Фагийн дэлгэцийн номын сангийн барилгын үйлчилгээ

Alpha Lifetech нь эсрэгбиеийн санг байгуулах, үйлдвэрлэх ажлыг хангахын тулд цогц M13/T7 фагийн дэлгэцийн платформтой. Мөн бид таны хэрэгцээг хангахын тулд эсрэгбие scFv үйлдвэрлэл гэх мэт захиалгат үйлчилгээ үзүүлэх боломжтой.

ХОЛБОО БАРИХ

Фагийн дэлгэцийн номын сангийн барилгын үйлчилгээ

Alpha Lifetech нь олон жилийн турш Фаге дэлгэцийн технологид гүнзгий оролцож ирсэн. Энэ нь шинжлэх ухааны судалгааны цаг хугацаа эсвэл төслийн судалгааны цагийг хэмнэж, дараагийн үйлдвэрлэлийг хөнгөвчлөх төгс тогтвортой Фаге дэлгэцийн технологийн платформыг бүтээсэн. Alpha Lifetech нь мөн хэрэглэгчдэд vhh эсрэгбие үйлдвэрлэх, scFv эсрэгбие үйлдвэрлэх, Fab эсрэгбие үйлдвэрлэх зэрэг үйлчилгээг үзүүлэх боломжтой.

Alpha Lifetech нь эсрэгбиеийн санг байгуулах, үйлдвэрлэх цогц M13/T7 фагийн дэлгэцийн платформтой. Мөн бид таны хэрэгцээг хангахын тулд эсрэгбие scFv үйлдвэрлэл, өндөр хүчин чадалтай эсрэгбиеийн шинжилгээ зэрэг захиалгат үйлчилгээг үзүүлэх боломжтой.

Фагийн дэлгэцийн танилцуулга

Фагийн дэлгэцийн технологи нь тодорхой уураг эсвэл пептидийн функциональ холболтын молекулуудыг хайхын тулд фаг (бактерийг халдварлуулдаг вирус) ашигладаг техник юм. Фагийн эсрэгбиеийн сан байгуулах техникүүдэд Fab эсрэгбиеийн сан байгуулах, эсрэгбиеийн scFv сан байгуулах, нанободи номын сан байгуулах гэх мэт орно. Бактериофагуудын төрлөөс хамааран тэдгээрийг M13, T7, T4, λ болон бусад системд хувааж болно. Номын сангийн төрлөөс хамааран санамсаргүй пептидийн сан, cDNA сан, эсрэгбиеийн сан, уургийн сан гэж хувааж болно. Фагийн дэлгэцийн технологи нь ажиллахад хялбар бөгөөд ашиглахад хямд. Гэсэн хэдий ч энэ техник нь номын сан дахь молекулын генетикийн олон янз байдлыг хязгаарладаг бөгөөд хэт урт дарааллыг илэрхийлж чадахгүй.

Одоогийн байдлаар фагийн дэлгэцийн технологийг өргөн ашиглаж байна. Эдгээрийн дотор шинэ вакцины судалгаа, хөгжүүлэлт (хямд өртөгтэй, үр ашигтай синтетик вакцин), эсрэгбиеийн эмийг боловсруулах (ферментийн дарангуйлагчийг илрүүлэх), эсийн дохионы дамжуулалт (симуляцилагдсан эпитопуудыг илрүүлэх), эсрэгтөрөгчийн эпитопуудын судалгаа (моноклональ эсрэгбие бэлтгэх) зэрэг чиглэлээр мэдэгдэхүйц ололт амжилтууд бий.

T7 бактериофагийн танилцуулга

T7 бактериофаг нь давхар судалтай ДНХ бөгөөд ДНХ-ийн урт нь 40 кб бөгөөд 60 нм диаметртэй капсид дотор ороосон байдаг. Толгой ба сүүлний хоорондох холбогч нь gp8-ийн олон хуулбараас бүрдэх цагираг бүтэц юм. t7 бактериофагийн толгой ба цөм нь gp8-тэй холбогддог цилиндр хэлбэртэй бүтэц үүсгэдэг бөгөөд толгой ба сүүлийг холбож чаддаг.

Зураг 1. T7 бактериофагийн бүдүүвч зураг.(Лавлагаа: T7 фагийн дэлгэцийн системийн дэвшил (Тойм))

M13 бактериофагийн танилцуулга

Бактериофаг M13 нь Ff фагууд гэж нэрлэгддэг судалтай фагуудын бүлэгт багтдаг. Энэ нь 900 нм урттай, 6.5 нм өргөнтэй. Энэ нь 11 өөр уургийг кодчилдог есөн генээс бүрдсэн 6407 bp урттай дан судалтай ДНХ (ssDNA) геномыг агуулдаг. Тэдгээрийн дотор таван уураг нь бүрхүүлийн уургууд бөгөөд зургаан уураг нь фагийн репликаци, угсралтад оролцдог. Бүрхүүлтэй уургийн хамгийн өндөр концентраци нь ойролцоогоор 2700 уургийн нэгжээс бүрдэх бөгөөд хромосомын эргэн тойронд бүрхүүл үүсгэдэг капсид уураг G8P юм.

Зураг 2. M13 бактериофагийн бүдүүвч зураг.(Лавлагаа: Эсрэгбиеийн Фаг Дэлгэцийн Технологийн Үндэс)

Фагийн дэлгэцийн эсрэгбиеийн номын сангийн танилцуулга

Орчин үеийн анагаах ухаанд эсрэгбие илрүүлэх нь улам бүр чухал болж байна. Эсрэгбие илрүүлэх өөр өөр аргууд байдаг ч фаг дэлгэцийн эсрэгбиеийн санг анагаах ухааны шинжлэх ухаанд илүү их ашигладаг.

1990 оноос хойш фагийн санг бүрдүүлэхэд VH, VHH, scFvs, диабоди, Fab эсрэгбие зэрэг янз бүрийн эсрэгбиеийн форматыг ашиглаж ирсэн. VH болон VL бүтцийн домэйноос бүрдсэн scFv нь эсрэгбиеийн scFv санг бүрдүүлэхэд ашигладаг дан гинжин эсрэгбие юм. scFv нь богино хагас задралын хугацаатай, дархлааны чадвар багатай гэдгээрээ онцлог юм. Fab эсрэгбиеийн сан нь VH, VL, CL, болон CH1-ээс бүрддэг бөгөөд энэ нь өндөр хамааралтай төгс эсрэгбиеийг хурдан илрүүлж чаддаг. Бай антиген-VHH-тэй холбогдож чадах хамгийн жижиг нэгж нь одоогоор нано биетийн санг бүрдүүлдэг бөгөөд VHH нь энгийн бүтэц, бага эзэлхүүн, өндөр уусах чадвар, сайн тогтвортой байдал, бэлтгэх, илэрхийлэх хялбар давуу талуудтай. Синтетик нано биет (Nb) сангууд нь тогтвортой, өндөр хамааралтай синтетик нано биетийн хувьд амьтны дархлаажуулалтын сэтгэл татам хувилбар болж гарч ирж байна. Ерөнхийдөө эдгээр эсрэгбиеийн хэлтэрхий нь M13 фагийн G3P-тэй нийлдэг бөгөөд эсрэгбиеийн хэлтэрхийг кодчилдог олон тооны генийг клончилсноор олон төрлийн эсрэгбие сонгож болох том фагийн дэлгэцийн эсрэгбиеийн сангуудыг үүсгэж болно.

Фаж номын сангийн барилгын үйл явц

Фагийн номын сан байгуулах үйл явц нь дараах байдалтай байна: бүтээгдэхүүнийг гаргаж авдаг ПГУ-ын олшруулалтад зориулсан тусгай праймеруудыг боловсруулсан бөгөөд эдгээрийг T7/M13 фагийн вектороор ферментээр холбож, рекомбинант фагийн плазмидыг амжилттай бүтээв. Рекомбинант фагийн плазмидыг TG1 рецепторын эсүүд болгон хувиргаж, дараа нь зохих антибиотик агуулсан орчинд бүрж, трансформаторуудыг шүүсний дараа өргөтгөсөн өсгөвөр хийсэн. Олон удаагийн өсгөвөрлөлтийн дараа фаг нь бактерийн репликацийн хугацааг давтаж, зорилтот уураг буюу полипептидийг амжилттай илэрхийлдэг. Дараа нь фагийн номын санг цэвэршүүлж, зарим хольц болон холбоогүй фагуудыг зайлуулдаг.

Хувьсах бүсүүд (VH ба VL) нь эсрэгбиеийн олон янз байдалтай хамааралтай байсан бөгөөд VH ба VL-ийг PIII фагийн уургийг кодчилдог дарааллын хамт фагийн векторт оруулсан. Угсарсны дараа фагийн бөөмийг ил гаргаж, бага бүрхүүлийн уургийн III-ийн N-төгсгөлтэй нэгтгэж, функциональ эсрэгбиеийн фрагмент үүсгэж, эсрэгбиеийн ДНХ-ийн дарааллыг агуулсан номын санг олж авдаг.

Дархлаажуулалт дууссаны дараа титрийг илрүүлж, титрийг тодорхойлсны дараа амьтны цусыг авсан. Лимфоцитыг цуснаас ялгаж, РНХ-г гаргаж аваад, RT-PCR нь бай фрагментийг олшруулж, V бүсийн генийн фрагментийг гаргаж авсан. V генийг тодорхой праймер ашиглан олшруулсан.

Байгалийн сангууд нь ямар ч байг онилж чадах амьтдад дархлаа үүсгэдэг сул эсрэгбие агуулдаг. Антигентэй тусгайлан холбогддог фагийн эсрэгбиеийг антигенийг засах эсвэл шошголох скрининг техник ашиглан цуглуулж болно.

Бай антигенийг микропластын нүх гэх мэт хатуу тээвэрлэгч дээр бэхлэх эсвэл соронзон бөмбөлөгтэй холбоно. Дараа нь фагийн эсрэгбиеийн санг антигентэй холбохын тулд нэмнэ. Олон удаагийн элюцийн дараа бага хамааралтай буюу өвөрмөц бус фагуудыг угааж, өвөрмөц эсрэгбие үзүүлдэг фагуудыг хадгална.

Фагийн дэлгэцийн хэрэглээ

*Эсрэгбие илрүүлэх нь орчин үеийн анагаах ухаанд улам бүр чухал болж байна. Эсрэгбие илрүүлэх өөр өөр аргууд байдаг ч фагийн дэлгэцийн технологийг анагаах ухааны шинжлэх ухаанд илүү их ашигладаг. 1990 оноос хойш VH, VHH, scFvs, диабоди, Fab эсрэгбие зэрэг фагийн санг бүрдүүлэхэд эсрэгбиеийн өөр өөр форматыг ашиглаж ирсэн.
*Фаг пептидийн сангууд нь уургийн эпитопын дарааллыг хурдан тодорхойлох боломжийг олгодог бөгөөд эпитоп ба антиген рецепторуудын харилцан үйлчлэлийг судлах хүчирхэг хэрэгсэл болсон.
*Эсрэгбиеийн хэлтэрхий нь M13 фагийн G3P-тэй нийлж, эсрэгбиеийн хэлтэрхийг кодчилдог олон тооны генийг клончилсноор олон төрлийн эсрэгбие сонгож болох том фагийн дэлгэцийн эсрэгбиеийн сангуудыг үүсгэж болно.
*T7 фагийн дэлгэцийн систем нь энгийн байдал, өндөр аюулгүй байдал, тогтвортой байдал, хадгалахад хялбар, тээвэрлэх зэрэг олон давуу талтай тул уг системийг урьдчилан сэргийлэх болон эмчилгээний вакцинд ашигладаг.
*T7 фагийн дэлгэцийн систем нь эмгэг төрүүлэгч бичил биетний гадаргуугийн антиген болон хорт хавдрын антиген зэрэг янз бүрийн антигенийг илрүүлж чаддаг.

Фаг