VHH эсрэгбие нь тэмээний амьтдын сийвэн дэх байгалийн алга болсон гэрлийн гинжин хэлхээ (VL) эсрэгбие юм. VHH эсрэгбиеийн бүтэц нь энгийн бөгөөд зөвхөн хоёр хүнд гинжнээс (VH) бүрдэнэ. Нанободи нь ойролцоогоор 15 кДа молекул жинтэй хүнд гинжин хувьсах бүс (VHH)-ээс бүрдэнэ. VHH эсрэгбие нь антигенийг таних хэвийн чадвартай бөгөөд маш сайн хамааралтай, маш сайн өвөрмөц чанар, маш сайн тогтвортой байдал, маш сайн нэвтрэлтийг харуулдаг. Түүнээс хойш бүтцийн эсрэгбие нь альпака, акул зэрэг бусад амьтдад илэрсэн. VL домэйнгүй хэдий ч зөвхөн нэг хүнд гинжин хувьсах бүс, хоёр уламжлалт CH2 ба CH3 бүс агуулсан нанободи нь маш тогтвортой дан домэйн эсрэгбие бөгөөд эсрэгбиеийн идэвхжилтэй хамгийн бага мэдэгдэж буй холбох нэгж юм. Alpha Lifetech нь үйлчлүүлэгчдэд нанободи бэлтгэх, нанободи номын сан байгуулах, скрининг хийх, VHH нанободи илэрхийлэл, мөн нанободи синтез болон фагийн дэлгэцийн хөгжүүлэлтийн платформоор дамжуулан олон төрлийн фагийн эсрэгбиеийн номын санг багтаасан үр дүнтэй бүтээх, скрининг хийх боломжтой бөгөөд үйлчлүүлэгчдэдээ эсрэгбиеийн шийдлийн өвөрмөц, өндөр өвөрмөц чанарыг өгдөг. Бид мөн үйлчлүүлэгчдэдээ зориулж мэргэжлийн эсрэгбиеийн хүнжүүлэх стратеги боловсруулж болох бөгөөд үүнийг нано биетүүдэд зориулж хүнжүүлэх боломжтой бөгөөд манай компани бараг хүний ​​эсрэгбиетэй дүйцэхүйц юм.

Нэгдүгээрт, ямар ч өвчингүй альпака нь дархлааны системийг идэвхжүүлж, дархлааны хариу урвал үүсгэдэг бөгөөд эдгээр амьтад нэг домэйнтэй эсрэгбие үүсгэж чаддаг. Дараа нь бид альпака PBMC-ээс ганц В эсийг ялгаж, В эсээс РНХ-г гаргаж аваад кДНХ болгон транскрипц хийсэн. Эцэст нь загвар болгон ашиглаж, зорилтот VHH дарааллыг электрофорезоор шалгасан. Дараа нь бид шалгагдсан VHH эсрэгбиеийн дарааллын дарааллын шинжилгээ хийсэн бөгөөд энэ нь бэлтгэсэн VHH эсрэгбиеийн тогтвортой байдал, хамаарлыг сайжруулж чадна. Үүний зэрэгцээ бид VHH эсрэгбиеийн сайтад чиглэсэн мутагенез ба тогтвортой байдлын скрининг хийж болно. Бид скрининг хийх тодорхой мутаци гэх мэт тусгай аргуудыг нэвтрүүлснээр VHH эсрэгбиеийн мутантуудын илүү өндөр тогтвортой байдлыг олж авах боломжтой. Дараа нь инженер нь үүссэн VHH дарааллыг VHH эсрэгбиеийн илэрхийлэлд тохирох илэрхийлэлийн векторт (плазмид, вирус гэх мэт) оруулсан. Эцэст нь, фагийн дэлгэцийн технологи эсвэл мөөгөнцрийн дэлгэцийн технологийн тусламжтайгаар VHH эсрэгбиеийг эзэн биетийн гадаргуу дээр илэрхийлж, дараа нь бүрсэн эсрэгтөрөгч болон ELISA ашиглан зорилтот эсрэгтөрөгчтэй тусгайлан холбогдож чадах наноэсрэгбиеийг сонгоно. Alpha Lifetech нь мөн сонгосон нано биетүүдийг дараалалд оруулж, баталгаажуулснаар хэрэглэгчдэд хүргэгдсэн нано биетүүдийн дарааллын зөв байдал, үйл ажиллагааны идэвхжилийг баталгаажуулсан.

VHH технологи нь генийн инженерчлэлийн янз бүрийн дэвшлийн давуу талыг ашигладаг бөгөөд ингэснээр зорилтот генийг хэвийн нөхцөлд хооронд нь холбож, дахин зохион байгуулдаг бөгөөд энэ нь янз бүрийн шошго агуулсан бусад технологид өндөр холболтын хэрэгсэл болж чаддаг бөгөөд VHH технологиор үүсгэгдсэн эсрэгбие нь цэвэршүүлэхэд тохиромжтой байдаг. Өндөр хүчин чадалтай скрининг хийх аргыг ашиглан Alpha Lifetech нь үйлчлүүлэгчдэд шаардлагатай тодорхой функцтэй VHH эсрэгбиеийг богино хугацаанд олон тооны эсрэгбиеээс шалгаж чаддаг. Үүний зэрэгцээ, VHH эсрэгбие нь өндөр температур болон бусад уусгагч бодисуудад өртөх үед VHH эсрэгбиеийг хязгааргүй бөгөөд эдийн засгийн хувьд үйлдвэрлэх боломжтой. VHH эсрэгбиеийг генетикийн хувьд өөрчилж, шатлал үүсгэх, шошголох, тодорхой амин хүчлийг өөрчлөх зэрэг бусад хэрэглээг бий болгож болно. VHH эсрэгбие нь микротитр хавтан, электрохимийн биосенсор, хажуугийн урсгалын төхөөрөмж зэрэг уламжлалт эсрэгбие ашигладаг аливаа нийтлэг платформд тохиромжтой. VHH эсрэгбие нь жижиг хэмжээтэй тул холболтын домэйнд илүү нягтралтай байж болох бөгөөд ингэснээр VHH эсрэгбие нь дохиог нэмэгдүүлэх, улмаар илүү өндөр мэдрэмжтэй байх давуу талтай байдаг. Үүний зэрэгцээ, VHH эсрэгбие нь хавдрын оношлогоо, эмчилгээ, үрэвслийн оношлогоо, төв мэдрэлийн системийн өвчнийг эмчлэх болон бусад салбарт маш өргөн хэрэглэгддэг. VHH эсрэгбие нь хоол хүнс, тэжээл дэх микотоксиныг хянах, генетикийн хувьд амархан боловсруулж, маш сайн тогтвортой байдлыг хангахад онцгой ач холбогдолтой юм.

Дархлаажуулалтын процесст бид янз бүрийн дархлаа үүсгэгчийг ашигладаг. Дархлаа үүсгэгчийн шинж чанараас хамааран бид тэдгээрийг байгалийн эсрэгтөрөгч, рекомбинант эсрэгтөрөгч, синтетик эсрэгтөрөгч, жижиг молекулын эсрэгтөрөгч гэж хувааж болно. Байгалийн эсрэгтөрөгчид вирусын дархлаа үүсгэгч орно. Байгалийн дархлаа үүсгэгчийг цэвэршүүлэх үйл явц нь нарийн төвөгтэй бөгөөд энэ нь бусад дархлаа үүсгэгчээс илүү хэцүү бөгөөд цэвэршүүлэх зардал нь бас өндөр байдаг. Вирусын дархлаа үүсгэгчийг вирусын идэвхгүйжүүлсэн бүхэл вакцин, дэд нэгжийн вакцин, вирусын векторын вакцин, мРНХ вакцин гэж хуваадаг. Вирусын идэвхгүйжүүлсэн бүхэл вакцин нь бие махбодийг дархлааны хариу урвал үүсгэхэд өдөөж болох боловч вирусыг бүрэн идэвхгүйжүүлэх шаардлагатай бөгөөд бэлтгэх үйл явц нь илүү төвөгтэй байдаг. Дэд нэгжийн вакцины хувьд бид зөвхөн вирусын гадаргуугийн уургийг эсрэгтөрөгч болгон ашигласан тул энэхүү дархлаа үүсгэгчийн аюулгүй байдал өндөр боловч дархлааны үр нөлөөг сайжруулахын тулд туслах бодис нэмэх шаардлагатай. Генетикийн өөрчлөлт хийсний дараа аденовирус болон лентивирусыг вектор болгон ашиглан вирусын репликаци болон илэрхийлэлээр дархлааны хариу урвалыг өдөөдөг. Дархлааны нөлөө нь үр дүнтэй бөгөөд удаан үргэлжилдэг боловч бэлтгэх үйл явц нь нарийн төвөгтэй тул бид биоаюулгүй байдлыг хатуу хянах шаардлагатай. mRNA-г эсэд шууд импортлох боломжтой тул эсүүд антигенийг илэрхийлж, дархлааны хариу урвал үүсэхийг өдөөж болох боловч энэ үйл явц нь илүү хэцүү тул бид mRNA-ийн тогтвортой байдал, хүргэлтийн үр ашгийг хангахыг шаарддаг. Рекомбинант антигенүүд нь байгалийн антигенээс бүтцийн хувьд ялгаатай боловч өргөн хүрээтэй үйлдвэрлэлийн процесст хамрагдах боломжтой. Жижиг молекулын уургууд буюу полипептидийн антигенийг in vitro синтезийн аргаар бэлтгэж болно. Тэдний бүтцийг хянах боломжтой боловч дизайны хувьд төвөгтэй байж болно. Жижиг молекулын антигенүүд нь ихэвчлэн пептид ба нуклеотид зэрэг жижиг молекулын нэгдлүүд байдаг, учир нь тэдгээр нь өөрсдөө дархлаа үүсгэдэггүй тул тэдгээрийг зөвхөн макромолекулын тээвэрлэгчтэй холбогдсоны дараа дархлаа үүсгэгч болгон ашиглаж болно.

Наноэсрэгбиеийн молекул жин нь маш бага, ихэвчлэн 12-15 кДа орчим байдаг бөгөөд энэ нь уламжлалт IgG эсрэгбиеийн аравны нэгтэй тэнцүү юм. Кристал бүтэц нь ойролцоогоор 2.5 нм диаметртэй, 4.2 нм урттай регби бөмбөг юм. Өвөрмөц молекул бүтэц нь цус-тархины саадаар дамжин эд эсэд сайн нэвтрэх, хагас задралын хугацаа богиносох, бөөрний цэвэрлэгээ өндөр байх боломжийг олгодог. Наноэсрэгбие нь нэмэлт тодорхойлох болон нурууны хэсгүүдээс бүрдэнэ. Нэмэлт нэмэлт шийдвэрийн хэсгүүдэд CDR 1, CDR 2, CDR 3 орно. CDR 3 бүс дэх 3-28 амин хүчлийн уртын хүрээ нь наноэсрэгбиеийн сангийн хадгалах багтаамжийг хангадаг. Уламжлалт эсрэгбие CDR 3 бүстэй харьцуулахад ердөө 8-15 амин хүчлээс бүрдэх CDR 3 бүсийн зарим нь антигений гадаргуу дээрх далд эпитопуудыг тодорхойлоход тусалсан. Нано биетүүдийн гол хэсэг нь FR 1, FR 2, FR 3, FR 4-ийг агуулдаг бөгөөд FR 2 дээр дөрвөн гидрофилийн амин хүчлийн мутаци байдаг бөгөөд энэхүү мутаци нь эсрэгбиеийн усанд уусах чадварыг нэмэгдүүлдэг. CDR 1 ба CDR 3-ын хоорондох тусгай дисульфидын холбоо нь өндөр даралт, өндөр температур, денатураци болон бусад нөхцөлд эсрэгбиеийн тогтвортой байдлыг нэмэгдүүлдэг бөгөөд энэ нь нано биетүүдийг үйлдвэрлэх, хадгалахад таатай бөгөөд мөн шинээр хэрэглэх аргуудыг ашиглах боломжийг бий болгодог.