Мөөгөнцрийн гадаргуугийн дэлгэцийн номын сангийн скрининг үйлчилгээ

Манай мөөгөнцрийн дэлгэцийн сангууд нь том багтаамжтай, олон талт шинж чанартай байдаг нь тодорхой эсрэгбиеийн дарааллыг үр дүнтэй илрүүлэх өндөр үндэс суурь болдог.

БИДЭНД ХОЛБОО БАРИХ

Мөөгөнцрийн гадаргуугийн дэлгэцийн номын сангийн скрининг үйлчилгээ

Alpha Lifetech нь мөөгөнцрийн дэлгэцийн номын сан байгуулах, эсрэгбиеийн сангуудыг скрининг хийх чиглэлээр мэргэшсэн бөгөөд дэлхийн өнцөг булан бүрт байгаа үйлчлүүлэгчдэд янз бүрийн хэлбэрийн мөөгөнцрийн санг үүсгэж, тэдгээрийг өндөр нягтралтай, өвөрмөц эсрэгбие илрүүлэх боломжийг олгодог. Мэргэшсэн судлаачдын баг, дэвшилтэт технологи, тоног төхөөрөмжийн тусламжтайгаар бид өвчинтэй холбоотой олон төрлийн уураг агуулсан мөөгөнцрийн сангуудыг байгуулж чадна. Бид уураг мөөгөнцрийн дэлгэц, жижиг молекул мөөгөнцрийн дэлгэц, эсрэгбиеийн мөөгөнцрийн дэлгэц гэх мэт фагийн дэлгэц, мөөгөнцрийн дэлгэцийн технологиор хангаж чадна.

Манай мөөгөнцрийн дэлгэцийн сангууд нь том багтаамжтай, олон талт шинж чанартай байдаг нь тодорхой эсрэгбиеийн дарааллыг үр дүнтэй илрүүлэх өндөр үндэс суурь болдог. Бид таны хэрэгцээнд нийцүүлэн эсрэгбие мөөгөнцрийн дэлгэцийн сан (IgG, scFv, VHH, Fab эсрэгбиеийн сангууд), уургийн сан, пептидийн сан, cDNA номын сан гэх мэт янз бүрийн хэлбэрийг барьж болно. Нэмж дурдахад бид дархлааны сангууд, байгалийн сангууд, синтетик сангууд, хагас синтетик сангууд, өвчний эсрэгбиеийн сангууд зэрэг янз бүрийн шинж чанартай эсрэгбиеийн сангуудыг хөгжүүлж чадна.

Мөөгөнцрийн дэлгэцийн системийн танилцуулга

Мөөгөнцрийн гадаргуугийн дэлгэцийн технологи нь генийг нэгтгэх замаар мөөгөнцрийн гадаргуу дээр рекомбинант уураг харуулах арга юм. Хамгийн түгээмэл мөөгөнцрийн дэлгэцийн систем нь альфа лектин хосолсон уургийн Aga2p дэд нэгжийн C-төгсгөлд нийлсэн зорилтот уургийг ашигладаг бөгөөд гол төлөв зорилтот уургийн хоёр талд байрлах эпитопын шошготой: N-терминал 9-амин хүчлийн гемагглютинин (HA) шошго ба C-терминус 10c амин хүчил. 69 амин хүчлийн Aga2p дэд хэсэг нь 725 амин хүчлийн альфа лектин Aga1p дэд нэгжтэй хоёр дисульфидын холбоогоор холбогддог ба Aga1p нь β 1,6-глюкан ковалент холбоогоор эсийн хананд бэхлэгддэг. Тиймээс зорилтот уураг нь мөөгөнцрийн эсийн гадаргуу дээр гарч, дараа нь холбогдох лигандаар таньдаг. Урсгалын цитометрийн скрининг хийх замаар функциональ уурагуудыг сангаас салгах.

Зураг 1: Мөөгөнцрийн гадаргууг харуулах зарчим. (Зургийн эх сурвалж: Уургийн инженерчлэлд зориулсан мөөгөнцрийн гадаргуугийн дэлгэцийн хэрэглээ.)

Мөөгөнцрийн гадаргуугийн дэлгэцийн номын сангийн танилцуулга

Мөөгөнцрийн дэлгэцийн ангилах нь мөөгөнцрийн гадаргуугийн дэлгэц дээр суурилдаг бөгөөд голчлон эсийн гадаргуугийн уураг руу чиглэсэн эсрэгбиеийн сангуудыг скрининг хийхэд ашигладаг. Мөөгөнцрийн эсүүд болон бусад эсийн гадаргуугийн хооронд өвөрмөц бус холболт бага байдаг тул мөөгөнцрийн биологийн сонголт нь ховор клонуудыг олохын тулд том хэмжээний холбоосын сангуудыг шүүж чаддаг.

Мөөгөнцрийн гадаргуугийн дэлгэцийн номын сангийн скрининг үйлчилгээ

Плазмид ба мөөгөнцрийн эсүүдийг бэлдэж, зорилтот уургийг кодлодог ДНХ-ийг нэгтгэж, индукцтай дэмжигчид, дохионы пептидүүд болон гадаргуугийн дэлгэцийн уурагтай (Aga2p гэх мэт) нийлсэн зорилтот генийг агуулсан мөөгөнцрийн экспрессийн вектор болгон хувилна. Зорилтот уургийг кодлодог генийг мөөгөнцрийн эсийн ханын уураг (ихэвчлэн Aga2p) кодлодог гентэй нэгтгэж, нийлсэн генийг электропорацийн аргаар мөөгөнцрийн эс болгон хувиргаж болно. Өөрчлөлтийн дараа гадаргуу дээр эсрэгбиеийн генийг илэрхийлдэг мөөгөнцрийн эсүүд нь эсрэгтөрөгчийн тусгай скрининг шинжилгээнд хамрагдах боломжтой: мөөгөнцрийн санг зорилтот антигенээр өсгөвөрлөж, түүнтэй тусгайлан холбогддог мөөгөнцрийн эсүүдийг сонгоно. Хүссэн шинж чанар бүхий уураг агуулсан мөөгөнцрийн эсийг тусгаарлахын тулд флюресцент идэвхжүүлсэн эсийн ангилах (FACS) ашиглан мөөгөнцрийн дэлгэцийн номын сангийн скринингийг хамгийн ихдээ ~10 ^ 8-10 ^ 9 мөөгөнцрийн эсийн хэмжээтэй хийж болно. Эерэг клонуудыг дараа нь цаашдын шинжилгээ эсвэл доод урсгалын хэрэглээнд зориулж тусгаарлаж болно. Эсрэгбиеийн номын сангаас тодорхой эсрэгбиеийн клонуудыг тодорхойлсны дараа тэдгээрийг цаашид шинжилж, бөөнөөр нь үйлдвэрлэж, мөөгөнцрийн дэлгэцийн скрининг болон эсрэгбие үйлдвэрлэх процессыг бүхэлд нь дуусгахын тулд уураг A/G-ийн харгалзах хроматографи гэх мэт аргуудыг ашиглан цэвэршүүлж болно.

Мөөгөнцрийн дэлгэцийн номын сангийн скрининг хийх үйл явц

Зураг.2 Мөөгөнцрийн дэлгэцийн номын сангийн скрининг хийх үйл явц

Мөөгөнцрийн дэлгэцийн номын сангийн скрининг үйлчилгээний ажлын урсгал

Алхам	Үйлчилгээний агуулга	Он цагийн хэлхээс
Антиген бэлтгэх	Антигенийн төрөл: Үйлчлүүлэгч антиген өгөх боломжтой бол төрлөөр нь харгалзах дээжийг авах шаардлагатай: рекомбинант уураг нь 85%-иас дээш цэвэршилттэй 3-3.5 мг, жижиг молекулууд 90%-иас дээш цэвэршилттэй байх шаардлагатай, пептидийн нийлэгжилтийн хувьд 90%-иас дээш цэвэршилттэй байх шаардлагатай. идэвхгүй болсон тохиолдолд задралаас урьдчилан сэргийлэхийн тулд РНХ-г шалгах шаардлагатай бөгөөд дээрх антиген төрлүүдийг нийлэгжүүлэхэд тохируулж болно.	2-3 долоо хоног
Амьтны дархлаа	Малын дархлаажуулалтын тоо 5, цусны сийвэнгийн титрийн шинжилгээнд үндэслэн дархлаажуулалтын тоог нэмэгдүүлэх эсэхийг тогтоох шаардлагатай. Антигений дархлаа: уураг/вирусын эсрэгтөрөгчийн хүч>105; Пептид/жижиг молекулын эсрэгтөрөгчийн хүч>10^4	5-6 долоо хоног
Загвар cDNA бэлтгэх	Плазмын PBMC-ийг салгаж, нийт РНХ-г (РНХ олборлох хэрэгсэл) гаргаж аваад cDNA-д шилжүүлнэ.	1 өдөр
Номын сангийн барилга	Номын сангийн cDNA-г загвар болгон ашигласнаар VHH генийг хоёр удаагийн ПГУ-аар олшруулж, VHH генийг залгах мөөгөнцрийн дэлгэцийн векторыг бүтээв. Эсрэгбиеийн сан байгуулахын тулд векторыг электропорацийн аргаар мөөгөнцрийн эс болгон хувиргасан. 48 клоныг санамсаргүй байдлаар сонгож, ПГУ-ын аргыг ашиглан эерэг хувийг (>90%) тодорхойлох; Номын сангийн багтаамж (10^7-10^8), NGS дараалал, номын сангийн зөв оруулах хувь (>90%) болон номын сангийн олон янз байдлыг тодорхойлох.	2 долоо хоног
Номын сангийн скрининг	Өгөгдмөл гурван үе шат: Флюресценцийн шошготой уургийн FACS скрининг, дараа нь гурав дахь шатанд NGS дараалал. Эерэг клонуудыг нэг грамм индукцийн илэрхийлэл болон ELISA илрүүлэх зорилгоор сонгосон. Бүх эерэг клонуудыг генийн дараалалд сонгосон ба өөр CDR бүсийн дарааллыг сонгосон.	2-3 долоо хоног
Эсрэгбиеийн баталгаажуулалт	Эсрэгбиеийн дараалалд тохирох экспрессийн векторуудыг бий болгосноор эсрэгбиеийн илэрхийлэл, эсрэгбие цэвэршүүлэх, эсрэгбиеийн эсрэгтөрөгчтэй холбогдож буй ELISA болон BLI баталгаажуулалт, эсрэгбиеийн ойр дотно байдлыг шалгах, урсгалын цитометрийн блокад нь эсийн үйл ажиллагааг баталгаажуулах боломжтой.	1 долоо хоног

Мөөгөнцрийн гадаргуугийн дэлгэцийн номын сангийн скрининг хийх тохиолдол

Мөөгөнцрийн гадаргуугийн дэлгэцийн платформ дээр хэв маягийн сонгомол нано биетүүдийг хурдан илрүүлэхэд зориулагдсан уран зохиолд зохиогчид мөөгөнцрийн гадаргуугийн дэлгэц дээр суурилсан in vitro нано биеийг илрүүлэх бүрэн платформыг байгуулжээ. Нэгдүгээрт, тэмээний генээс эхлээд нийлэг нано биений номын сан зохион бүтээсэн. Зураг D нано бие нь карбоксилын төгсгөлд HA шошготой бөгөөд дараа нь нано бие нь мөөгөнцрийн эсийн хананд ковалент байдлаар бэхлэгдсэн болохыг харуулж байна. Зураг E-д нано хэн нэгнийг шалгах үйл явцыг харуулав. Антигентэй харьцах нанободиуд бүхий мөөгөнцрийг FACS-ээр тусгаарлаж, олшруулж, эсрэгбиемүүдэд дахин дахин сонгосон. Зохиогчид энэ платформоор дамжуулан хүний хоёр өөр GPCR-ийг онилсон конформацийн сонгомол нанободитуудыг илрүүлсэн.