Pada tahun 1960, konsep antibodi bispesifik telah dicadangkan. Antibodi bispesifik, juga dikenali sebagai antibodi monoklonal bispesifik, ialah antibodi yang disintesis secara buatan menggunakan teknologi kejuruteraan genetik. Sebagai antibodi buatan yang direkayasa, antibodi bispesifik biasanya tergolong dalam subkelas IgG dan mengandungi serpihan pengikatan antigen yang menyasarkan subunit CD3. Antibodi bispesifik mempunyai dua tapak pengikatan antigen khusus yang boleh mengikat dan mengenali dua antigen berbeza secara serentak, atau dua epitop antigen yang berbeza. Berbanding dengan antibodi monoklonal, antibodi bispesifik mempunyai tapak pengikatan antigen khusus tambahan, justeru mempunyai kekhususan dan keupayaan penyasaran yang lebih kuat, yang boleh menyasarkan sel tumor dengan lebih tepat dan mengurangkan ketoksikan di luar sasaran. Antibodi bispesifik boleh melaksanakan pelbagai fungsi biologi secara serentak, seperti merekrut sel imun, menyekat laluan isyarat, dan membunuh sel tumor secara langsung. Antibodi bispesifik awal terutamanya disediakan melalui konjugasi kimia atau gabungan sel, tetapi kaedah ini mungkin telah berkembang perlahan disebabkan oleh kombinasi rawak dan kesukaran dalam mengasingkan kombinasi sasaran. Dengan perkembangan berterusan teknologi kejuruteraan genetik, banyak platform teknologi baharu telah dibangunkan, seperti simpulan dalam lubang (KIH), CrossMab, DVD Ig, dan sebagainya. Platform ini berkesan menyelesaikan masalah seperti ketidakpadanan rantai berat dan rantai ringan, dan meningkatkan keseragaman dan hasil antibodi bispesifik.

Kaedah utama untuk penghasilan antibodi bispesifik termasuk gandingan kimia, hibridoma empat sumber, dan penyediaan antibodi kejuruteraan genetik. Antaranya, kaedah gandingan kimia menggabungkan dua IgG utuh atau dua serpihan antibodi F(ab')2 ke dalam antibodi bispesifik menggunakan agen gandingan kimia seperti ftalimida dan asid ditioasilenzoik. Kaedah ini mudah dan senang dikendalikan, tetapi ia boleh merosakkan tapak pengikatan antigen, mengurangkan aktiviti antibodi, dan agen gandingan itu sendiri juga mempunyai tahap karsinogenisiti tertentu. Kaedah hibridoma empat sumber adalah berdasarkan gabungan sel somatik daripada dua garisan sel hibridoma yang berbeza untuk mengekspresikan IgG tikus yang sepadan. Melalui teknologi kejuruteraan genetik, antibodi boleh diubah suai secara genetik untuk membentuk antibodi bispesifik. Dua antibodi monoklonal yang berbeza telah dibina, dan serpihan Fab atau kawasan pembolehubah rantai berat dan rantai ringan bagi kedua-dua antibodi dibelah secara berasingan. Melalui teknologi tindak balas silang atau penggabungan semula rantai, kedua-dua serpihan digabungkan untuk membentuk antibodi bispesifik. Walaupun kerumitan teknologi kejuruteraan genetik agak tinggi, ia kini merupakan kaedah yang paling biasa digunakan untuk penghasilan antibodi bispesifik untuk melaraskan struktur dan fungsi antibodi. Semasa menjalankan reka bentuk antibodi bispesifik, prinsip kereaktifan silang antibodi boleh digunakan, tetapi kereaktifan silang antibodi boleh menyebabkan tindak balas tidak spesifik, jadi ia akan dipertimbangkan dengan teliti dalam aplikasi praktikal reka bentuk antibodi bispesifik, seperti terapi antibodi bispesifik.

Penulenan antibodi bispesifik ialah proses mengasingkan dan menulenkan antibodi sasaran berketulenan tinggi. Dua kaedah, iaitu sentrifugasi dan penapisan dalam, digunakan untuk membuang beberapa bendasing larut. Antibodi bispesifik sasaran pada mulanya ditangkap melalui kromatografi afiniti. Untuk antibodi bispesifik seperti IgG, kromatografi afiniti protein A digunakan, manakala untuk antibodi bispesifik bukan seperti IgG, kromatografi afiniti berasaskan rantaian ringan boleh digunakan. Selepas itu, antibodi diinkubasi di bawah keadaan pH rendah untuk tempoh masa tertentu, menyebabkan struktur protein pada permukaan sampul virus terganggu, sekali gus kehilangan keupayaan untuk menjangkiti sel. Penapisan dalam pertengahan dilakukan untuk membuang bendasing seperti protein sel perumah (HCP) dengan lebih lanjut. Ketulenan antibodi dipertingkatkan melalui kaedah seperti kromatografi pertukaran ion, dan sebarang virus sisa dibuang melalui teknik nanofiltrasi atau ultrafiltrasi. Akhir sekali, sampel dipekatkan dan digantikan dengan penimbal formulasi yang sesuai.