Фаж дэлгэцийн номын сангийн үзлэгийн үйлчилгээ

Фагийн дэлгэцийн скрининг технологийг эсрэгтөрөгчийн эпитопуудыг судлахаас гадна эсийн дохионы дамжуулалт, уургийн таних цэгүүд, эмийн хөгжил зэрэг салбарт хэрэглэж ирсэн.

ХОЛБОО БАРИХ

Фаж дэлгэцийн номын сангийн үзлэгийн үйлчилгээ

Alpha Lifetech нь олон жилийн турш Фаге дэлгэцийн технологид гүнзгий оролцож ирсэн. Энэ нь шинжлэх ухааны судалгааны цаг хугацаа эсвэл төслийн судалгааны цагийг хэмнэж, дараагийн үйлдвэрлэлийг хөнгөвчлөх төгс тогтвортой Фаге дэлгэцийн технологийн платформыг бүтээсэн. Alpha Lifetech нь мөн хэрэглэгчдэд vhh эсрэгбие үйлдвэрлэх, scFv эсрэгбие үйлдвэрлэх, Fab эсрэгбие үйлдвэрлэх зэрэг үйлчилгээг үзүүлэх боломжтой.

Alpha Lifetech нь эсрэгбиеийн санг байгуулах, үйлдвэрлэх цогц M13/T7 фагийн дэлгэцийн платформтой. Мөн бид таны хэрэгцээг хангахын тулд эсрэгбие scFv үйлдвэрлэл, өндөр хүчин чадалтай эсрэгбиеийн шинжилгээ зэрэг захиалгат үйлчилгээг үзүүлэх боломжтой.

Фагийн дэлгэцийн номын сангийн барилгын үйл явц

Фагийн номын сан байгуулах үйл явц нь дараах байдалтай байна: бүтээгдэхүүнийг гаргаж авдаг ПГУ-ын олшруулалтад зориулсан тусгай праймеруудыг боловсруулсан бөгөөд эдгээрийг T7/M13 фагийн вектороор ферментээр холбож, рекомбинант фагийн плазмидыг амжилттай бүтээв. Рекомбинант фагийн плазмидыг TG1 рецепторын эсүүд болгон хувиргаж, дараа нь зохих антибиотик агуулсан орчинд бүрж, трансформаторуудыг шүүсний дараа өргөтгөсөн өсгөвөр хийсэн. Олон удаагийн өсгөвөрлөлтийн дараа фаг нь бактерийн репликацийн хугацааг давтаж, зорилтот уураг буюу полипептидийг амжилттай илэрхийлдэг. Дараа нь фагийн номын санг цэвэршүүлж, зарим хольц болон холбоогүй фагуудыг зайлуулдаг.

Фагийн дэлгэцийн номын сангийн скрининг аргууд

Фагийн дэлгэцийн эсрэгбие үйлдвэрлэх амжилт нь голчлон эсрэгбиеийн фагийн дэлгэцийн сангаас хамаардаг бөгөөд фагийн паннингийн нийтлэг аргууд нь хатуу фазын болон шингэн фазын скрининг юм. Хатуу фазын антигенийн скрининг нь эсрэгбиеийн фагийн дэлгэцийн санг авахын тулд 3-4 удаагийн элюцийн аргаар тодорхой эсрэгбиеийг баяжуулдаг; Шингэн фазын антигенийн скринингийг биотиноор тэмдэглэгдсэн бай болон эсрэгбиеийн фагийн дэлгэцийн санг инкубаци хийж, соронзон бөмбөлгүүдийг ашиглан холбогдсон фагуудыг барьж авдаг. Хатуу фазын скрининг нь илүү их антигенийг хэрэглэдэг бөгөөд зарим антигенийн эпитопууд устдаг. Шингэн фазын скрининг нь өндөр үр ашигтай, баяжуулах шинж чанартай боловч олж авсан эсрэгбие нь бага өвөрмөц байдаг. Фагийн паннингийн арга нь туршилтын хэрэгцээнээс хамаардаг бөгөөд энэ бүхэн нь фагийн дэлгэцийн эсрэгбие үйлдвэрлэх нөлөөнд тодорхой нөлөө үзүүлэх болно.

Өндөр хүчин чадалтай эсрэгбиеийн скрининг

Орчин үеийн анагаах ухаанд эсрэгбиеийн хөгжил хурдацтай хөгжиж байна. Эсрэгбиеийн хөгжлийн өөр өөр аргууд байдаг боловч өндөр хүчин чадалтай эсрэгбиеийн скринингийг анагаах ухааны шинжлэх ухаанд илүү их ашигладаг. Энэ процесс нь эсрэгбиеийн олон янз байдлыг их хэмжээгээр олж авах боломжийг олгодог. Уламжлалт эсрэгбиеийн сангийн скринингийн аргуудтай хослуулан фагийн дэлгэцийн сангийн скринингийн чанарыг сайжруулж чадна. Биологийн скрининг хийсний дараа эсрэгбиеийг бага хүчин чадалтай ELISA эсвэл өндөр хүчин чадалтай эсрэгбиеийн скринингээр тодорхойлж болно.

Зураг 1. Фагийн эсрэгбиеийн санг байгуулахаас эхлээд антигенд өндөр хамааралтай, дархлаа үүсгэх чадвар багатай моноклональ эсрэгбие үүсгэх хүртэлх үйл явдлын дарааллыг харуулсан урсгалын диаграмм.(Лавлагаа эх сурвалж: Фаг дэлгэцийн технологи нь эсрэгбиеийн эмийг илрүүлэх хүчирхэг платформ юм - PMC (nih.gov))

Эсрэгбиеийн Фагийн Дэлгэцийн Скрининг хийх үеийн урьдчилан сэргийлэх арга хэмжээУрьдчилан сэргийлэх

Буферийн анхаарах зүйлс

Буфер сонгохдоо байны тогтвортой байдал, холбох бичил орчин, бодит хэрэглээний нөхцөлд өвөрмөц бус холболтын хамгийн бага түвшинг харгалзан үзэх ёстой. Холбоогүй уургууд, ион бус угаалгын бодис, физиологийн давсны концентраци нь дэвсгэрийг бууруулахад тусалдаг. Мөн зарим байнд буферт хоёр валенттай катион эсвэл бусад кофактор нэмэх шаардлагатай байж болох, уургийн кофакторуудыг байтай хамт бэхлэх, ялгах буферт нэмэх, тэр ч байтугай байг барих хэрэгсэл болгон ашиглаж болох зэрэг бусад нөхцөлүүд байдаг.

Даралтын хүчин зүйлс

Сонголтын даралтыг авч үзэх нийтлэг хүчин зүйлсэд бай молекулуудын концентраци, холбох хугацаа, угаах эрчим гэх мэт орно. Сонголтын даралтыг нэмэгдүүлэх бусад аргуудад денатуратжуулагч (жишээлбэл, хүчил, мочевин, гуанидин), органик уусгагч хэрэглэх, температурыг нэмэгдүүлэх, эсвэл угаалгын буфер дахь өрсөлдөгч лиганд эсвэл байны концентрацийг нэмэгдүүлэх зэрэг орно.
Тэдгээрийн дундаас эхний шатны скрининг чухал юм. Эхний шатны скрининг нь өвөрмөц бус клонуудыг арилгахын зэрэгцээ барьсан сангаас аль болох олон эерэг клоныг барих явдал юм. Номын сангийн олон янз байдлыг хадгалахын тулд олон тооны холбогдсон фагуудыг барихын тулд сүвэрхэг бүрхүүлтэй бай эсвэл олон тооны уусдаг байг ашиглах хэрэгтэй. Дараагийн шатны скринингүүдэд баяжуулалт нэмэгдэх, олон удаа угаах, угаах хугацаа нэмэгдэхийн хэрээр сонголтын даралтыг нэмэгдүүлэх шаардлагатай бөгөөд өндөр хамааралтай клонуудыг скрининг хийж болно.

Сөрөг скрининг хийх стратеги

Антиген шошго болон тээвэрлэгч материалын хувьд скрининг хийх үйл явц нь шошго, нэгдлийн уураг болон дэмжих субстрат зэрэг эсрэгтөрөгчийн коньюгат дээрх бүх бодисыг скрининг хийх явдал юм. Бай бус зүйлсийг сөрөг скрининг хийх нь бай антигенээс бусад эсрэгбиеийн баяжуулалтыг хязгаарлаж болно.
Трансфекцлэгдсэн эсийн шугамыг скрининг хийхдээ симуляцилагдсан трансфекцлэгдсэн эсүүд эсвэл трансфекцлэгдээгүй эсүүдийг ашиглан бүхэл эс, липосом, нано-фосфолипидын диск болон VLP-үүдийг сөрөг скрининг хийж болно.
Нарийн төвөгтэй эсрэгтөрөгчийн холимгийг зайлуулах Бүхэл эс эсвэл цэвэр бус уураг гэх мэт тодорхойгүй эсвэл нарийн төвөгтэй зорилтот молекулуудад хатуу сөрөг скрининг хийж болно.
Антигенийн тодорхой хэсгүүдийн эсрэг эсрэгбиеийн стратеги нь нэг нь лигандтай өрсөлдөх чадвартай эсрэгбиеийг өндөр концентрацитай лиганд нэмж ялгах, нөгөө нь эсрэгбиеийг хаах явдал юм.

Фагийн дэлгэцийн хэрэглээ

*Эсрэгбие илрүүлэх нь орчин үеийн анагаах ухаанд улам бүр чухал болж байна. Эсрэгбие илрүүлэх өөр өөр аргууд байдаг ч фагийн дэлгэцийн технологийг анагаах ухааны шинжлэх ухаанд илүү их ашигладаг. 1990 оноос хойш VH, VHH, scFvs, диабоди, Fab эсрэгбие зэрэг фагийн санг бүрдүүлэхэд эсрэгбиеийн өөр өөр форматыг ашиглаж ирсэн.
*Фаг пептидийн сангууд нь уургийн эпитопын дарааллыг хурдан тодорхойлох боломжийг олгодог бөгөөд эпитоп ба антиген рецепторуудын харилцан үйлчлэлийг судлах хүчирхэг хэрэгсэл болсон.
*Эсрэгбиеийн хэлтэрхий нь M13 фагийн G3P-тэй нийлж, эсрэгбиеийн хэлтэрхийг кодчилдог олон тооны генийг клончилсноор олон төрлийн эсрэгбие сонгож болох том фагийн дэлгэцийн эсрэгбиеийн сангуудыг үүсгэж болно.
*T7 фагийн дэлгэцийн систем нь энгийн байдал, өндөр аюулгүй байдал, тогтвортой байдал, хадгалахад хялбар, тээвэрлэх зэрэг олон давуу талтай тул уг системийг урьдчилан сэргийлэх болон эмчилгээний вакцинд ашигладаг.
*T7 фагийн дэлгэцийн систем нь эмгэг төрүүлэгч бичил биетний гадаргуугийн антиген болон хорт хавдрын антиген зэрэг янз бүрийн антигенийг илрүүлж чаддаг.

Фаг