Нэг В эсийн ангилах платформ
Моноклональ эсрэгбие (mAb) нь эсрэгбие эмийн анхдагч болохын хувьд 100 гаруй моноклон эсрэгбие нь хорт хавдар, халдварт өвчнийг эмчлэх, өөрийн эм боловсруулах зах зээлд батлагдсан, өвөрмөц эмчилгээний үнэ цэнийг харуулж байна. Нэг В эсийн эсрэгбиеийн технологи нь шинэ үеийн эсрэгбие хөгжүүлэх технологийн хувьд нэг В эсээс эсрэгбиеийг үр дүнтэй, хурдан тусгаарлаж чаддаг нь эрлийз ба фагийн дэлгэцийн дараа эсрэгбие үйлдвэрлэх технологийн дэвшил юм. Нэг В эсийг ялгах технологийг туулай, хулгана, тэмээ, хонь, тахиа гэх мэт олон зүйлийн эсрэг эсрэгбие үүсгэхэд ашиглаж болно. Нэг В эсийн технологи нь өндөр өвөрмөц чанар, өндөр идэвхжил, өндөр ойр дотно байдал зэрэг гайхалтай давуу талуудтай. Ганц В эсийг ялгах платформ дээр суурилсан Alpha Lifetech нь скрининг хийх хугацаа, өндөр чанарын эсрэгбие авах давуу талтай. Энэ нь эсрэгтөрөгчийн дизайн, синтез, өөрчлөлт, амьтны дархлаа, нэг В эсийг баяжуулах скрининг, нэг эсийн дараалал, өндөр дамжуулалтын скрининг, экспресс, цэвэршүүлэх, хэрэглэгчийн олон төрлийн хэрэгцээг хангах функциональ баталгаажуулалт зэрэг нэг цэгийн техникийн үйлчилгээг үзүүлэх боломжтой.
Нэг В эсийн скрининг хийх аргуудын хураангуй
Нэг В эсийн скринингийн аргуудыг голчлон санамсаргүй тусгаарлах арга ба Антигенселектив тусгаарлалт гэж хуваадаг. Санамсаргүй байдлаар ялгах нь антигенселективийн өндөр концентрацитай дээжинд хамаарах бөгөөд зөвхөн В эсийг тусгаарладаг. Энэ нь ажиллахад хялбар боловч маш их хөдөлмөр шаарддаг бөгөөд ихэвчлэн эсрэгтөрөгчийг тусгайлан ялгах эхний алхам болгон ашигладаг. Антиген өвөрмөц салгах арга нь хавдрын эсрэг эсрэгбие, аутоиммун эсрэгбие зэрэг өвөрмөц эсрэгбиеийн агууламж багатай нөхцөлд тохиромжтой. Антиген ба эсрэгбиеийн өвөрмөц холболтын дархлаа судлалын зарчмыг ашиглан өвөрмөц В эсийг тусгаарлах нь харьцангуй төвөгтэй юм. Ангилах түгээмэл хэрэглэгддэг арга, түүний давуу болон сул талуудыг хүснэгтэд үзүүлэв.
| Арга хандлага | Давуу тал | Сул тал | |
|---|---|---|---|
| Санамсаргүй Тусгаарлалт | Микроманипуляци | Бага тоног төхөөрөмжийн шаардлага Энгийн ажиллагаа | Үр ашиг багатай Хязгаарлагдмал төрлийн тусгаарлагдсан эсүүд |
| Лазераар авах микродиссекция | Байрлалын өндөр нарийвчлал Энгийн ажиллагаа Дээжээс ижил төстэй эсүүдийг нүдээр сонгож, хольцыг зайлуулна | Дээж бэлтгэх нарийн төвөгтэй үйл явц Автоматжуулах чадваргүй | |
| Флюресценцээр идэвхжүүлсэн эсийг ангилах | Өндөр нарийвчлал, үр ашиг Өндөр түвшний автоматжуулалт Өргөн хэрэглээ | Нарийн төвөгтэй ажиллагаа Тоног төхөөрөмжийн өндөр шаардлага | |
| Антиген сонгон тусгаарлах | Фторохромын эсрэгтөрөгчийг олон параметрээр тэмдэглэсэн | Өндөр нарийвчлал, үр ашиг Өндөр түвшний автоматжуулалт Өндөр хүчин чадалтай, олон параметртэй Янз бүрийн үе шатанд В эсийг тусгаарлах чадвар | Нарийн төвөгтэй ажиллагаа Тоног төхөөрөмжийн өндөр шаардлага |
| Антиген бүрсэн соронзон бөмбөлгүүдийг | Энгийн ажиллагаа Өндөр давтагдах чадвар Зорилтот В эсийг баяжуулж чаддаг | Нарийн төвөгтэй ажиллагаа Соронзон бөмбөлгүүдийг нь эсийн биологийн идэвхжилд нөлөөлдөг бөгөөд тусгаарлагдсаны дараа өсгөвөрлөх, ажиллуулахад тохиромжгүй байдаг. | |
| Бичил сийлбэр | Өндөр бүтээмжтэй Өндөр хурд | Тоног төхөөрөмжийн өндөр шаардлага Үр ашиг багатай | |
| Чип дээрх иммуноспотын массивын шинжилгээ | Өндөр түвшний автоматжуулалт Өндөр нарийвчлал, үр ашиг | Нарийн төвөгтэй ажиллагаа Өндөр өртөгтэй |
нэг В эсийн скрининг эсрэгбие үйлчилгээний үйл явц
Амьтны дархлаажуулалт
Туршилтын амьтдад (хулгана, туулай гэх мэт) тохирох антигенийг сонгон дархлалыг өдөөж, эсрэгтөрөгчийн эсрэг тусгай эсрэгбие үүсгэж болно.
Амьтны дархлаажуулалт нь эсрэгбие үүсэх эхний үе шат юм. Амьтны дархлаажуулалт гэдэг нь организмын хошин дархлааны хариу урвалын механизмыг ашиглан антигенийг тасралтгүй өдөөх замаар амьтад хүчтэй дархлааны хариу урвал үүсгэж, дараа нь тодорхой эсрэгтөрөгчийн эсрэг өвөрмөц эсрэгбие ялгаруулдаг.
В эсийг цуглуулах, баяжуулах
В эсийг дархлаатай амьтдын захын цус, дэлүү эсвэл тунгалгийн зангилаанаас тусгаарласан. Эдгээр В эсүүд нь тодорхой эсрэгтөрөгчийн эсрэг эсрэгбие үүсгэхийн тулд дархлааны аргаар өдөөгдсөн байдаг.
Физик эсвэл химийн аргаар (нягт градиент центрифуг хийх, соронзон ирмэгийг салгах гэх мэт) В эсийг баяжуулах, хольцын эсийг зайлуулах, В эсийн цэвэршилт, дараагийн салгах үр ашгийг дээшлүүлэх.

Зураг 1 Туулайн моноклональ эсрэгбиеийг клонжуулах, бэлтгэх. Лавлах эх сурвалж:Нэг В эсийг клонжуулах, туулайн моноклональ эсрэгбие үйлдвэрлэх.)
B эсийн ангилах
Флюресценцээр идэвхжүүлсэн эсийг ялгах (FACS), соронзон эсийг ялгах (MACS), бичил шингэн эсийн ялгагч (MCS) эсвэл бусад өндөр үр дүнтэй скрининг аргуудыг эсрэгтөрөгчийн тусгай шошготой хослуулан баяжуулсан В эсээс В эсийг тусад нь шалгаж, зорилтот эсрэгбие үүсгэх боломжтой.
Холимог В эсийн популяциас нэг В эсийг тусгаарлах үед түүний эсрэгбиеийн генийг нэг эсийн дарааллын технологиор дараалуулж, хүнд гинжин хэлхээний хувьсах бүс (VH) болон хөнгөн гинжин хувьсах бүс (VL)-ийн ДНХ-ийн дарааллын мэдээллийг олж авахын тулд шинжилгээ хийх шаардлагатай. Нэг эсийн дараалал тогтоох технологи нь үндсэндээ нэг эсийг тусгаарлах, эсийн доторх нуклейн хүчлийг олшруулах, дарааллын шинжилгээ хийх гэсэн гурван үе шатыг агуулдаг. Нэг эсийн дарааллын зарчим нь тусгаарлагдсан нэг эсийн бүхэл бүтэн геномын ДНХ эсвэл РНХ-ийг олшруулж, өндөр хүчин чадалтай дараалал тогтоох өндөр хамрах хүрээ бүхий бүрэн геном эсвэл транскриптомыг олж авах явдал юм.
Өндөр хүчин чадалтай скринингийн тусламжтайгаар олон мянган В эсийн эсрэгбиеийн генийн дарааллыг нэг дор олж авах боломжтой бөгөөд энэ нь эсрэгбие илрүүлэх хурдыг ихээхэн хурдасгадаг. Эдгээр дарааллын мэдээллийг цаашид эсрэгбиеийн номын сан байгуулах, скрининг хийхэд ашиглаж болно.

Зураг.2 Нэг В эсийг авах бүдүүвч диаграмм, номын сангийн барилга байгууламж, өндөр хүчин чадалтай скрининг, дараалал.(Лавлах эх сурвалж: Нэг эсийн В-эсийн рецепторын дараалал нь олон төрлийн эсрэгтөрөгч-реактив эсрэгбиемүүдийг хурдан илрүүлэх боломжийг олгодог..)
Эсрэгбиеийн генийг олшруулах
Ганц В эсийг задалж мРНХ гаргадаг. Дараа нь хүнд гинжин хувьсах бүс (VH) ба хөнгөн гинжин хувьсах бүсийн (VL) cDNA дарааллыг урвуу транскрипц-полимеразын гинжин урвал (RT-PCR) ашиглан олшруулсан.
Эсрэгбиеийн илэрхийлэл ба цэвэршүүлэх
Олшруулсан хувьсах бүсийн генийг тогтмол бүсийн гентэй вектор плазмид оруулж, моноклональ эсрэгбиеийн илэрхийлэл плазмидыг бүтээв. Дараа нь тохирох экспрессийн системийг (CHO эсүүд гэх мэт эукариот экспрессийн систем эсвэл Escherichia coli зэрэг прокариот экспрессион систем) экспрессэд зориулж сонгож, биологийн идэвхжилтэй моноклональ эсрэгбиемийг олж авна. Эсийн өсгөвөрөөс илэрсэн эсрэгбиемүүдийг ялган авах, цэвэршүүлэх, өндөр чанарын рекомбинант моноклональ эсрэгбие авахын тулд уураг А-д ойртох хроматографийг ашигласан.
Эсрэгбиеийн баталгаажуулалт
Эсрэгбиеийн гүйцэтгэл хүлээлтэд нийцэж байгаа эсэхийг шалгахын тулд ELISA, Western blot, Flow Analysis, ImmunocoPrecipitation-ийн өвөрмөц байдал, ойр дотно байдал, биологийн идэвхийг баталгаажуулсан. Эсрэгбиеийн баталгаажуулалт нь эсрэгбиеийн чанар, найдвартай байдлыг хангах гол алхам юм.
Иммуногенд тавигдах шаардлага
(1) Рекомбинант уураг: ≥2.5 мг, уургийн цэвэршилт >85%, уургийн молекул жин 10 кДа-аас их, уусдаг уургийн концентраци 0.5-5 мг/мл. Хэрэв эсрэгтөрөгчтэй холбоотой цэвэршүүлэх шаардлагатай бол нэмэлт 10 мг рекомбинант уураг шаардлагатай.
(2) Полипептид ба жижиг молекулууд: Нүцгэн пептид ≥10 мг, пептидийн цэвэршилт >90%, 10 АА-аас багагүй, KLH/BSA/OVA эсвэл бусад тээвэрлэгч уураг; Жижиг молекулууд нь бүтцийн үнэлгээг урьдчилан шаарддаг.
ганц В нүд Эрэмбэлэх үйлчилгээний ажлын урсгал
| Алхам | Үйлчилгээний агуулга | Он цагийн хэлхээс |
|---|---|---|
| Алхам 1: Амьтны дархлаажуулалт ба ELISA илрүүлэх | (1) Малыг 4-р тунгаас эхлэн 4-5 удаа дархлаажуулж, эсрэгбиеийн титрийг ELISA-аар илрүүлэхийн тулд ийлдэс цуглуулсан (уургийн антиген ELISA ийлдсийн тит >10^5; пептидийн антиген ELISA ийлдсийн титр >10^4). Үүний зэрэгцээ дархлаажуулалтын өмнөх болон дархлаажуулалтын дараах 0.1мл ийлдэсийг үйлчлүүлэгчдэд шинжилгээнд илгээдэг; Хэрэв титр нь шаардлага хангаагүй бол дархлаажуулалтыг үргэлжлүүлэх эсвэл үйлчлүүлэгч төслийг зогсоох хүсэлт гаргах бөгөөд зөвхөн дархлаажуулалтын хэсгийг төлөх; (2) Хэрэв титр шаардлага хангасан бол PBMC эсийг бүхэл цуснаас тусгаарласан. | 10-12 долоо хоног |
| Алхам 2: Нэг В эсийн ангилах | (1) Дэлүү цуглуулж, нэг В эсийн суспенз бэлтгэж, захын цусыг цуглуулж, PBMC эсийг тусгаарлав. (2) Дархлааны эсрэгтөрөгчийн маркерууд FITC ба AF648. (3) Давхар флюресценцийн урсгалаар ялгах+ ганц b эсийн клон өсгөвөр. (4) ELISA тодорхойлох + эерэг клонуудын дараалал. | 2-3 долоо хоног |
| Алхам 3: Эсрэгбиеийн илрэл ба баталгаажуулалт | (1) 6-10 дарааллын генийн нийлэгжилт + хөхтөн амьтдын илэрхийллийн туршилтын баталгаажуулалт. (2) ELISA тодорхойлох. | 3-4 долоо хоног |
| Алхам 4: Хүргэлт | (1) Эсрэгбиеийн дараалал: 4-6 эсрэгбиеийн дараалал (илэрхийлэлгүй дарааллыг хамтад нь хүргэдэг). (2) Илэрхийлсэн дараалал бүр 0.2 мг эсрэгбие өгдөг. (3) Туршилтын тайлан. | 1 долоо хоног |
Хэрэв танд асуух зүйл байвал бидэнтэй хүссэн үедээ холбоо барина уу.
Leave Your Message
0102



2018-07-16 

