Phage Display Library скрининг үйлчилгээ

Фагийн дэлгэцийн скрининг технологийг эсрэгтөрөгчийн эпитопуудыг судлахаас гадна эсийн дохио дамжуулах, уураг таних газар, эм боловсруулах зэрэг салбарт ашигласан.

БИДЭНД ХОЛБОО БАРИХ

Phage Display Library скрининг үйлчилгээ

Alpha Lifetech нь Phage дэлгэцийн технологийг олон жилийн турш гүнзгийрүүлэн хөгжүүлж ирсэн. Энэ нь шинжлэх ухааны судалгааны цаг эсвэл төслийн судалгаа хийх цагийг хэмнэж, дараагийн үйлдвэрлэлийг хөнгөвчлөх төгс тогтвортой Phage дэлгэцийн технологийн платформыг бий болгосон. Alpha Lifetech нь vhh эсрэгбие үйлдвэрлэх, scFv эсрэгбие үйлдвэрлэх, Fab Antibody үйлдвэрлэх зэрэг үйлчилгээг хэрэглэгчдэд үзүүлэх боломжтой.

Alpha Lifetech нь M13/T7 фагийн дэлгэцийн иж бүрэн платформтой бөгөөд эсрэгбиеийн сангуудыг барьж, үйлдвэрлэх боломжийг олгодог. Мөн бид таны хэрэгцээнд нийцүүлэн эсрэгбие scFv үйлдвэрлэх, өндөр үр дүнтэй эсрэгбие скрининг хийх зэрэг захиалгат үйлчилгээг үзүүлэх боломжтой.

Фагийн дэлгэцийн номын сангийн барилгын үйл явц

Фагийн номын сан байгуулах үйл явц нь дараах байдалтай байна: тусгай праймерууд нь T7/M13 фагийн вектортой ферментээр холбосон бүтээгдэхүүнийг олж авах ПГУ-ын олшруулалтад зориулагдсан бөгөөд рекомбинант фагийн плазмид амжилттай бүтээгдсэн. Рекомбинант фагийн плазмидыг TG1 рецептор эс болгон хувиргаж, дараа нь тохирох антибиотик агуулсан орчинд бүрхэж, трансформаторуудыг шалгасны дараа өргөжүүлсэн өсгөвөрлөлтийг хийсэн. Олон удаагийн өсгөвөрлөсний дараа фаг нь бактери дахь репликацын хугацааг давтаж, зорилтот уураг эсвэл полипептидийг амжилттай илэрхийлдэг. Дараа нь зарим хольц, холбоогүй фагуудыг арилгахын тулд фагийн санг цэвэршүүлдэг.

Фагийн дэлгэцийн номын сангийн скрининг хийх аргууд

Фагийн дэлгэцийн эсрэгбиеийн үйлдвэрлэлийн амжилт нь эсрэгбиеийн фагийн дэлгэцийн сангаас голчлон хамаардаг бөгөөд фагийн шилжилтийн нийтлэг аргууд нь хатуу фазын болон шингэн фазын скрининг юм. Хатуу фазын эсрэгтөрөгчийн скрининг нь эсрэгбиеийн фагийн дэлгэцийн санг олж авахын тулд 3-4 удаагийн шүүрлээр тодорхой эсрэгбиемүүдийг баяжуулдаг; Шингэн фазын эсрэгтөрөгчийн скрининг нь биотин шошготой зорилтот ба эсрэгбиеийн фагийн дэлгэцийн санг өсгөвөрлөх, соронзон бөмбөлгүүдийг ашиглан холбогдсон фагийг барих замаар хийгддэг. Хатуу фазын скрининг нь эсрэгтөрөгчийг илүү ихээр хэрэглэдэг бөгөөд зарим антиген эпитопууд устдаг. Шингэн фазын скрининг нь өндөр үр ашигтай, баяжуулалтаар тодорхойлогддог боловч олж авсан эсрэгбиемүүд нь өвөрмөц бус байдаг. Фагийн шилжилтийн арга нь туршилтын хэрэгцээ шаардлагаас хамаардаг бөгөөд эдгээр нь бүгд фагийн эсрэгбие үүсэхэд тодорхой нөлөө үзүүлэх болно.

Өндөр хүчин чадалтай эсрэгбиеийн скрининг

Орчин үеийн анагаах ухаанд эсрэгбиеийн хөгжил хурдацтай хөгжиж байна. Эсрэгбие хөгжүүлэх янз бүрийн аргууд байдаг ч өндөр нэвтрүүлэх чадвартай эсрэгбиеийн скринингийг анагаахын шинжлэх ухаанд илүү ашигладаг. Уг процесс нь эсрэгбиеийн репертуарын олон янз байдлыг их хэмжээгээр олж авах боломжтой. Уламжлалт эсрэгбиеийн номын сангийн скрининг аргуудтай хослуулах нь фагийн дэлгэцийн сангуудын скрининг чанарыг сайжруулах боломжтой. Биологийн скрининг хийсний дараа эсрэгбие нь бага дамжуулалттай ELISA эсвэл өндөр дамжуулалттай эсрэгбиеийн скринингээр тодорхойлогддог.

Зураг.1 Фагийн эсрэгбиеийн санг байгуулахаас эхлээд эсрэгтөрөгчтэй өндөр хамааралтай, дархлаа багатай моноклональ эсрэгбие үүсэх хүртэлх үйл явдлын дарааллыг харуулсан урсгалын диаграм.(Лавлах эх сурвалж: Phage Display технологи нь эсрэгбие эмийг илрүүлэх хүчирхэг платформ юм - PMC (nih.gov))

Эсрэгбиеийн фагийн дэлгэцийн скринингийн урьдчилан сэргийлэх арга хэмжээУрьдчилан сэргийлэх

Буферийн анхаарах зүйлс

Буферийг сонгохдоо зорилтот байдлын тогтвортой байдал, холбох бичил орчин, бодит хэрэглээний хувилбарт хамгийн бага өвөрмөц бус холболтыг харгалзан үзэх шаардлагатай. Холбоогүй уураг, ион бус угаалгын нунтаг, физиологийн давсны концентраци нь дэвсгэрийг багасгахад тустай. Зарим зорилтод буферт хоёр валент катион эсвэл бусад кофактор нэмэх шаардлагатай, уургийн кофакторыг зорилтот бүлэгт хавсаргах, ангилах буферт нэмж оруулах, тэр ч байтугай байг барих хэрэгсэл болгон ашиглах зэрэг бусад нөхцөлүүд байдаг.

Даралтын талаар анхаарах зүйлс

Сонгон шалгаруулалтын даралтын нийтлэг анхаарах зүйлд зорилтот молекулуудын концентраци, холбох хугацаа, угаах эрч хүч гэх мэт орно. Сонголтын даралтыг нэмэгдүүлэх бусад аргуудад денатурант (хүчил, мочевин, гуанидин гэх мэт), органик уусгагч, температурыг нэмэгдүүлэх, эсвэл угаалгын буфер дэх өрсөлдөгч лиганд эсвэл зорилтот бодисын концентрацийг нэмэгдүүлэх зэрэг орно.
Тэдгээрийн дунд эхний шатны үзлэг чухал ач холбогдолтой. Шалгалтын эхний шат нь тусгай бус клоныг устгахын зэрэгцээ барьсан номын сангаас аль болох олон эерэг клоныг авах явдал юм. Номын сангийн олон янз байдлыг хадгалахын тулд олон тооны холбогдсон фагуудыг барьж авахын тулд сүвэрхэг бүрсэн бай эсвэл олон тооны уусдаг байг ашиглах хэрэгтэй. Дараагийн ээлжинд скрининг хийхдээ баяжуулах, олон удаа угаах, угаах хугацааг нэмэгдүүлэх замаар сонгон шалгаруулах даралтыг нэмэгдүүлэх шаардлагатай бол өндөр наалдацтай клоныг шүүж болно.

Сөрөг скрининг стратеги

Антигений шошго ба зөөвөрлөгч материалыг скрининг хийх үйл явц нь шошго, хайлуулах уураг, туслах субстрат зэрэг эсрэгтөрөгчийн нэгдэл дээрх бүх бодисыг шалгах явдал юм. Зорилтот бус сөрөг скрининг нь зорилтот эсрэгтөрөгчөөс бусад эсрэгбиеийн баяжуулалтыг хязгаарлаж болно.
Бүхэл эсүүд, липосомууд, нано-фосфолипидын дискүүд болон VLP-ийг Трансфекцтэй эсийн шугамыг скрининг хийхдээ симуляци хийсэн трансфекцтэй эсүүд эсвэл трансфекцгүй эсүүдийг ашиглан сөрөг байдлаар шалгаж болно.
Нарийн төвөгтэй эсрэгтөрөгчийн хольцыг зайлуулах Бүхэл эс эсвэл цэвэр бус уураг гэх мэт үл мэдэгдэх эсвэл нарийн төвөгтэй зорилтот молекулуудад хатуу сөрөг скрининг хийж болно.
Эсрэгтөрөгчийн тодорхой цэгүүдийн эсрэг эсрэгбиеийн стратеги нь нэг нь өндөр концентрацитай лиганд нэмж, нөгөө нь эсрэгбиемийг хаах замаар лигандтай өрсөлдөх чадвартай эсрэгбиемийг ялгах явдал юм.

Фаж дэлгэцийн хэрэглээ

*Орчин үеийн анагаах ухаанд эсрэгбие илрүүлэх нь улам бүр чухал болж байна. Эсрэгбие илрүүлэх янз бүрийн аргууд байдаг ч фагийн дэлгэцийн технологийг анагаахын шинжлэх ухаанд илүү ашигладаг. 1990 оноос хойш VHs, VHHs, scFvs, diabodies, Fab эсрэгбие зэрэг фагийн сангуудыг бий болгохын тулд өөр өөр эсрэгбиеийн форматуудыг ашигласан.
*Фаг пептидийн сангууд нь уургийн эпитопуудын дарааллыг хурдан тодорхойлох боломжийг олгодог бөгөөд эпитопууд болон антиген рецепторуудын харилцан үйлчлэлийг судлах хүчирхэг хэрэгсэл болсон.
* Эсрэгбиеийн фрагментүүд нь M13 фагийн G3P-тэй нийлдэг бөгөөд эсрэгбиеийн фрагментийг кодлодог олон тооны генийг клончлох замаар олон төрлийн эсрэгбиемүүдийг сонгох боломжтой том фагийн дэлгэцийн эсрэгбиеийн санг үүсгэж болно.
*T7 фагийн дэлгэцийн систем нь энгийн, өндөр аюулгүй байдал, тогтвортой байдал, хадгалах, тээвэрлэхэд хялбар зэрэг олон давуу талтай тул системийг урьдчилан сэргийлэх болон эмчилгээний вакцинд ашигладаг.
*T7 фагийн дэлгэцийн систем нь эмгэг төрүүлэгч бичил биетний гадаргуугийн эсрэгтөрөгч, хорт хавдрын эсрэгтөрөгч зэрэг янз бүрийн эсрэгтөрөгчийг илрүүлэх боломжтой.

Фаж