийн инженерчлэлийн тусламжтайгаар эсрэгбиеийн молекулын хэмжээ, фармакокинетик, дархлааны үүсэл, холболтын хамаарал, өвөрмөц чанар болон эффекторын үйл ажиллагааг өөрчлөх боломжтой болсон. Эсрэгбиеийг нийлэгжүүлсний дараа эсрэгбиеийн өвөрмөц холболт нь тэдгээрийг эмнэлзүйн оношлогоо, эмчилгээнд маш үнэ цэнэтэй болгодог. Эсрэгбиеийн инженерчлэлийн тусламжтайгаар тэдгээр нь эмийн болон оношилгооны эрт үеийн хөгжлийн хэрэгцээг хангаж чадна.

Эсрэгбиеийн инженерчлэлийн зорилго нь байгалийн эсрэгбие хийж чадахгүй өндөр өвөрмөц, тогтвортой функцуудыг зохион бүтээж, үйлдвэрлэх, эмчилгээний эсрэгбие үйлдвэрлэх үндэс суурийг тавих явдал юм.

Альфа Лайфтек нь эсрэгбиеийн инженерчлэлийн чиглэлээр өргөн хүрээтэй төслийн туршлагатай бөгөөд олон зүйлийн хувьд моноклональ болон поликлональ эсрэгбиеийн үйлчилгээ, мөн фагийн дэлгэцийн эсрэгбиеийн сан байгуулах, скрининг хийх үйлчилгээг үзүүлэх боломжтой. Альфа Лайфтек нь үйлчлүүлэгчдэд үр ашигтай, өндөр өвөрмөц, тогтвортой эсрэгбие үйлдвэрлэхийн тулд чанартай биоижил төстэй эсрэгбие болон рекомбинант уургийн бүтээгдэхүүн, түүнчлэн холбогдох үйлчилгээг үзүүлэх боломжтой. Бид цогц эсрэгбие, уургийн платформ болон фагийн дэлгэцийн системийг ашигласнаар эсрэгбие үйлдвэрлэх дээд болон доод шатны үйлчилгээг үзүүлдэг бөгөөд үүнд эсрэгбиеийг хүнжүүлэх, эсрэгбие цэвэршүүлэх, эсрэгбиеийн дараалал тогтоох, эсрэгбиеийн баталгаажуулалт зэрэг техникийн үйлчилгээ орно.

Эсрэгбиеийн инженерчлэлийн анхдагч үе шат нь хоёр технологитой холбоотой:

--Рекомбинант ДНХ-ийн технологи

--Гибридома технологи

Эсрэгбиеийн инженерчлэлийн хурдацтай хөгжил нь гурван чухал технологитой холбоотой:

--Генийн клоны технологи ба полимеразын гинжин урвал

--Уургийн экспресс: Рекомбинант уургууд нь мөөгөнцөр, саваа хэлбэртэй вирус, ургамал зэрэг экспрессийн системүүдээр үүсгэгддэг.

--Компьютерийн тусламжтайгаар бүтцийн зураг төсөл

Эхний үеийн эсрэгбиеийг химер эсрэгбие үйлдвэрлэх зорилгоор хүнжүүлсэн бөгөөд хулганы моноклональ эсрэгбиеийн хувьсах хэсгийг хүний ​​IgG молекулуудын тогтмол хэсэгтэй холбосон. Хоёр дахь үеийн хулганы моноклональ эсрэгбиеийн антиген холбох хэсгийг (CDR) хүний ​​IgG руу шилжүүлэн суулгасан. CDR хэсгээс бусад бүх эсрэгбие нь бараг хүний ​​эсрэгбие бөгөөд хүний ​​эмчилгээнд хулганы клоны эсрэгбие хэрэглэх үед хүний ​​хулганы эсрэгбие (HAMA)-ийн хариу урвалыг өдөөхөөс зайлсхийхийг хичээсэн.

 

Фагийн дэлгэцийн номын санг байгуулахын тулд эхний алхам бол дархлаажуулсан амьтдын В эсээс ялгаж (дархлааны номын сангийн бүтэц), дархлаажуулаагүй амьтдаас шууд гаргаж авах (байгалийн номын сангийн бүтэц), эсвэл эсрэгбиеийн генийн хэлтэрхий ашиглан in vitro угсарч болох эсрэгбие кодчилдог генийг олж авах явдал юм (синтетик номын сангийн бүтэц). Дараа нь генийг PCR-ээр олшруулж, плазмид руу оруулж, тохиромжтой эзэн системд (мөөгөнцрийн экспресс (ихэвчлэн Pichia pastoris), прокариотын экспресс (ихэвчлэн E. coli), хөхтөн амьтдын эсийн экспресс, ургамлын эсийн экспресс, саваа хэлбэртэй вирусээр халдварлагдсан шавьжны эсийн экспресс) илэрхийлдэг. Хамгийн түгээмэл нь E. coli экспрессийн систем бөгөөд энэ нь тодорхой кодчилдог эсрэгбиеийн дарааллыг фаг дээр нэгтгэж, фагийн бүрхүүлийн уургуудын нэгийг (pIII эсвэл pVIII) кодчилдог. Бактериофагуудын гадаргуу дээр , And генийн нэгдэл гарч ирдэг. Энэхүү технологийн гол цөм нь фагийн дэлгэцийн номын санг байгуулах явдал бөгөөд энэ нь байгалийн номын сангуудаас тодорхой холболттой байж чаддагаараа давуу талтай юм. Дараа нь эсрэгтөрөгчийн өвөрмөц чанар бүхий эсрэгбиеийг биологийн сонголтын процессоор шалгаж, зорилтот эсрэгтөрөгчийг бэхэлж, холбоогүй фагуудыг дахин дахин угааж, холбогдсон фагуудыг цааш баяжуулахын тулд угаана. Гурван ба түүнээс дээш удаа давтагдсаны дараа өндөр өвөрмөц чанар ба өндөр хамааралтай эсрэгбиеийг ялгаж авдаг.

Зураг 3: Эсрэгбиеийн номын сангийн бүтэц ба шинжилгээ

Рекомбинант ДНХ-ийн технологийг ашиглан эсрэгбиеийн хэлтэрхийг үүсгэж болно. Fab эсрэгбиеийг эхэндээ зөвхөн ходоодны протеазагаар гидролизд оруулж (Fab ') 2 хэлтэрхийг үүсгэж, дараа нь папаинаар задлагдаж, тусдаа Fab хэлтэрхийг үүсгэдэг. Fv хэлтэрхий нь дисульфидын холбоо байхгүйгээс болж тогтвортой байдал муутай VH ба VL-ээс бүрдэнэ. Тиймээс VH ба VL нь ойролцоогоор 25KDa молекул жинтэй нэг гинжин хувьсах хэлтэрхий (scFv) эсрэгбие үүсгэдэг 15-20 амин хүчлийн богино пептидээр холбогддог.

Camelidae (Camel, LIama, Alpaca)-ийн эсрэгбиеийн бүтцийг судалснаар эсрэгбие нь зөвхөн хүнд гинжтэй, хөнгөн гинжгүй болохыг тогтоожээ. Тиймээс тэдгээрийг хүнд гинжний эсрэгбие (hcAb) гэж нэрлэдэг. Хүнд гинжний эсрэгбиеийн хувьсах домэйнийг дан домэйн эсрэгбие буюу нанобие буюу 12-15 кДа хэмжээтэй VHH гэж нэрлэдэг. Мономеруудын хувьд тэдгээр нь дисульфидын холбоогүй бөгөөд маш тогтвортой бөгөөд эсрэгтөрөгчтэй маш өндөр хамааралтай байдаг.

Зураг 5: Хүнд гинжин эсрэгбие ба VHH/Нанободи

Эсийн чөлөөт экспресс нь in vitro уургийн нийлэгжилтийг хийхийн тулд байгалийн болон синтетик ДНХ-ийн экспрессийг ашигладаг бөгөөд ихэвчлэн E. coli экспрессийн системийг ашигладаг. Энэ нь уургийг хурдан үйлдвэрлэдэг бөгөөд in vivo их хэмжээний рекомбинант уураг үйлдвэрлэх үед эсэд үзүүлэх бодисын солилцооны болон цитотоксик ачааллаас зайлсхийдэг. Энэ нь мөн трансляци эсвэл мембраны уургийг нийлэгжүүлсний дараа өөрчлөхөд хэцүү гэх мэт нийлэгжүүлэхэд хэцүү уургуудыг үүсгэж чаддаг.