Pengenalan Perkhidmatan Paparan Fag

Paparan fag, sebagai teknik molekul berdasarkan pengubahsuaian genetik DNA fag, telah menjadi alat yang berkuasa secara molekul untuk menghasilkan prob molekul terhadap sasaran tertentu dengan mempersembahkan serpihan ini pada permukaan fag dan dengan itu memilih serpihan peptida/antibodi dengan sifat pengikatan tertentu daripada sebilangan besar varian (perpustakaan).

Alpha Lifetech mempunyai sepuluh tahun pengalaman dalam pembangunan antibodi paparan phage dan boleh menyediakan perkhidmatan pembinaan dan penyaringan perpustakaan antibodi profesional untuk pelanggan kami. Mengikut keperluan pelanggan, kami boleh menyediakan pelbagai bentuk perpustakaan antibodi, seperti perpustakaan imun, perpustakaan asli, perpustakaan sintetik dan perpustakaan separa sintetik. Teknologi perpustakaan paparan phage, yang menggabungkan gen antibodi dengan gen protein salutan phage seperti M13, merupakan teknologi penyediaan antibodi rekombinan yang paling biasa dan digunakan secara meluas dalam pembangunan antibodi yang sangat spesifik.

Alpha Lifetech akan mengimunisasi alpaka, llama, alpaka, dan jerung, dan sebagainya, supaya kecekapannya mencapai 10^5. Kami akan menghantar laporan ujian kecekapan kepada pelanggan untuk memastikan kesahihan dan keaslian data. Perpustakaan natif mempunyai kelebihan ketoksikan rendah dan imunogenisiti rendah. Alpha Lifetech mempunyai sebilangan besar perpustakaan antibodi natif siap pakai, yang boleh digunakan secara langsung untuk saringan antibodi tanpa imunisasi haiwan, sekali gus memendekkan masa projek, memajukan kemajuan percubaan pelanggan, dan menjamin integriti fungsi antibodi.

Rajah 1: Prinsip paparan faj

Sistem Paparan Fag Kami

Maklumat utama sistem paparan phage M13/T4/T7 ditunjukkan dalam Jadual 1.

Jadual 1 Kenderaan paparan phage yang berbeza dan ciri-cirinya
	M13	T4	T7
Saiz Genom	6407 bp	168895 bp	39937 bp
Paparkan Protein	pVI, pIII dan pVIII	SOC dan HOC	gp10B
Saiz Paparan	>110 kDa ialah pIII
Saiz Paparan
Ketumpatan Paparan
Ketumpatan Paparan
Kitaran Hayat	Lisogeni	Litik	Litik

Alpha Lfetech Boleh Menyediakan

Paparan Fag menyatukan genotip dan fenotip menjadi satu, menggabungkan selektiviti dan amplifikasi dengan keupayaan penyaringan yang berkuasa. Alpha Lifetech boleh menyediakan pelbagai perkhidmatan untuk pembangunan antibodi paparan fag.
Perkhidmatan utama termasuk: platform perpustakaan antibodi VHH, platform perpustakaan antibodi scFv, platform perpustakaan antibodi Fab, platform pembinaan perpustakaan phage, platform saringan perpustakaan phage dan perkhidmatan humanisasi antibodi serta perkhidmatan lain.

Rajah 2：Proses perkhidmatan pembangunan paparan Faj

Proses Pembangunan Antibodi Paparan Faj

Kami boleh mengimunisasi haiwan dengan protein yang diekspresikan di makmal kami atau dibekalkan oleh pelanggan kami, termasuk pelbagai protein makromolekul, peptida dan protein membran. Melalui ujian kecekapan ELISA, penyelidik kami menjalankan pengasingan PBMC dan pengekstrakan RNA daripada darah alpaka dengan hasil imunisasi terbaik. Melalui transkripsi songsang dan amplifikasi gen, kami membina gen pada vektor fag pMESC, pComb3XSS atau pCANTAB 5E. Melalui elektrotransformasi sel kompeten TG1 E. coli, perpustakaan antibodi fag dengan kapasiti perpustakaan lebih besar daripada 10^9 boleh diperolehi. Perpustakaan antibodi dengan kapasiti perpustakaan yang besar mempunyai kepelbagaian yang baik dan membantu mencari antibodi yang mempunyai afiniti. Untuk memastikan kualiti perpustakaan antibodi, kami akan mencirikan kapasiti perpustakaan dan kadar penyisipan perpustakaan. Kami akhirnya akan menjujukan perpustakaan untuk menyediakan pelanggan kami dengan 30-50 jujukan yang diperlukan. Kemudian, kami menjalankan saringan pustaka paparan fag. Pertama, antigen diimobilisasi pada mikroplat polipropilena, dan melalui 3-5 pusingan saringan, antibodi fag dengan keupayaan pengikatan yang lemah akan dikeluarkan, dan klon khusus yang mengikat pada antigen dikekalkan. Untuk paparan fag, kaedah ELISA digunakan untuk menghasilkan klon positif, manakala untuk paparan yis, kaedah FACS digunakan untuk membuat sel memaparkan serpihan antibodi rekombinan menggunakan antigen berlabel. Melalui saringan, kami menyediakan antibodi dengan sensitiviti, spesifisiti dan afiniti yang tinggi.

Rajah 3 Proses sintesis antibodi paparan faj

KELEBIHAN Perkhidmatan
Kelebihan PERKHIDMATAN

Alpha Lifetech amat komited terhadap teknologi paparan phage dan dapat menyediakan perkhidmatan phage yang lebih luas dan lebih baik kepada pelanggan.

Tempoh masa dan kecekapan tinggi

Syarikat kami boleh mencari antibodi yang memuaskan dalam masa yang singkat; kami boleh menjalankan pelbagai eksperimen saringan antibodi mengikut keperluan pelanggan.

Kualiti produk yang tinggi

Syarikat kami membantu pelanggan menyediakan antibodi dengan kekhususan dan kestabilan yang tinggi, sekali gus meningkatkan output hasil penyelidikan saintifik.

Menyediakan pelbagai pilihan

Syarikat kami boleh membina perpustakaan antibodi berbilang spesies (manusia, tikus, arnab, alpaka, dll.) dan boleh membina pelbagai jenis (scfv, Fab, VHH, dll.) perpustakaan antibodi.

Kapasiti Besar

Perpustakaan antibodi kami mempunyai kapasiti besar lebih daripada 10^9 antibodi

Soalan Lazim - Masalah umum paparan phage

Soalan paparan phage ◢

S.
Apakah teknologi paparan phage?

A.
Teknologi paparan fag adalah untuk memasukkan gen sasaran asing ke dalam kedudukan spesifik protein kapsid fag, dan mengekspresikan gen asing pada permukaan fag tanpa menjejaskan fungsi normal fag. Selepas beberapa pusingan saringan, protein sasaran dengan kekhususan yang kuat dan aktiviti biologi yang tinggi akhirnya diperoleh.
S.
Apakah kelebihan teknologi paparan phage?

A.
Pustaka antibodi berkapasiti tinggi boleh dijana menggunakan teknologi ini. Kitaran saringan adalah ringkas, proses operasi adalah mudah, dan julat aplikasi adalah luas, membolehkan pengenalpastian urutan optimum untuk peptida atau protein yang disasarkan. Dalam aplikasi berkaitan virus, penyelidik boleh menemui antibodi yang mengikat epitop virus kritikal dengan menyaring pustaka antibodi yang besar. Proses ini boleh menghalang kemasukan, replikasi atau mekanisme pengelakan imun virus, sekali gus mewujudkan asas untuk rawatan penyakit.
S.
Apakah perbezaan antara teknologi hibridoma dan teknologi fag?

A.
Teknologi paparan fag lebih banyak digunakan berbanding teknologi hibridoma, yang terhad kepada menghasilkan sejumlah kecil antibodi terhadap imunogen tertentu. Sebaliknya, teknologi paparan fag boleh mempersembahkan keseluruhan perpustakaan antibodi yang berasal daripada pelbagai spesies imun.
S.
Apakah aplikasi teknologi paparan phage?

A.
Teknologi paparan fag mempunyai pelbagai aplikasi, termasuk menyaring reseptor mikroorganisma patogen, mengkaji interaksi protein, menjejaki penghantaran isyarat antara sel, mendiagnosis penyakit haiwan dan membangunkan vaksin, antara bidang lain.
S.
Prospek teknologi paparan phage?

A.
Teknologi paparan fag menawarkan pelbagai kelebihan dan boleh diaplikasikan merentasi pelbagai bidang. Walau bagaimanapun, cabaran utama dalam membangunkan antibodi rekombinan menggunakan kaedah paparan fag ialah kerumitan dan kos yang berkaitan dengan proses tersebut. Pendekatan ini memerlukan penyepaduan teknik biologi molekul, termasuk mutasi, pengklonan dan ekspresi, berserta analisis imunologi, biokimia dan biofizik untuk mengenal pasti dan mencirikan antibodi yang dikehendaki.

Soalan Berkaitan Antigen ◢

S.
Apakah kaedah pembentangan antigen?

A.
Pembentangan antigen merupakan satu penghubung yang sangat penting. Kaedah pembentangan antigen terutamanya merangkumi pembentangan antigen bersalut langsung, pembentangan antigen bersalut tidak langsung, pembentangan antigen melalui saringan seluruh sel, pembentangan antigen melalui liposom, cakera nano-fosfolipid dan VLP.
S.
Apakah perbezaan antara pelbagai jenis pembentangan antigen?

A.
Kaedah salutan langsung agak mudah, tetapi konformasi antigen mudah diubah, dan operasi salutan tidak langsung rumit, tetapi ia dapat mengekalkan konformasi antigen dan meningkatkan kecekapan pembentangan. Saringan sel dapat mensimulasikan pemandangan sebenar secara in vivo, tetapi terdapat masalah pengikatan tidak spesifik. Cakera nano-fosfolipid mempunyai saiz yang kecil, kecekapan penghantaran yang tinggi dan kestabilan yang baik; VLP digabungkan dengan antigen atau dibalut dengan antigen, yang mempunyai imunogenisiti yang tinggi dan keselamatan yang baik, dan boleh mencetuskan tindak balas imun yang kuat.
S.
Apakah kesan kepekatan antigen terhadap keputusan saringan teknologi paparan phage?

A.
Jika kepekatan terlalu rendah, kemungkinan pengikatan dengan faj akan berkurangan, mengakibatkan kecekapan penyaringan yang berkurangan. Sebaliknya, kepekatan yang terlalu tinggi boleh meningkatkan kebarangkalian pengikatan tidak spesifik, meningkatkan isyarat latar belakang dan menghalang pengenalpastian klon positif.
S.
Bagaimanakah kita dapat memastikan antigen mengekalkan konformasi semula jadinya semasa proses saringan?

A.
Kaedah penetapan ringan boleh digunakan untuk mengelakkan suhu tinggi, asid kuat dan alkali. Kaedah salutan tidak langsung dan sistem biotin-streptavidin telah digunakan untuk mengurangkan kerosakan pada struktur antigen. Jika antigen tersebut merupakan protein membran, ia boleh dipaparkan pada permukaan sel yang utuh atau digunakan untuk mensimulasikan persekitaran membran, seperti nano-cakera, bagi mengekalkan konformasi protein membran semula jadinya.
S.
Bagaimanakah cara untuk mengesahkan kekhususan pengikatan antibodi yang ditapis oleh teknologi paparan phage kepada antigen?

A.
Selain eksperimen rutin seperti ELISA, Western Blotting (WB), dan Immunofluorescence (IF), teknik pengesanan Resonans Plasmon Permukaan (SPR) dan Interferometri Bio-Lapisan (BLI) boleh digunakan untuk memantau proses pengikatan dan penceraian antibodi dan antigen dalam masa nyata, yang membolehkan penentuan parameter afiniti dan kinetik.

Soalan Berkaitan Imun ◢

S.
Apakah tindak balas imun umum haiwan dalam teknologi paparan phage?

A.
Paparan faj boleh digunakan untuk menghasilkan antibodi monoklonal berafiniti tinggi untuk pelbagai spesies penghasil antibodi, termasuk tetapi tidak terhad kepada manusia, tikus, arnab, ayam, unta, alpaka, lembu, anjing, biri-biri, monyet dan jerung.
S.
Apakah ciri-ciri dan senario yang boleh digunakan bagi perpustakaan antibodi yang diperoleh daripada pelbagai spesies haiwan dalam teknologi paparan phage?

A.
Teknologi pembinaan perpustakaan antibodi tikus telah lama wujud, kos efektif, dan mempunyai tempoh eksperimen yang singkat, menjadikannya sesuai untuk saringan antibodi awal dan penyelidikan asas. Antibodi arnab mempamerkan afiniti dan kekhususan yang kuat, dengan julat pengecaman epitop yang lebih luas berbanding antibodi tikus. Antibodi manusia boleh diperoleh secara langsung daripada perpustakaan antibodi manusia, sekali gus mengelakkan potensi reaksi imun yang mungkin berlaku apabila antibodi heterolog diberikan kepada tubuh manusia. Pendekatan ini mempunyai nilai yang ketara dalam penyelidikan dan pembangunan ubat, terutamanya dalam penciptaan antibodi terapeutik.
S.
Apakah imunogen haiwan umum yang digunakan dalam teknologi paparan phage?

A.
Imunogen haiwan secara amnya dibahagikan kepada antigen protein, antigen polipeptida, antigen asid nukleik dan antigen berkaitan patogen, antaranya antigen berkaitan patogen termasuk antigen virus (zarah virus lengkap, protein virus, protein bukan struktur virus, dsb.), antigen bakteria (ekstrak bakteria lengkap, komponen dinding sel, protein yang dirembeskan, toksin, dsb.) dan antigen parasit.
S.
Bagaimanakah kita dapat menangani isu toleransi imun dalam haiwan semasa tindak balas imun?

A.
Laraskan imunogen dengan menggantikan antigen imun dengan protein rekombinan dan menggantikan zarah virus pemadam kebakaran dengan protein struktur virus. Laraskan reka bentuk eksperimen dan ubah suai dos imun.
S.
Bagaimanakah imunogenisiti imunogen dapat ditingkatkan dalam teknologi paparan phage?

A.
Imunogenisiti boleh dipertingkatkan dengan menggabungkan antigen dengan protein pembawa, seperti albumin serum lembu. Selain itu, adjuvan imun, termasuk adjuvan Freund dan adjuvan aluminium, boleh digunakan untuk memanjangkan masa kediaman in vivo dan merangsang pengaktifan dan percambahan sel imun, sekali gus meningkatkan imunogenisiti.

Soalan Pembinaan Perpustakaan ◢

S.
Apakah perpustakaan antibodi faj?

A.
Pustaka antibodi fag ialah koleksi antibodi fag yang pelbagai yang dihasilkan dengan mengumpulkan set lengkap gen rantau berubah-ubah daripada antibodi ke dalam vektor fag dan mengekspresikannya pada permukaan fag. Proses ini menghasilkan pembentukan pustaka antibodi fag.
S.
Proses membina perpustakaan antibodi faj

A.
Proses umum paparan faj melibatkan beberapa langkah utama: mengekstrak sel mononuklear darah periferi (PBMC) daripada haiwan yang diimunisasi, mengasingkan jumlah RNA dan menyalinnya menjadi DNA pelengkap (cDNA), menguatkan gen sasaran menggunakan teknologi tindak balas rantai polimerase (PCR), mengklon gen sasaran menjadi vektor faj dan mengubah vektor menjadi sel perumah untuk ekspresi. Proses ini menghasilkan pembinaan perpustakaan paparan faj yang dapat mengenal pasti antibodi afiniti tinggi dengan cepat. Seterusnya, perpustakaan ini boleh berfungsi sebagai sumber yang berharga untuk pembangunan vaksin, ubat terapeutik dan reagen diagnostik.
S.
Apakah perkara utama dalam membina perpustakaan yang berkualiti tinggi?

A.

Pastikan jumlah keseluruhan PBMC mencukupi. Pastikan kualiti RNA tanpa degradasi.

Untuk memastikan jumlah transforman, kapasiti perpustakaan secara amnya dikehendaki 10 hingga 100 kali ganda kepelbagaian teori.
S.
Apakah klasifikasi perpustakaan antibodi fag?

A.
Mengikut sumber perpustakaan antibodi, perpustakaan antibodi fag boleh dikategorikan kepada perpustakaan antibodi fag imun dan perpustakaan antibodi fag asli. Perbezaan utama antara kedua-dua jenis ini terletak pada sama ada haiwan telah divaksin. Selain itu, perpustakaan antibodi asli boleh dijana melalui separa sintesis atau sintesis.
S.
Bagaimanakah seseorang boleh menilai kualiti pustaka antibodi fag?

A.
Terdapat dua indeks utama untuk menilai kualiti perpustakaan antibodi: kapasiti penyimpanan dan kepelbagaian. Kapasiti penyimpanan yang besar, digabungkan dengan kepelbagaian yang tinggi, memastikan penyaringan antibodi yang berkesan dengan kedua-dua afiniti dan kekhususan yang tinggi.

Soalan Saringan Perpustakaan ◢

S.
Apakah proses penyaringan pustaka antibodi fag?

A.
Dalam proses elutriasi biologi, pustaka paparan diinkubasi dengan sasaran tetap dan kemudian dibasuh secara meluas untuk menyingkirkan fag yang tidak reaktif. Konjugat biasanya dielusi menggunakan larutan berasid atau garam tinggi dan seterusnya dikuatkan dalam sel perumah yang sesuai untuk pengayaan. Selepas 3 hingga 5 pusingan saringan, antibodi dengan afiniti tinggi diperoleh.
S.
Apakah kaedah yang digunakan untuk menyaring pustaka antibodi phage?

A.
Kaedah penyaringan fag terutamanya merangkumi penyaringan fasa pepejal, penyaringan fasa cecair dan penyaringan berasaskan sel. Pemilihan kaedah penyaringan yang sesuai harus mempertimbangkan ciri-ciri molekul sasaran, objektif proses penyaringan dan persekitaran makmal.
S.
Apakah saringan positif dan negatif terhadap fag?

A.
Saringan positif merupakan kaedah paling asas untuk menyaring antibodi faj yang mengikat protein sasaran. Saringan negatif berfungsi untuk menghapuskan antibodi bukan spesifik. Semasa proses saringan antibodi faj, antibodi bukan spesifik mungkin dikenal pasti disebabkan oleh gangguan daripada label antigen sasaran, bahan atau antigen lain yang mempunyai persamaan struktur dengan antigen sasaran. Dalam kes sedemikian, saringan negatif dapat meningkatkan kecekapan proses saringan.
S.
Bagaimana untuk mengelakkan penyaringan antibodi bukan spesifik?

A.

Antigen yang dilabel dengan pelbagai jenis penanda boleh diutamakan untuk pemeriksaan awal, atau pemeriksaan negatif boleh digunakan untuk mengurangkan perkadaran antibodi bukan spesifik.

Anda boleh memilih untuk menggantikan cecair pengedap yang sesuai atau menggunakan cecair pengedap yang berbeza secara bergantian untuk mengelakkan situasi ini. Jika antibodi yang mengenali garisan sel latar belakang (CHO atau HEK293) ditapis, anda boleh menggantikan garisan sel latar belakang yang berbeza untuk tujuan saringan atau saringan negatif.
S.
Bagaimanakah seseorang boleh mengesahkan dan menganalisis antibodi yang diperolehi?

A.
Kaedah untuk pengesahan antibodi biasanya termasuk ELISA, Western Blotting (WB), sitometri aliran, imunopresipitasi (IP), imunofluoresen (IF), imunohistokimia dan pelbagai teknik eksperimen lain. Alpha Lifetech mempunyai pengalaman luas dalam pengesanan antibodi dan mempunyai pasukan eksperimen profesional, yang memastikan keberkesanan antibodi dalam eksperimen berikutnya.

Jika anda mempunyai sebarang pertanyaan, sila hubungi kami pada bila-bila masa.

Leave Your Message

Perkhidmatan Pilihan

Platform Penemuan Antibodi