T7 Фагийн дэлгэцийн пептидийн номын сангийн скрининг платформ
T7 фагийн дэлгэцийн номын сан нь пептид эсвэл уургийг харуулахад ашигладаг T7 фагийн дэлгэцийн технологид суурилсан систем юм. T7 фагийн толгой нь давхар судалтай ДНХ агуулдаг. Түүний геном нь маш тогтвортой бөгөөд ажиллуулахад хялбар тул фагийн дэлгэцийн номын санг байгуулахад илүүд үздэг вектор юм. Генийн инженерчлэлийн технологийн тусламжтайгаар санамсаргүй пептидийг кодчилдог дарааллыг T7 фагийн геномд нэгтгэж болох бөгөөд ингэснээр фагийн бөөм бүр капсидын уураг дээрээ тодорхой пептидийг харуулах боломжтой болно. Фагийн дэлгэцийн скрининг техникээр дамжуулан эдгээр номын сангууд нь хүссэн шинж чанартай пептид эсвэл уургийг тодорхойлох боломжтой.
T7 фагийн дэлгэцийн номын сангийн цөм
Фаг Т7 нь вирусын хувьд молекул биологийн туршилтанд өргөн хэрэглэгддэг. Энэ нь богино репликацийн мөчлөг, том векторын багтаамж, үр ашигтай илэрхийлэх системтэй тул илүүд үздэг. Фаг дэлгэцийн технологийн гол санаа нь генийн инженерчлэлийн аргаар экзоген пептид эсвэл уургийн хэлтэрхийг фагийн бүрхүүлийн уургуудтай (жишээлбэл, Т7 фагийн генийн 3 уураг) нэгтгэх явдал юм, ингэснээр пептид эсвэл уургууд нь фагийн гадаргуу дээр 'дэлгэц' хэлбэрээр гарч ирнэ. Ингэснээр дэлгэцийн сан дахь фагийн бөөм бүр тодорхой пептидийн дарааллыг агуулж, олон төрлийн пептидийн сан үүсгэх болно.
T7 фагийн дэлгэцийн пептидийн номын сангийн бүтэц
Т7 фагийн дэлгэцийн пептидийн номын санг байгуулах нь ихэвчлэн пептидийн номын сангийн ДНХ-ийн дарааллыг Т7 фагийн геномд оруулахаас хамаардаг бөгөөд пептидийг харуулсан фагийн хэсгүүд нь хувиргалт эсвэл трансфекцийн үр дүнд үүсдэг. Пептидийн номын сан дахь фагийн хэсгүүд бүр пептидийн дарааллыг илэрхийлдэг. Тиймээс фагийн дэлгэцийн номын сан бүхэлдээ маш баялаг пептидийн дарааллын номын санг хамарч чаддаг бөгөөд биологийн өргөн хүрээний шинжилгээнд тохиромжтой.
T7 фагийн дэлгэцийн номын сангийн үзлэгийн алхамууд
Номын сангийн барилгын ажил
Пептидийн номын сангийн генийн дарааллыг химийн синтез эсвэл синтетик генийн синтезийн технологиор бүтээсэн. Пептидийн дараалал бүр нь санамсаргүй байдлаар кодлогдсон олигонуклеотидуудаас бүрддэг бөгөөд энэ нь пептидийн номын санг сая сая эсвэл бүр тэрбум тэрбум өөр пептидийн дараалал үүсгэх боломжийг олгодог. Эдгээр пептидийн дарааллыг T7 фагийн геномд клончилж, фагийн капсидын уурагтай нэгтгэн олон төрлийн фагийн дэлгэцийн номын санг байгуулсан. Энэхүү номын сан нь фагийн дэлгэцийн скрининг болон өндөр хүчин чадлын скринингийг дэмжих чадвартай.
Бай молекулуудыг скрининг хийх
Фагийн дэлгэцийн скрининг процессын үеэр T7 фагийн дэлгэцийн номын сан нь зорилтот молекулуудтай (жишээлбэл, эсрэгбие, рецептор эсвэл жижиг молекултай эмүүд) холбоотой пептидийн номын сангийн скрининг хийдэг. Өндөр хүчин чадалтай скринингээр сайжруулсан энэ процесс нь ихэвчлэн хатуу фазын тээвэрлэгч (жишээлбэл, соронзон бөмбөлгүүд эсвэл микроплантууд) дээрх зорилтот молекулуудыг хөдөлгөөнгүй болгохыг шаарддаг. Дараа нь фагийн дэлгэцийн номын сан дахь фагуудыг зорилтот молекулуудтай хамт инкубацалдаг. Зөвхөн зорилтот молекултай тусгайлан холбогдож чаддаг фагууд л амьд үлдэж чаддаг бөгөөд энэ нь фагийн дэлгэцийн скрининг болон өндөр хүчин чадалтай скринингийн нарийвчлалыг баттай баталгаажуулдаг. Үүний дараа зорилтот молекултай холбогдоогүй фагуудыг угаах алхмуудаар арилгасан.
Бай молекулуудыг скрининг хийх явцад T7 фагийн дэлгэцийн скрининг хийх арга нь өндөр өвөрмөц чанартай пептидүүдийг тодорхойлохын тулд хамаарлын суурьтай пептидийн номын сангийн скрининг ашиглахад голчлон анхаардаг. Энэ процесст бай молекулыг бэхлээд, өндөр нэвтрүүлэх чадвартай скрининг хийх аргыг ашиглан Т7 фагийг бай молекултай хамт инкубацлах бөгөөд зөвхөн хүчтэй холболттой фагуудыг скрининг хийдэг.