Уураг, уургийн харилцан үйлчлэлийн шинжилгээний үйлчилгээ

Мөн Alpha Lifetech нь үйлчлүүлэгчдэд уургийн шинжилгээ, уургийн харилцан үйлчлэлийн шинжилгээ, уураг-уургийн харилцан үйлчлэлийн шинжилгээ (CO-IP, Western Blot, Хроматин дархлал тунадасжилтын шинжилгээ), уургийн функцын шинжилгээгээр янз бүрийн хэрэглэгчдийн туршилтын хэрэгцээг хангах боломжтой.

БИДЭНД ХОЛБОО БАРИХ

Уураг, уургийн харилцан үйлчлэлийн шинжилгээний үйлчилгээ

Alpha Lifetech нь уургийн шинжилгээний ажилд олон жилийн турш гүн гүнзгий оролцож, уургийн функциональ шинжилгээний найдвартай платформыг бүтээж, уургийн харилцан үйлчлэлийг баталгаажуулах олон төрлийн техникийн хэрэгслийг эзэмшсэн нь шинжлэх ухааны судалгаа эсвэл төслийн судалгааны цагийг хэмнэж, тогтвортой үр дүнг өгдөг.

Уураг-уургийн харилцан үйлчлэлийн шинжилгээний танилцуулга

Уургууд нь удамшлын материалд хадгалагдсан зааврын дагуу амьдралын аль ч хэлбэрийн гүйцэтгэх хамгийн чухал молекулууд юм. Ихэнх тохиолдолд уургууд нь бусад уурагтай харилцан үйлчилдэг үүрэг гүйцэтгэгч болж үүргээ гүйцэтгэдэг бөгөөд энэ нь уургийн үйл ажиллагааг эсийн бодит нөхцөл байдалд судлахад илүү тод харагддаг. Уургийн хоорондын харилцан үйлчлэлийг тодорхойлох нь бие даасан уургийн биохимийн судалгаанд маш чухал юм. Нийтлэг төрлүүдийн уургийн харилцан үйлчлэлийн шинжилгээ:

Хамтарсан дархлаажуулалтын шинжилгээ

Хамтарсан дархлаажуулалтын аргын зарчим нь зорилтот уураг, өвөрмөц эсрэгбие, уургийн A/G соронзон бөмбөлгүүдийг инкубацид хольж, соронзон тавиур дээрх соронзон хальсыг шингээх замаар холбогдоогүй уургийн супернатантыг хаяж, уураг болон бусад өвөрмөц бус шингэцгүй бодисыг арилгахын тулд соронзон хальсыг угаана.

Зураг.1 Co-IP шинжилгээний бүдүүвч диаграм.(Лавлах эх сурвалж: Хамтарсан тунадасжилтын шинжилгээ - PubMed (nih.gov))

Доош татах шинжилгээ

Доош татах шинжилгээ нь соронзон ирмэг дээр мэдэгдэж буй уургийг тогтоож, илрүүлэх бодисыг нэмэх явдал юм. Угаагч бодисыг харилцан үйлчлэгч уургийг шингээхэд зориулж илрүүлдэг.

1988 онд Смит нар. Цэвэршүүлсэн GST хайлуулах уураг нь доош татах шинжилгээнд хэрэглэгдэж, Gst pull down гэж нэрлэгддэг бөгөөд энэ нь зорилтот уураг руу GST шошго нэмж, GSH-ээр дамжуулан харилцан үйлчилж буй уургийг барьж, холболтыг ялгаж, ДБ шинжилгээгээр баталгаажуулдаг.

Зураг.2 GST-ийн сугалах шинжилгээний бүдүүвч диаграм.(Лавлах эх сурвалж: PIF4 холболтыг In vitro-д судлах GST-ийг доош татах шинжилгээ - PubMed (nih.gov) )

Түүний суналт нь никель, кобальт гэх мэт металлын ионуудыг орчин болгон ашиглах, уургийг ойрын хроматографийн аргаар цэвэршүүлэх, ДБ-ын туршилтаар холбогчийг ялган шалгах явдал юм.

Нэмж дурдахад ДНХ-ийг доош татах (Уургийн дН-ийг холбох шинжилгээ), РНХ-ийг доош татах (Уургийн рН-ийн харилцан үйлчлэлийн шинжилгээ), жижиг молекулыг буулгах шинжилгээ байдаг.

DNA Pull-down (Protein dna binding assay) нь уургийн ДНХ-ийн холболтыг тодорхойлох in vitro арга юм. Тодорхой уургууд нь зорилтот ДНХ-тэй холбогддог эсэхийг ДБ шинжилгээгээр илрүүлсэн; Үл мэдэгдэх ДНХ-ийн хэлтэрхийнүүд нь уурагтай холбогддог бөгөөд ДНХ-ийн хэсгүүд нь MS илрүүлэлтээр тодорхойлогддог

РНХ татах (Уургийн рна харилцан үйлчлэлийн шинжилгээ) нь уурагтай РНХ-ийн холболтыг тодорхойлох in vitro арга юм. Тодорхой уураг нь зорилтот РНХ-тэй холбогдож байгаа эсэхийг ДБ шинжилгээгээр илрүүлсэн; Үл мэдэгдэх РНХ-ийн хэсгүүд нь уурагтай холбогддог бөгөөд РНХ-ийн хэлтэрхийнүүд нь MS илрүүлэлтээр тодорхойлогддог

SM татах (жижиг молекулыг доош татах шинжилгээ) нь жижиг молекулуудтай тусгайлан холбогддог зорилтот уургийг олох боломжтой бөгөөд MS-тэй хослуулснаар жижиг молекулын зорилтот уурагуудыг нарийн шалгаж үзэх боломжтой бөгөөд үүнийг in vitro шошгоны арга болон биологийн ортогональ арга гэж хувааж болно.

ДБ туршилт

WB туршилт (Western Blot туршилт эсвэл Western blot гэж нэрлэдэг), мөн чанар нь эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн өвөрмөц урвал бөгөөд үндсэн зарчим нь SDS полиакриламидын гель электрофорезоор денатуратлагдсан уургийг салгаж, мембран дамжуулалт (нойтон эсвэл хагас хуурай эргэлт) замаар хатуу фазын тээвэрлэгч (PVDF мембран, NC мембран гэх мэт) руу шилжүүлэх явдал юм. Блоклосны дараа (BSA, цөцгийн тос гэх мэт) анхдагч эсрэгбиемийг уурагтай тусгайлан холбохын тулд түрхэж, хальсыг угаасны дараа флюресценээр тэмдэглэсэн хоёрдогч эсрэгбиемийг нэмнэ. Хоёрдахь эсрэгбиемийг анхдагч эсрэгбиемтэй холбосноор зорилтот уургийг субстратын өнгөний хөгжил, химилюминесценцээр ажиглаж болно. Энэ нь дээжинд тодорхой уураг агуулагдаж байгаа эсэхийг тодорхойлох, түүний илэрхийллийн түвшинг ойролцоогоор шинжлэхэд ашиглагддаг.

Уураг-уургийн харилцан үйлчлэлийн аргын харьцуулалт

Уургийг татах шинжилгээ нь Co-IP шинжилгээтэй төстэй бөгөөд хоёулаа уургийн харилцан үйлчлэлийн туршилтыг илрүүлэхэд хамаарна. Хоёр аргын ялгаа нь Co-IP шинжилгээ нь мэдэгдэж буй уургуудын харилцан үйлчлэлцдэг уургуудыг олж авдаг бөгөөд энэ нь тодорхой үнэн зөв боловч харилцан үйлчлэгч уургууд нь шууд эсвэл шууд бусаар харилцан үйлчилдэг эсэхийг баталгаажуулж чадахгүй. Доош татах шинжилгээ нь мэдэгдэж буй уурагтай харилцан үйлчлэлцэж буй үл мэдэгдэх уураг олох явдал юм. Энэ нь мэдэгдэж буй уураг нь илэрсэн уурагтай харилцан үйлчлэлцэж байгаа эсэхийг шууд баталгаажуулж болох боловч in vivo холболтын нөхцөл байдлыг мэдэж чадахгүй.

Хамтарсан дархлаажуулалтын технологи нь хоёр ба түүнээс дээш уураг хооронд харилцан үйлчлэлцэж байгаа эсэхийг дархлаа дарангуйлах туршилт дээр үндэслэн шинжлэхэд ашигладаг. Туршилтын бусад уургийн харилцан үйлчлэлийн шинжилгээтэй харьцуулахад (GST Pull-down, Western Blot, Chromatin immunoprecipitation assay гэх мэт), Co-IP технологи нь илүү өндөр өвөрмөц чанар, мэдрэг чанар, давтагдахгүй, давтагдахгүй байх чадвартай. байгалийн төлөвт уургийн харилцан үйлчлэл.

	GST доош татах	Хамтын IP	ДБ
Давуу тал	Ажиллахад хялбар Янз бүрийн уураг цэвэршүүлэхэд тохиромжтой	In vivo харилцан үйлчлэлийн шинжилгээнд зориулагдсан Үүнийг доод урсгалын уургаар тодорхойлж болно	* Өндөр өвөрмөц байдал *Чанар болон тоон in vitro
Хязгаарлалт	Өвөрмөц бус холболт байж магадгүй Харилцааг цаашид баталгаажуулах шаардлагатай	* Эсрэг биетүүдээс хүчтэй хамааралтай *Өвөрмөц бус холболт үүсч болно	Цаг хугацаа их шаарддаг Их хэмжээний уургийн шинжилгээ хийхэд хэрэглэхэд хүндрэлтэй
Хэрэглээний жишээ	* Харилцаа холбоог тодорхойлох *Цэвэршүүлсэн уургийн цогцолбор	Дохио дамжуулалтыг судлах Өвчний механизм	Уураг-уураг, уураг-ДНХ, уураг-РНХ-ийн харилцан үйлчлэлийн дараагийн шинжилгээ