Фаж дэлгэцийн номын сан барих үйлчилгээ

Alpha Lifetech нь M13/T7 фагийн дэлгэцийн иж бүрэн платформтой бөгөөд эсрэгбиеийн сангуудыг барьж, үйлдвэрлэх боломжийг олгодог. Бид таны хэрэгцээг хангахын тулд эсрэгбие scFv үйлдвэрлэх зэрэг захиалгат үйлчилгээг үзүүлэх боломжтой.

БИДЭНД ХОЛБОО БАРИХ

Фаж дэлгэцийн номын сан барих үйлчилгээ

Alpha Lifetech нь Phage дэлгэцийн технологийг олон жилийн турш гүнзгийрүүлэн хөгжүүлж ирсэн. Энэ нь шинжлэх ухааны судалгааны цаг эсвэл төслийн судалгаа хийх цагийг хэмнэж, дараагийн үйлдвэрлэлийг хөнгөвчлөх төгс тогтвортой Phage дэлгэцийн технологийн платформыг бий болгосон. Alpha Lifetech нь vhh эсрэгбие үйлдвэрлэх, scFv эсрэгбие үйлдвэрлэх, Fab Antibody үйлдвэрлэх зэрэг үйлчилгээг хэрэглэгчдэд үзүүлэх боломжтой.

Alpha Lifetech нь M13/T7 фагийн дэлгэцийн иж бүрэн платформтой бөгөөд эсрэгбиеийн сангуудыг барьж, үйлдвэрлэх боломжийг олгодог. Мөн бид таны хэрэгцээнд нийцүүлэн эсрэгбие scFv үйлдвэрлэх, өндөр үр дүнтэй эсрэгбие скрининг хийх зэрэг захиалгат үйлчилгээг үзүүлэх боломжтой.

Phage дэлгэцийн танилцуулга

Фагийн дэлгэцийн технологи нь тодорхой уураг эсвэл пептидийн функциональ холбох молекулуудыг хайхад фагуудыг (бактерийг халдварладаг вирус) ашигладаг техник юм. Фагийн эсрэгбиеийн номын сан байгуулах арга техникт Fab эсрэгбиеийн номын сан байгуулах, эсрэгбие scFv номын сан байгуулах, нанободийн номын сан байгуулах гэх мэт орно. Бактериофагийн төрлөөс хамааран тэдгээрийг M13, T7, T4, λ болон бусад системд хувааж болно. Номын сангийн төрлөөр нь санамсаргүй пептидийн номын сан, cDNA номын сан, эсрэгбие номын сан, уургийн номын сан гэж хувааж болно. Фаг дэлгэцийн технологи нь ажиллахад хялбар бөгөөд ашиглахад хямд юм. Гэсэн хэдий ч, энэ техник нь хэт урт дарааллыг илэрхийлэх боломжгүй номын сангийн молекул генетикийн олон янз байдлыг хязгаарладаг.

Одоогийн байдлаар фагийн дэлгэцийн технологийг өргөн ашиглаж байна. Эдгээрийн дотор шинэ вакцин (хямд өртөгтэй, үр дүнтэй синтетик вакцинууд), эсрэгбиеийн эм (скрининг ферментийн дарангуйлагч), эсийн дохио дамжуулах (загварчилсан эпитопын скрининг), эсрэгтөрөгчийн эпитопын судалгаа (моноклональ эсрэгбие бэлтгэх) судалгаа, хөгжилд томоохон амжилтууд бий.

T7 бактериофагийн танилцуулга

T7 бактериофаг нь хоёр судалтай ДНХ бөгөөд ДНХ-ийн урт нь 40кб бөгөөд 60нм диаметртэй капсидад ороосон байдаг. Толгой ба сүүлний хоорондох холбогч нь gp8-ийн олон хуулбараас бүрдсэн цагираг бүтэц юм. T7 бактериофагийн толгой ба цөм нь gp8-тэй холбогддог цилиндр хэлбэртэй бүтэцтэй бөгөөд толгой ба сүүлийг холбож чаддаг.

Зураг 1 T7 бактериофагийн бүдүүвч дүрслэл.(Ишлэл: T7 фагийн дэлгэцийн системийн дэвшил (Шүүмж))

M13 бактериофагийн танилцуулга

M13 бактериофаг нь Ff фаг гэж нэрлэгддэг утаслаг фагийн бүлэгт багтдаг. Энэ нь 900 нм урт, 6.5 нм өргөнтэй. Энэ нь 11 өөр уургийг кодлодог есөн генээс бүрдэх 6407 bp урттай нэг хэлхээтэй ДНХ (ssDNA) геномыг агуулдаг. Тэдгээрийн дотор таван уураг нь бүрхүүлийн уураг бөгөөд зургаан уураг нь фагийн хуулбарлах, угсрахад оролцдог. Бүрхүүлийн уургийн хамгийн өндөр концентраци нь 2700 орчим уургийн нэгжээс бүрдэх капсидын уураг G8P бөгөөд хромосомын эргэн тойронд бүрхүүл үүсгэдэг.

Зураг 2 M13 бактериофагийн бүдүүвч дүрслэл.(Ишлэл: Эсрэгбиеийн фагийн дэлгэцийн технологийн үндэс)

Phage Display Antibody Library-ийн танилцуулга

Орчин үеийн анагаах ухаанд эсрэгбие илрүүлэх нь улам бүр чухал болж байна. Эсрэгбие илрүүлэх янз бүрийн аргууд байдаг боловч фагийн дэлгэцийн эсрэгбиеийн санг анагаах ухаанд илүү ашигладаг.

1990 оноос хойш VHs, VHHs, scFvs, diabodies, Fab эсрэгбие зэрэг фагийн сангуудыг бий болгохын тулд өөр өөр эсрэгбиеийн форматуудыг ашигласан. VH ба VL бүтцийн домайнуудаас бүрдэх scFv нь эсрэгбиеийн scFv санг үүсгэхэд ашигладаг нэг гинжин эсрэгбие юм. scFv нь хагас задралын хугацаа богино, дархлаа багатай байдаг. Fab Antibody Library нь VH, VL, CL, болон CH1-ээс бүрддэг бөгөөд тэдгээр нь өндөр наалдамхай эсрэгбиемүүдийг хурдан ялгаж чаддаг. Зорилтот эсрэгтөрөгч-VHH-ийг холбож чадах хамгийн жижиг нэгж нь одоогоор нано биений номын санг бүрдүүлдэг VHH нь энгийн бүтэцтэй, жижиг эзэлхүүнтэй, уусах чадвар сайтай, тогтвортой байдал сайтай, бэлтгэх, илэрхийлэхэд хялбар зэрэг давуу талуудтай. Нийлэг нано биет (Nb) номын сангууд тогтвортой, өндөр нягтралтай синтетик нано биеийг амьтны дархлаажуулалтаас өөр сонирхолтой хувилбар болгон бий болгож байна. Ерөнхийдөө эдгээр эсрэгбиеийн фрагментүүд нь M13 фагийн G3P-тэй нийлдэг бөгөөд эсрэгбиеийн фрагментийг кодлодог олон тооны генийг клончлох замаар олон төрлийн эсрэгбиемүүдийг сонгож болох том фагийн дэлгэцийн эсрэгбиеийн санг үүсгэж болно.

Фагийн номын сангийн барилгын үйл явц

Фагийн номын сан байгуулах үйл явц нь дараах байдалтай байна: тусгай праймерууд нь T7/M13 фагийн вектортой ферментээр холбосон бүтээгдэхүүнийг олж авах ПГУ-ын олшруулалтад зориулагдсан бөгөөд рекомбинант фагийн плазмид амжилттай бүтээгдсэн. Рекомбинант фагийн плазмидыг TG1 рецептор эс болгон хувиргаж, дараа нь тохирох антибиотик агуулсан орчинд бүрхэж, трансформаторуудыг шалгасны дараа өргөжүүлсэн өсгөвөрлөлтийг хийсэн. Олон удаагийн өсгөвөрлөсний дараа фаг нь бактери дахь репликацын хугацааг давтаж, зорилтот уураг эсвэл полипептидийг амжилттай илэрхийлдэг. Дараа нь зарим хольц, холбоогүй фагуудыг арилгахын тулд фагийн санг цэвэршүүлдэг.

Хувьсах бүсүүд (VH ба VL) нь эсрэгбиеийн олон янз байдалтай хамааралтай ба VH ба VL-ийг фагийн вектор руу PIII фагийн уургийг кодлосон дарааллаар оруулсан. Угсарсны дараа фагийн тоосонцор ил гарч, бага бүрхүүлийн уургийн III N-терминалтай нийлж, функциональ эсрэгбиеийн фрагментийг үүсгэснээр эсрэгбиеийн ДНХ-ийн дарааллыг агуулсан номын санг олж авна.

Дархлаажуулалт дууссаны дараа титрийг илрүүлж, титрийг тэнцүүлсний дараа малын цусыг авсан. Лимфоцитыг цуснаас тусгаарлаж, РНХ-г гаргаж аваад, RT-ПГУ нь зорилтот фрагментийг олшруулж, V бүсийн генийн фрагментийг авдаг. V генийг тусгай праймер ашиглан олшруулдаг.

Бүтээсэн байгалийн сангууд нь ямар ч зорилтот бүлэгт хүрэх чадвартай амьтдын дархлааны эсрэгбиемүүдийг агуулдаг. Антигентэй тусгайлан холбогддог фагийн эсрэгбиемүүдийг эсрэгтөрөгчийг засах эсвэл шошголох скринингийн арга ашиглан цуглуулж болно.

Зорилтот эсрэгтөрөгчийг микропластын нүх гэх мэт хатуу зөөгч дээр бэхэлсэн эсвэл соронзон ирмэгтэй холбодог. Дараа нь фагийн эсрэгбиеийн санг нэмж антигентэй холбоно. Олон тооны шүүрлийн дараа бага хамааралтай эсвэл өвөрмөц бус фагуудыг угааж, тусгай эсрэгбиемүүдийг хадгалдаг.

Фаж дэлгэцийн хэрэглээ

*Орчин үеийн анагаах ухаанд эсрэгбие илрүүлэх нь улам бүр чухал болж байна. Эсрэгбие илрүүлэх янз бүрийн аргууд байдаг ч фагийн дэлгэцийн технологийг анагаахын шинжлэх ухаанд илүү ашигладаг. 1990 оноос хойш VHs, VHHs, scFvs, diabodies, Fab эсрэгбие зэрэг фагийн сангуудыг бий болгохын тулд өөр өөр эсрэгбиеийн форматуудыг ашигласан.
*Фаг пептидийн сангууд нь уургийн эпитопуудын дарааллыг хурдан тодорхойлох боломжийг олгодог бөгөөд эпитопууд болон антиген рецепторуудын харилцан үйлчлэлийг судлах хүчирхэг хэрэгсэл болсон.
* Эсрэгбиеийн фрагментүүд нь M13 фагийн G3P-тэй нийлдэг бөгөөд эсрэгбиеийн фрагментийг кодлодог олон тооны генийг клончлох замаар олон төрлийн эсрэгбиемүүдийг сонгох боломжтой том фагийн дэлгэцийн эсрэгбиеийн санг үүсгэж болно.
*T7 фагийн дэлгэцийн систем нь энгийн, өндөр аюулгүй байдал, тогтвортой байдал, хадгалах, тээвэрлэхэд хялбар зэрэг олон давуу талтай тул системийг урьдчилан сэргийлэх болон эмчилгээний вакцинд ашигладаг.
*T7 фагийн дэлгэцийн систем нь эмгэг төрүүлэгч бичил биетний гадаргуугийн эсрэгтөрөгч, хорт хавдрын эсрэгтөрөгч зэрэг янз бүрийн эсрэгтөрөгчийг илрүүлэх боломжтой.

Фаж