Аптамер судалгааны үйлчилгээ

Үйлчлүүлэгчдийн өөр өөр шинжилгээний хэрэгцээ шаардлагад нийцүүлэн Alpha Lifetech нь үйлчлүүлэгчдэд сонгох олон төрлийн aptamer шинжилгээний стратегитай байдаг.

БИДЭНД ХОЛБОО БАРИХ

Аптамер судалгааны үйлчилгээ

Aptamer-ийн танилцуулга

Аптамерууд нь нэг судалтай нуклейн хүчил (ДНХ эсвэл РНХ гэх мэт) молекулууд бөгөөд үүнийг SELEX скрининг гэдэг процессоор санамсаргүй байдлаар хуваарилсан дараалал бүхий синтетик олигонуклеотидын сангаас in vitro байдлаар шалгадаг бөгөөд үүнд хэд хэдэн давталттай сонголт орно. Alpha Lifetech-ийн эзэмшдэг aptamer хөгжүүлэлтийн үйлчилгээний үндсэн бүрэлдэхүүн хэсгүүдэд aptamer номын сангийн барилга байгууламж, aptamer SELEX скрининг, aptamer SELEX дараалал, аптамерын дарааллын шинжилгээ болон бусад аптамерын шинжилгээ орно.

SELEX дараалал нь aptamer SELEX скрининг болон өндөр бүтээмжийн дарааллыг хослуулсан. Аптамерын SELEX дарааллаар дамжуулан зорилтот цэгт холбогдсон аптамерын тодорхой дарааллыг үр дүнтэй тодорхойлж, дараачийн аптамерын дарааллын шинжилгээ, хэрэглээний үндсэн мэдээллээр хангадаг.

Аптамерыг шинжлэх ухааны судалгаа, өвчнийг эмчлэх, биосенсор байгуулах, анагаах ухааны нээлт, хүрээлэн буй орчны хяналт зэрэгт өргөн ашиглаж ирсэн. Гэсэн хэдий ч in vitro шинжилгээнд хамрагдсан олигонуклеотид аптамерууд нь in vivo амархан задарч, тэр ч байтугай хоруу чанартай байдаг. Тиймээс скрининг хийсэн аптамеруудыг оновчтой болгосны дараа aptamer-ийн хөгжүүлэлтийн амжилтыг үнэлэхийн тулд in vitro шинжилгээ хийх шаардлагатай. Үйлчлүүлэгчдийн өөр өөр шинжилгээний хэрэгцээ шаардлагад нийцүүлэн Alpha Lifetech нь үйлчлүүлэгчдэд сонгох олон төрлийн aptamer шинжилгээний стратегитай байдаг.

Зураг.1 Аптамерын шинжилгээний диаграмм. Лавлах эх сурвалж:Thevendran R, Citartan M. 2022. Аптамеруудын холболтын хамаарлыг тооцоолох шинжилгээ.

Aptamer Research Service-ийн танилцуулга

Аптамерын тогтвортой байдлын шинжилгээ

Нуклеазын задралын туршилт

Аптамерыг янз бүрийн төрлийн нуклеазуудаар (DNase, RNase гэх мэт) тодорхой нөхцөлд өсгөвөрлүүлснээр аптамерын задрал ажиглагдаж, улмаар түүний задралын эсрэг чадварыг үнэлдэг. Энэ нь практик хэрэглээнд aptamer-ийн тогтвортой байдал, бат бөх чанарыг тодорхойлоход ашигтай байдаг.

Флюресцент шошголох арга

Аптамерын тогтвортой байдлыг шууд бусаар аптамер дээрх флюрофоруудыг тэмдэглэж, зорилтот объекттой холбохоос өмнө болон дараа нь флюресценцийн дохионы өөрчлөлтийг ажиглах замаар үнэлдэг. Жишээлбэл, аптамер нь зорилтот объекттой холбогдох үед түүний конформаци өөрчлөгдөж, флюресценцийн дохиог сайжруулж эсвэл бууруулж болно.

Дулааны тогтвортой байдлын шинжилгээ

Аптамерын дулааны тогтвортой байдлыг янз бүрийн температурт хайлах температурын өөрчлөлтийг (Tm утга) хэмжих замаар үнэлдэг. Аптамер хайлах температур өндөр байх тусам түүний дулааны тогтвортой байдал сайжирна.

Динамик тогтвортой байдлын шинжилгээ

Гадаргуугийн плазмоны резонансын (SPR) болон бусад технологийг ашиглан аптамер ба зорилтот объектын хооронд холбох, салгах үйл явцыг бодит цаг хугацаанд хянах, динамик параметрүүдийг (жишээлбэл, холбох хурдны тогтмол, диссоциацийн хурдны тогтмол гэх мэт) олж авах, аптамер ба бай хоорондын харилцан үйлчлэлийн механизмыг цаашид ойлгох, динамик тогтвортой байдлыг үнэлэхэд ашигласан.

Бүтцийн тогтвортой байдлын шинжилгээ

Аптамерын гурван хэмжээст бүтэц, түүний бүтцийн тогтвортой байдлыг шинжлэхийн тулд рентген кристаллографи, цөмийн соронзон резонанс (NMR) болон бүтцийн биологийн бусад аргуудыг ашигласан.

Аптамерын тусгай шинжилгээ

Аптамерыг холбох шинжилгээ

Аптамер ба зорилтот молекулын хоорондох холболтын тогтмолыг хэмжихийн тулд аптамерыг холбох шинжилгээ хийх замаар ойр дотно байдлыг үнэлдэг, тухайлбал диссоциацийн тогтмол Kd. Бага Kd утга нь илүү их ойр дотно байгааг илтгэнэ. Аптамерыг холбох шинжилгээ нь өндөр холбох чадвартай эм нэр дэвшигчдийг шалгаж, дараа нь фармакодинамик болон фармакокинетикийн судалгааг хийх боломжтой.

Урвуу скрининг туршилт

Урвуу скрининг шинжилгээ нь олон тооны нэр дэвшигч молекулуудаас зорилтот бус молекулуудыг хурдан хасах скрининг арга юм. Урвуу скрининг нь энэ шинж чанар, функцийг эзэмшдэггүй молекулуудыг оруулахгүй байх зорилготой юм. Урвуу скрининг хийх гол зүйл бол скрининг хийх явцад зорилтот бус молекулуудыг ялгаж салгах боломжтой урвуу скринингийн зохих тэмдэглэгээ эсвэл нөхцөлийг сонгох явдал юм. Энэ туршилтанд зорилтот бус молекулуудыг сонгох нь маш чухал юм. Сонгосон зорилтот бус молекулууд нь аптамерын скрининг хийхэд саад учруулж болзошгүй бодисыг төлөөлж, саад учруулж болзошгүй хүчин зүйлсийг аль болох бүрэн хамруулсан байх ёстой.

Өрсөлдөөнт дарангуйлах туршилт

Аптамер ба зорилтот молекулын холбох системд хэт их өрсөлдөгчид (зорилтот молекултай ижил төстэй бүтэцтэй молекулууд гэх мэт) нэмснээр аптамер ба зорилтот молекулын холбох чадвар өөрчлөгддөг. Хэрэв аптамерын зорилтот молекулыг холбох чадвар мэдэгдэхүйц буурсан бол энэ нь аптамер өндөр өвөрмөц шинж чанартай болохыг харуулж байна.

Зарим тохиолдолд өрсөлдөөнийг дарангуйлах туршилтыг урвуу скрининг туршилтын нэг хэсэг эсвэл нэмэлт болгон ашиглаж болно. Жишээлбэл, эмийн скрининг хийх явцад эмийн молекулын зорилтот уурагтай холбогдох чадварыг өрсөлдөөнт дарангуйлах туршилтаар үнэлж, дараа нь урвуу скрининг туршилтыг ашиглан хэвийн эс эсвэл эд эстэй хэт хүчтэй холбогддог эдгээр нэгдлүүдийг арилгах боломжтой.

Аптамерын эсийн хордлогын шинжилгээ

Аптамерын эсийн амьд үлдэх, үржих, үйл ажиллагаанд үзүүлэх нөлөөг үнэлэхэд зориулагдсан аптамерын цитотоксик байдлын шинжилгээний олон төрлийн туршилтын аргууд байдаг.

Арга зүй	Нарийвчилсан танилцуулга	Давуу тал	Сул тал
MTT илрүүлэх арга	MTT шинжилгээ нь амьд эсийн митохондри дахь ферментийн идэвхжилд суурилсан арга юм. Амьд эсийн митохондри дахь сукцинатдегидрогеназа нь экзоген МТТ-ийг усанд уусдаггүй хөх ягаан талст Формазан болгон бууруулж эсэд хадгалдаг бол үхсэн эсүүд ийм үүрэг гүйцэтгэдэггүй. Эдгээр талстуудыг диметил сульфоксид (DMSO) -аар уусгаж, энзимометр дээр тодорхой долгионы урттай (490 нм эсвэл 570 нм гэх мэт) шингээлтийг илрүүлэх нь амьд эсийн тоог шууд бусаар тусгаж, улмаар аптамерын эсийн хоруу чанарыг үнэлэх боломжтой.	Өндөр мэдрэмжтэй, хэмнэлттэй, тав тухтай байдал	Ажлын ачаалал ихтэй, органик уусгагч нь эсийг гэмтээж болно; Зөвхөн эцсийн туршилтын үр дүнг авах боломжтой бөгөөд цитотоксик үйл явцыг бүрэн харах боломжгүй юм
CCK-8 илрүүлэх арга	Cell Counting Kit-8 (CCK-8) нь өндөр мэдрэмжтэй, цацраг идэвхт бус колориметр илрүүлэх арга юм. CCK-8 нь WST-8 агуулдаг бөгөөд амьд эсийн митохондри дахь дегидрогеназын нөлөөгөөр бууруулж усанд уусдаг жүржийн метилзан түлш үүсгэдэг. Үйлдвэрлэсэн мезан будгийн хэмжээ нь амьд эсийн тоотой шугаман хамааралтай байдаг ба аптамерын эсийн хоруу чанарыг үнэлэхийн тулд 450 нм долгионы уртад Мезан будгийн гэрлийн шингээлтийн утгыг хэмжих замаар амьд эсийн тоог шууд бусаар тусгаж болно.	Энгийн ажиллагаа, эсийг угаах шаардлагагүй, хурдан илрүүлэх, шугаман илрүүлэх өргөн хүрээ, өндөр мэдрэмж, давтагдах чадвар, эсийн хоруу чанар бага	Урвалжийн өндөр үнэ; Шингээх чадвар буурсан нь амьд эсийн тоо буурсан эсвэл эсийн дегидрогеназын идэвхжил буурсантай холбоотой эсэхийг хэлэхэд заримдаа хэцүү байдаг.
LDH илрүүлэх арга	LDH (лактат дегидрогеназа) нь эсийн цитоплазмд тогтвортой байдаг фермент бөгөөд эсийн мембран гэмтсэн тохиолдолд LDH нь эсийн гадна талд ялгардаг. LDH нь сүүн хүчлийг хурдасгаж пируват үүсгэж, INT (тетразолиумын давс) -тай урвалд орж нил ягаан өнгийн талст бодис үүсгэдэг. Тодорхой долгионы уртад (490нм гэх мэт) түүний шингээлтийг хэмжих замаар эсийн гэмтлийн зэргийг тусгаж, улмаар аптамерын цитотоксик чанарыг үнэлж болно.	Энэ нь эсийн үхлийн түвшинг шууд харуулдаг, эсийг гэмтээхгүй, цацраг идэвхт изотопын бохирдол байхгүй.	Инкубатороос эсийг байнга гаргаж авах хэрэгцээ, үйл ажиллагаа нь илүү төвөгтэй байдаг; Зөвхөн эцсийн туршилтын үр дүнг авах боломжтой бөгөөд цитотоксик үйл явцыг бүрэн харах боломжгүй юм
Бодит цагийн амьд эсийн дүрсний шинжилгээ	Бодит цагийн амьд эсийн дүрсний анализаторыг ашиглан эсийн өсөлтийн мөчлөгийн бүх үйл явцыг бодит цаг хугацаанд ажиглаж, бүртгэхийн тулд багажийг инкубаторт байрлуулсан. Аптамеруудын цитотоксик чанарыг эсийн морфологийн өөрчлөлт, өсөлтийн муруйг шинжлэх замаар үнэлж болно. Энэ арга нь эсийн өсөлтийн орчныг тогтвортой байлгахын зэрэгцээ цитотоксик үйл явцын видео болон тоон үр дүнг өгөх боломжтой.	Энэ нь цитотоксик үйл явцыг бодит цаг хугацаанд нь хянах, үл эвдэх дүрслэл, хөндлөнгийн оролцоо, эсэд гэмтэл учруулахыг багасгах; Видео болон тоон үр дүнгийн аль аль нь гүнзгий дүн шинжилгээ хийх боломжтой.	Тоног төхөөрөмжийн өртөг өндөр бөгөөд мэргэжлийн үйл ажиллагааны ур чадвар, өгөгдөлд дүн шинжилгээ хийх чадварыг шаарддаг

КАЧИ