VHH эсрэгбие нь тэмээний амьтдын ийлдэсээс олддог байгалийн дутагдалтай гэрлийн гинжин (VL) эсрэгбие юм. VHH-ийн эсрэгбиеийн бүтэц нь энгийн бөгөөд зөвхөн хоёр хүнд гинжээс (VH) бүрдэнэ. Нанободиуд нь 15 кДа орчим молекул жинтэй хүнд гинжин хувьсах бүсээс (VHH) бүрддэг. VHH эсрэгбие нь эсрэгтөрөгчийг таних хэвийн чадвартай бөгөөд маш сайн холбоотой, маш сайн өвөрмөц чанар, маш сайн тогтвортой байдал, маш сайн нэвтрэлтийг харуулдаг. Бүтцийн эсрэгбие нь альпака, акул зэрэг бусад амьтдаас олдсон. Зөвхөн нэг хүнд гинжин хэлхээний хувьсах бүс, ердийн CH2 ба CH3 бүсийг агуулсан нанободиуд нь VL домэйнгүй ч өндөр тогтвортой нэг домэйн эсрэгбие бөгөөд эсрэгбиеийн идэвхжилтэй хамгийн бага мэдэгдэж буй холбох нэгж юм. Alpha Lifetech нь нано биений нийлэгжилт, фагийн дэлгэцийн хөгжүүлэлтийн платформоор дамжуулан нано биеийг бэлтгэх, нано хүний ​​номын сангийн барилга угсралт, скрининг, VHH nanobody илэрхийлэл, олон төрлийн үйлчилгээг хэрэглэгчдэд үзүүлж, олон төрлийн фагийн эсрэгбиеийн номын сангуудыг үр дүнтэй бүтээж, дэлгэцэн дээр гаргаж, үйлчлүүлэгчдэдээ өвөрмөц, өндөр өвөрмөц эсрэгбиеийн шийдлээр хангадаг. Мөн бид үйлчлүүлэгчдэдээ зориулж мэргэжлийн эсрэгбиеийг хүмүүнжүүлэх стратеги боловсруулж болох бөгөөд үүнийг нанбодитуудад хүнжүүлэх боломжтой бөгөөд манай компани хүний ​​эсрэгбиемтэй бараг дүйцэхүйц юм.

Нэгдүгээрт, ямар ч өвчингүй альпака нь дархлааны хариу урвалыг бий болгохын тулд дархлааны системээ өдөөх боломжийг олгодог бөгөөд эдгээр амьтад нэг домайн эсрэгбие үүсгэж чаддаг. Дараа нь бид alpaca PBMC-ээс нэг В эсийг тусгаарлаж, В эсээс РНХ-г гаргаж аваад cDNA-д шилжүүлэв. Эцэст нь загвар болгон ашиглаж, бидний зорилтот VHH дарааллыг электрофорезоор шалгасан. Дараа нь бид скрининг хийсэн VHH эсрэгбиеийн дарааллын дарааллын шинжилгээг хийсэн бөгөөд энэ нь бэлтгэсэн VHH эсрэгбиеийн тогтвортой байдал, ойр дотно байдлыг сайжруулж чадна. Үүний зэрэгцээ бид сайт руу чиглэсэн мутагенез, VHH эсрэгбиеийн тогтвортой байдлын скрининг хийх боломжтой. Бид скрининг хийх тодорхой мутаци гэх мэт тусгай аргуудыг нэвтрүүлснээр VHH эсрэгбиеийн мутантуудын илүү тогтвортой байдлыг олж авах боломжтой. Дараа нь инженер VHH эсрэгбиеийн илэрхийлэлд зориулж үүссэн VHH дарааллыг тохирох экспрессийн векторт (плазмид, вирус гэх мэт) оруулав. Эцэст нь фагийн дэлгэцийн технологи эсвэл мөөгөнцрийн дэлгэцийн технологиор дамжуулан VHH эсрэгбиемүүдийг эзэн гадаргуу дээр илэрхийлж, дараа нь бүрсэн антиген болон ELISA ашиглан зорилтот эсрэгтөрөгчийг тусгайлан холбож чадах наноэсрэгбиемүүдийг сонгоно. Alpha Lifetech нь сонгосон нано биетүүдийг дарааллаар нь шалгаж, хэрэглэгчдэд хүргэх нано биетүүдийн дарааллын зөв, үйл ажиллагааны ажиллагааг баталгаажуулсан.

VHH технологи нь генийн инженерчлэлийн янз бүрийн дэвшлийн давуу талыг ашигладаг бөгөөд ингэснээр зорилтот генийг ердийн нөхцөлд дахин хуулбарлаж, хамтад нь зохион байгуулдаг бөгөөд энэ нь бусад технологид маш их холбох хэрэгсэл болж чаддаг, янз бүрийн шошго агуулж чаддаг, VHH технологиор үйлдвэрлэсэн эсрэгбие нь цэвэршүүлэхэд тохиромжтой. Alpha Lifetech нь өндөр үр дүнтэй скринингийн арга техникийг ашиглан богино хугацаанд олон тооны эсрэгбиемүүдээс үйлчлүүлэгчдэд шаардлагатай тусгай функц бүхий VHH эсрэгбиемүүдийг илрүүлж чаддаг. Үүний зэрэгцээ, VHH эсрэгбие нь өндөр температур болон бусад уусгагчид өртөх үед VHH эсрэгбие нь хязгааргүй бөгөөд эдийн засгийн хувьд үйлдвэрлэгдэж болно. VHH-ийн эсрэгбие нь генийн хувьд өөр өөр хэрэглээг бий болгох, тухайлбал, шат, шошго, тодорхой амин хүчлийг өөрчлөх боломжтой. VHH эсрэгбие нь микротитр хавтан, цахилгаан химийн биосенсор, хажуугийн урсгалын төхөөрөмж гэх мэт ердийн эсрэгбиемүүдийг ашигладаг аливаа нийтлэг платформд тохиромжтой. VHH эсрэгбие нь жижиг хэмжээтэй тул холбогч бүсэд илүү нягтралтай байдаг тул VHH эсрэгбие нь дохиог нэмэгдүүлэхэд онцгой давуу талтай тул илүү өндөр мэдрэмжтэй байдаг. Үүний зэрэгцээ, VHH эсрэгбие нь хавдрын оношлогоо, эмчилгээ, үрэвслийг оношлох, төв мэдрэлийн тогтолцооны өвчний эмчилгээ болон бусад салбарт маш өргөн хэрэглэгддэг. VHH эсрэгбие нь хоол хүнс, тэжээл дэх микотоксиныг хянахад онцгой ач холбогдолтой байдаг, учир нь тэдгээр нь генетикийн хувьд амархан боловсруулагддаг бөгөөд маш сайн тогтвортой байдаг.

Дархлаажуулалтын явцад бид янз бүрийн иммуногенийг хэрэглэдэг. Иммуногенийн шинж чанарын дагуу бид тэдгээрийг байгалийн антиген, рекомбинант антиген, синтетик антиген, жижиг молекулын эсрэгтөрөгч болгон хувааж болно. Байгалийн эсрэгтөрөгч нь вирусын иммуногенийг агуулдаг. Байгалийн иммуногенийг цэвэршүүлэх үйл явц нь төвөгтэй бөгөөд энэ нь бусад иммуногенээс илүү хэцүү бөгөөд цэвэршүүлэх зардал нь бас өндөр байдаг. Вирусын иммуногенийг бүхэлд нь вирус идэвхгүйжүүлсэн вакцин, дэд нэгж вакцин, вирусын вектор вакцин, мРНХ вакцин гэж хуваадаг. Вирус идэвхгүйжүүлсэн вакциныг бүхэлд нь дархлааны хариу урвалыг бий болгохын тулд бие махбодийг өдөөж болох боловч вирусыг бүрэн идэвхгүй болгох шаардлагатай бөгөөд бэлтгэл үйл явц нь илүү төвөгтэй байдаг. Дэд нэгж вакцины хувьд бид зөвхөн вирусын гадаргуугийн уургийг эсрэгтөрөгч болгон ашигласан тул энэ иммуногенийн аюулгүй байдал өндөр байдаг ч дархлааны нөлөөг сайжруулахын тулд туслах бодисыг нэмэх шаардлагатай. Генетикийн өөрчлөлтийн дараа аденовирус ба лентивирусыг вирусын хуулбар, экспрессээр дамжуулан дархлааны хариу урвалыг өдөөх вектор болгон ашигладаг. Дархлааны үр нөлөө нь үр дүнтэй бөгөөд удаан үргэлжлэх боловч бэлтгэлийн үйл явц нь нарийн төвөгтэй байдаг тул био аюулгүй байдлыг хатуу хянах хэрэгтэй. Хэдийгээр мРНХ нь эсэд шууд импортолж, эсүүд эсрэгтөрөгчийг илэрхийлж, дархлааны хариу урвал үүсэхийг өдөөж чаддаг ч энэ үйл явц нь илүү хэцүү байдаг тул мРНХ-ийн тогтвортой байдал, хүргэх үр ашгийг баталгаажуулахыг шаарддаг. Хэдийгээр рекомбинант эсрэгтөрөгч нь байгалийн эсрэгтөрөгчөөс хэлбэр дүрсээрээ ялгаатай боловч үйлдвэрлэлийн өргөн цар хүрээтэй үйлдвэрлэлд хамрагдах боломжтой. Жижиг молекулын уураг эсвэл полипептидийн эсрэгтөрөгчийг in vitro синтезийн аргаар бэлтгэж болно. Тэдний бүтцийг хянах боломжтой боловч дизайны хувьд төвөгтэй байж болно. Жижиг молекулын эсрэгтөрөгч нь ихэвчлэн пептид, нуклеотид зэрэг жижиг молекулын нэгдлүүд байдаг, учир нь тэдгээр нь өөрөө дархлаа үүсгэдэггүй тул зөвхөн макромолекулын тээвэрлэгчтэй холбогдсоны дараа л иммуноген болгон ашиглаж болно.

Наноэсрэгбиеийн молекул жин нь маш бага, ихэвчлэн 12-15 кДа орчим байдаг нь уламжлалт IgG эсрэгбиеийн аравны нэгийг л эзэлдэг. Кристал бүтэц нь 2.5нм диаметртэй, 4.2нм урттай регби бөмбөг юм. Өвөрмөц молекулын бүтэц нь цус-тархины саадыг дамжин эдэд сайн нэвтэрч, хагас задралын хугацааг богиносгож, бөөрний цэвэршилтийг нэмэгдүүлэх боломжийг олгодог. Наноэсрэгбие нь нэмэлт тодорхойлогч болон нурууны хэсгүүдээс бүрдэнэ. Нэмэлт шийдвэр гаргах бүсүүдэд CDR 1, CDR 2, CDR 3 орно. CDR 3 бүс дэх 3-аас 28 амин хүчлийн урт нь наноэсрэгбиеийн номын сангийн хадгалах багтаамжийг баталгаажуулдаг. Ердөө 8-15 амин хүчлээс бүрддэг уламжлалт эсрэгбиеийн CDR 3 бүстэй харьцуулахад урт CDR 3 бүхий CDR 3 бүсүүдийн зарим нь эсрэгтөрөгчийн гадаргуу дээрх далд эпитопуудыг тодорхойлоход тусалсан. Нанободитуудын нурууны бүсэд FR 1, FR 2, FR 3, FR 4 гэсэн дөрвөн гидрофилик амин хүчлийн мутаци FR 2 байдаг ба энэхүү мутаци нь эсрэгбиеийн усанд уусах чадварыг нэмэгдүүлдэг. CDR 1 ба CDR 3-ын хоорондох тусгай дисульфидын холбоо нь өндөр даралт, өндөр температур, денатурат болон бусад нөхцөлд эсрэгбиеийн тогтвортой байдлыг сайжруулж, нанободитыг үйлдвэрлэх, хадгалахад тустай бөгөөд шинэ удирдлагын аргуудыг бий болгодог.