Antibody Engineering гэж юу вэ?

Эсрэгбиеийн инженерчлэлийн тусламжтайгаар эсрэгбиеийн молекулын хэмжээ, фармакокинетик, дархлаа үүсгэгч чанар, холбох наалдац, өвөрмөц байдал, эффектор функцийг өөрчлөх боломжтой болсон. Эсрэгбиемүүдийг нийлэгжүүлсний дараа эсрэгбиемүүдийн өвөрмөц холболт нь тэдгээрийг эмнэлзүйн оношлогоо, эмчилгээнд өндөр үнэ цэнэтэй болгодог. Эсрэгбиеийн инженерчлэлээр дамжуулан тэд эмийн болон оношлогооны эрт хөгжлийн хэрэгцээг хангаж чадна.

Эсрэгбиеийн инженерчлэлийн зорилго нь байгалийн эсрэгбиемүүд хүрч чаддаггүй өндөр өвөрмөц, тогтвортой үйл ажиллагааг зохион бүтээх, үйлдвэрлэх, эмчилгээний эсрэгбие үүсгэх үндэс суурийг тавих явдал юм.

Альфа Лайфтек нь эсрэгбиеийн инженерчлэлийн чиглэлээр төслийн өргөн туршлагаараа олон төрөл зүйлд тохирсон моноклон ба поликлональ эсрэгбиеийн үйлчилгээ үзүүлэхээс гадна фагийн эсрэгбиеийн номын сан байгуулах, илрүүлэх үйлчилгээ үзүүлэх боломжтой. Alpha Lifetech нь хэрэглэгчдэд чанартай биосимиляр эсрэгбие болон рекомбинант уургийн бүтээгдэхүүнээр хангаж, үр дүнтэй, өндөр өвөрмөц, тогтвортой эсрэгбие үйлдвэрлэх боломжтой. Бид эсрэгбие, уургийн платформ, фагийн дэлгэцийн системийг цогцоор нь ашигласнаар эсрэгбие үйлдвэрлэх, эсрэгбие цэвэршүүлэх, эсрэгбиеийн дараалал тогтоох, эсрэгбие баталгаажуулах зэрэг техникийн үйлчилгээ зэрэг эсрэгбиеийн үйлдвэрлэлийн дээд ба доод урсгалыг хамарсан үйлчилгээ үзүүлдэг.

Эсрэгбиеийн инженерчлэлийн анхдагч үе шат нь хоёр технологитой холбоотой:

--Рекомбинант ДНХ технологи

--Гибридома технологи

Эсрэгбиеийн инженерчлэлийн хурдацтай хөгжил нь гурван чухал технологитой холбоотой:

--Ген клончлох технологи ба полимеразын гинжин урвал

--Уургийн илэрхийлэл: Рекомбинант уураг нь мөөгөнцөр, саваа хэлбэрийн вирус, ургамал зэрэг экспрессийн системээр үүсгэгддэг.

--Компьютерийн тусламжтайгаар бүтцийн дизайн хийх

Эхний үеийн эсрэгбиемүүдийг химерик эсрэгбие үүсгэхийн тулд хүн болгосон бөгөөд хулганын моноклональ эсрэгбиеийн хувьсах бүс нь хүний ​​IgG молекулуудын тогтмол бүстэй холбоотой байв. Хоёр дахь үеийн хулганы моноклон эсрэгбиеийн эсрэгтөрөгчийг холбох бүсийг (CDR) хүний ​​IgG-д шилжүүлэн суулгасан. CDR бүсээс бусад бүх эсрэгбие нь бараг хүний ​​эсрэгбие бөгөөд хулганын клон эсрэгбиемийг хүний ​​эмчилгээнд хэрэглэх үед хүний ​​эсрэгбиемийн (HAMA) хариу урвалыг өдөөхгүйн тулд хүчин чармайлт гаргасан.

 

Фагийн дэлгэцийн номын сан байгуулахын тулд эхний алхам бол дархлаажуулсан амьтдын В эсээс ялгаж авах (дархлааны номын сангийн бүтэц), дархлаагүй амьтдаас шууд гаргаж авах (байгалийн номын сангийн бүтэц) эсвэл эсрэгбиеийн генийн хэлтэрхийнүүдтэй (нийлэг номын сангийн бүтэц) in vitro угсарч болох эсрэгбиемүүдийг кодлодог генүүдийг авах явдал юм. Дараа нь генийг ПГУ-аар олшруулж, плазмид руу оруулж, тохирох хост системд (мөөгөнцрийн илэрхийлэл (ихэвчлэн Pichia pastoris), прокариотуудын илэрхийлэл (ихэвчлэн E. coli), хөхтөн амьтдын эсийн илэрхийлэл, ургамлын эсийн илэрхийлэл, саваа хэлбэрийн вирусээр халдварласан шавьжны эсийн илэрхийлэл) -д илэрхийлэгддэг. Хамгийн түгээмэл нь E. coli экспрессиональ систем бөгөөд энэ нь тодорхой кодлогч эсрэгбиеийн дарааллыг фаг дээр нэгтгэж, фагийн бүрхүүлийн уургийн аль нэгийг (pIII эсвэл pVIII) кодлодог. -ийн генийн нэгдэл, мөн бактериофагийн гадаргуу дээр харагдана. Энэхүү технологийн цөм нь фагийн дэлгэцийн номын сан байгуулахад оршдог бөгөөд энэ нь байгалийн номын сангаас илүү давуу талтай бөгөөд тусгай холболттой байдаг. Дараа нь эсрэгтөрөгчийн өвөрмөц шинж чанартай эсрэгбиемүүдийг биологийн сонгон шалгаруулах процессоор шалгаж, зорилтот эсрэгтөрөгчийг тогтоон, холбоогүй фагуудыг дахин дахин угааж, холбосон фагийг цаашид баяжуулахын тулд угаана. Гурав ба түүнээс дээш удаагийн давталтын дараа өндөр өвөрмөц, өндөр ойр дотно эсрэгбиемүүдийг тусгаарладаг.

Зураг 3: Эсрэгбиеийн номын сангийн барилга, скрининг

Рекомбинант ДНХ-ийн технологийг эсрэгбиеийн хэсгүүдийг үүсгэхэд ашиглаж болно. Fab эсрэгбие нь эхлээд зөвхөн ходоодны протеазаар гидролиз болж (Fab ') 2 фрагмент үүсгэдэг ба дараа нь папаинаар шингэж, бие даасан Fab фрагментүүдийг үүсгэдэг. Fv фрагмент нь дисульфидын холбоо байхгүй тул тогтвортой байдал муутай VH ба VL-ээс бүрддэг. Тиймээс VH ба VL нь 15-20 амин хүчлийн богино пептидээр холбогдож ойролцоогоор 25КДа молекул жинтэй нэг гинжин хувьсах фрагмент (scFv) эсрэгбие үүсгэдэг.

Camelidae (Camel, LIama, Alpaca)-ийн эсрэгбиеийн бүтцийг судлах нь эсрэгбие нь зөвхөн хүнд гинжтэй, хөнгөн гинжгүй байдаг тул тэдгээрийг хүнд гинжин эсрэгбие (hcAb) гэж нэрлэдэг. Хүнд гинжин хэлхээний эсрэгбиеийн хувьсах домэйн нь 12-15 кДа хэмжээтэй нэг домайн эсрэгбие буюу нанободи буюу VHH гэж нэрлэгддэг. Мономеруудын хувьд тэдгээр нь дисульфидын холбоогүй бөгөөд маш тогтвортой, эсрэгтөрөгчтэй маш өндөр хамааралтай байдаг.

Зураг 5: Хүнд гинжин хэлхээний эсрэгбие ба VHH/ Nanobody

Эсийн чөлөөт экспресс нь ихэвчлэн E. coli экспрессийн системийг ашиглан in vitro уургийн нийлэгжилтэнд хүрэхийн тулд байгалийн буюу синтетик ДНХ-ийн илэрхийлэлийг ашигладаг. Энэ нь уураг хурдан гаргаж, in vivo их хэмжээний рекомбинант уураг үүсгэх үед эсийн бодисын солилцооны болон цитотоксик ачааллаас зайлсхийдэг. Энэ нь мөн хувиргасны дараа өөрчлөх эсвэл мембраны уураг нийлэгжүүлэхэд хэцүү уураг үүсгэдэг.