Pjattaforma tal-Kejl tal-Affinità

Ibbażat fuq il-pjattaforma Octet u Biacore-T2000, Alpha Lifetech jista' jipprovdi servizzi affidabbli ta' determinazzjoni tal-affinità. Nistgħu nipprovdu determinazzjoni tal-affinità għal kampjuni multipli, bħal antikorpi, ċelloli, proteini, molekuli żgħar eċċ. Hemm diversi metodi ta' determinazzjoni tal-affinità, inkluża r-reżonanza tal-plażmon tal-wiċċ (SPR) u d-determinazzjoni tal-affinità tal-interferenza tas-saff bijoloġiku (BLI).

Alpha Lifetech għandha pjattaforma professjonali u preċiża għad-determinazzjoni tal-affinità li tgħaqqad l-ELISA mad-determinazzjoni tal-affinità, u tipprovdi riżultati professjonali, effiċjenti, rapidi u preċiżi għad-determinazzjoni tal-affinità għal klijenti madwar id-dinja. Nistgħu noffru żewġ metodi minn fejn jagħżlu l-klijenti: Determinazzjoni Rapida tal-Affinità u Determinazzjoni Preċiża tal-Affinità. Id-determinazzjoni rapida tal-affinità hija determinazzjoni ta' konċentrazzjoni waħda, filwaqt li d-determinazzjoni preċiża tal-affinità tista' tkejjel l-affinità ta' konċentrazzjonijiet differenti. Applikata għall-istudju tal-interazzjonijiet bejn diversi komposti ta' molekuli żgħar, peptidi, proteini, oligonukleotidi u oligomeri, kif ukoll lipidi, batterjofaġi, viruses u ċelloli. Il-pjattaforma tal-kejl tal-affinità tista' tistabbilixxi bażi għall-ittestjar u l-iskrinjar tad-drogi tal-affinità, l-iskoperta ta' antikorpi u tiffaċilita r-riċerka sussegwenti.

Introduzzjoni għall-Affinità tal-Irbit

L-affinità hija importanti fl-evalwazzjoni tal-interazzjonijiet intermolekulari, l-assaġġi tal-affinità tal-mediċini, u l-iskrinjar tal-mediċini. L-interazzjonijiet intermolekulari jistgħu jiġu deskritti permezz ta' ekwazzjonijiet: L + R = LR, fejn L tirrappreżenta ligandi ħielsa, R tirrappreżenta riċetturi mhux marbuta, u LR tirrappreżenta kumplessi ligand-riċettur marbuta. Ir-reazzjonijiet ta' rbit jiddefinixxu interazzjonijiet intermolekulari, fejn iseħħ skambju dinamiku bejn stati marbuta u mhux marbuta matul ir-reazzjoni sakemm jintlaħaq l-ekwilibriju. Dan jista' jiġi deskritt miż-żewġ kostanti tar-rata, Kon (kostanti tar-rata ta' rbit) u Koff (kostanti tar-rata ta' dissoċjazzjoni), tar-reazzjoni. Il-valur Kd, li huwa r-reċiproku tal-kostanti ta' rbit (Ka), huwa Koff/Kon, kostanti importanti għall-affinità tar-reazzjoni. Għalhekk, iktar ma tkun stretta r-rabta bejn żewġ molekuli, iktar tkun għolja l-affinità. Iktar ma jkun żgħir il-valur Kd, iktar ikun viċi versa. Din l-ekwazzjoni tista' tiġi rappreżentata bħala kurva f'forma ta' S fuq graff semi-logaritmiku, bil-konċentrazzjoni tal-ligand fuq l-assi x (fuq l-assi tal-iskala logaritmika) u l-konfini frazzjonali fuq l-assi y. Il-linja mqattgħa tirrappreżenta l-konċentrazzjoni tal-ligand f'Kd (1 nM) ta' frazzjoni ta' rbit ta' 0.5.

Figura 1: Kurva ta' rbit sigmojdali ta' konċentrazzjonijiet varji ta' ligand marbut mar-riċettur tal-wiċċ taċ-ċellula. (Sors ta' referenza: Hunter SA, Cochran JR. Analiżijiet ta' Irbit maċ-Ċelloli għad-Determinazzjoni tal-Affinità tal-Interazzjonijiet Proteina-Proteina: Teknoloġiji u Konsiderazzjonijiet.)

Metodi għad-Determinazzjoni tal-Affinità

Analiżi tal-affinità tal-irbit ELISA

It-teknika użata ħafna għall-istudju tal-affinità tal-antikorpi hija bbażata fuq il-metodu ELISA, li huwa kkaratterizzat mill-konvenjenza, il-veloċità, is-sempliċità, is-sensittività għolja, u l-ispeċifiċità qawwija tiegħu. Jista' juża ammont żgħir ta' reaġenti (jiġifieri, antikorpi u antiġeni) u jkejjel l-affinità tal-antikorpi mingħajr il-ħtieġa ta' reaġenti ta' purifikazzjoni. Billi jimmobilizza l-antiġen fuq wiċċ solidu u jiskoprih bl-użu ta' antikorp primarju, l-antikorp sekondarju mmarkat jirreaġixxi mal-antikorp primarju biex jaqra u janalizza d-dejta f'qarrej tal-assaġġ immunosorbenti marbut mal-enzima (ELISA).

Figura 2: Analiżijiet simili għall-ELISA biex jiġi evalwat ir-rabta tal-peptidi ddisinjati mal-miri tagħhom. (Sors ta' referenza: Hajikarimlou, Maryam, et al., 2022. Approċċ komputazzjonali biex jiġu ddisinjati malajr peptidi li jiskopru l-proteina tal-wiċċ S tas-SARS-CoV-2.)

Analiżi tal-affinità tal-irbit tar-Reżonanza tal-Plasmon tal-Wiċċ (SPR)

It-teknoloġija SPR prinċipalment tiskopri bidliet fl-indiċi refrattiv. Bl-għajnuna ta' fenomeni ottiċi tradizzjonali u l-fenomenu tar-reżonanza tad-dawl, tista' tinbena teknoloġija ta' analiżi tal-bijosensing għall-interazzjoni bejn il-bijomolekuli biex tiskopri l-interazzjoni bejn il-ligandi u l-analiti fuq ċipep tal-bijosensing. Sinjali speċifiċi ta' rbit u interazzjoni bejn il-bijomolekuli jistgħu jinkisbu billi jiġu mmonitorjati l-bidliet dinamiċi fl-angoli SPR waqt reazzjonijiet bijoloġiċi.

Figura 3: Analiżi tar-reżonanza tal-plażmon tal-wiċċ (SPR) tal-irbit ta' H10/AGR2. (Sors ta' referenza: Garri, Carolina, et al., 2018. Identifikazzjoni, karatterizzazzjoni, u applikazzjoni ta' peptide ġdid kontra l-omologu 2 tal-gradjent anterjuri (AGR2).)

Analiżi tal-affinità tal-irbit tal-Interferenza tas-Saff Bijoloġiku (BLI)

It-teknoloġija tal-interferenza tal-bijofilm hija teknika ta' skoperta ottika ta' monitoraġġ f'ħin reali u mingħajr tiketti, użata l-aktar għal analiżi kwantitattiva komprensiva ta' interazzjonijiet intermolekulari u d-determinazzjoni tal-konċentrazzjoni tal-proteini. Din it-teknoloġija tuża bijosensur ibbażat fuq sonda biex tiskopri direttament bidliet fil-ħxuna tal-bijofilm fuq il-kampjun. Billi tiskopri l-bidliet fl-ispostament tal-ispettru tal-interferenza, jiġu skoperti r-rabta u d-dissoċjazzjoni bejn il-bijomolekuli li jinteraġixxu fuq il-wiċċ tas-sensur, u jintwera l-ispostament f'ħin reali (nm) tal-ispettru tal-interferenza.

Figura 4: Analiżi tal-interferometrija tas-saff bijoloġiku (BLI) bejn aLDRG u kitinoligosakkaridi. (Sors ta' referenza: Li, Bing, 2023. Karatteristiċi ta' Traskritoma Komparattiva bejn ir-Riżomorfi u l-Ifi ta' Armillaria sp. 541 Parteċipanti f'Simbjożi Fungali b'Enfasi fuq id-Dominji LysM.)

Paragun tat-Teknoloġija BLI u SPR

Isem tat-Teknoloġija	BLI (Interferometrija tas-Saff Bijoloġiku)	SPR (Reżonanza tal-Plasmon tal-Wiċċ)
Prinċipju	Ikejjel bidliet fix-xejra ta' interferenza tad-dawl rifless fuq il-wiċċ tas-sensur, u jidentifika interazzjonijiet molekulari permezz ta' bidliet fil-ħxuna ottika fuq is-saff bijoloġiku. Jipprovdi kurva ta' rbit f'ħin reali (kejl dirett).	Ikejjel l-interazzjonijiet molekulari billi jidentifika bidliet fis-sinjal fl-indiċi refrattiv ħdejn il-wiċċ taċ-ċippa tas-sensor (dan iseħħ meta d-dawl jinteraġixxi mal-interfaċċja tad-deheb u l-ħġieġ, u jikkawża bidliet fl-indiċi refrattiv). Id-dejta tiġi riflessa bħala bidliet fl-angolu tar-reżonanza (kejl indirett).
Manifattur	Sartorius	GE
Strument	ForteBio Biosensers	Strument SPR Miftuħ
Sistema	Sistema ForteBio Octet (għall-analiżi tal-interazzjoni molekulari)	TraceDrawer (żviluppat minn Ridgeview Instruments, l-Iżvezja)
Vantaġġi	1. Kompatibilità wiesgħa tal-kampjuni, stabbiltà eċċellenti, speċjalment għall-iskoperta ta' molekuli żgħar (rekwiżiti speċifiċi għall-purità tal-kampjun u l-kundizzjonijiet tal-buffer huma inqas stretti). Iċ-ċipep SSA huma kosteffettivi għal studji ta' rbit. 2. Produzzjoni aktar mgħaġġla u ħinijiet sperimentali iqsar meta mqabbla ma' SPR.	1. Storja ta' żvilupp itwal, li toffri sensittività ogħla meta mqabbla ma' BLI. 2. Preċiżjoni u robustezza akbar għal applikazzjonijiet speċifiċi, bħall-iskoperta ta' proteini rari jew ta' valur b'dejta ta' affinità u speċifiċità ogħla.
Żvantaġġi	1. Il-preċiżjoni tad-dejta hija kemxejn aktar baxxa meta mqabbla ma' SPR. 2. Jeħtieġ manutenzjoni bir-reqqa tal-istrument. 3. L-ispiża taċ-ċippa SSA hija relattivament għolja.	1. Il-kundizzjonijiet ta' lqugħ għall-iskoperta ta' molekuli żgħar ħafna jistgħu jkunu eżiġenti, u jżidu r-riskju ta' falliment fl-iskoperta. 2. Iċ-ċipep ġeneralment huma aktar għaljin minn dawk użati fil-BLI. 3. L-evaporazzjoni tal-kampjun waqt esperimenti estiżi tista' tkun problema.
Tip ta' Ċippa	Ċippa tal-SSA	Ċippa tal-NTA

Ambitu tal-Kejl tal-Affinità

Id-determinazzjoni tal-affinità tista' tinkludi antiġen-antikorp (antiġen-antikorp qawwi, antiġen-antikorp dgħajjef), proteina-proteina, proteina-peptide, proteina-molekula żgħira, u DNA/RNA tal-proteina (aptamer). Meta titkejjel il-KD, huwa meħtieġ li tkun taf waħda mill-konċentrazzjonijiet molari. Meta molekuli żgħar jorbtu, piż molekulari wieħed ma jistax ikun inqas minn 150 dalton.

Tip	Ambitu	Prekawzjonijiet
1. Antiġen-Antikorp	10^-6 sa 10^-12	Il-valuri Kd tal-biċċa l-kbira tal-antikorpi huma fil-medda ta' 10^-6-10^-7 sa 10^-9. Ġeneralment huwa maħsub li l-antikorpi b'affinità għolja huma fi ħdan 10^-9, filwaqt li dawk b'affinità għolja huma fi ħdan 10^-12.
2. Proteina - Molekuli Żgħar	10^-4 sa 10^-5	Il-KD ta' molekuli żgħar u proteini huwa bejn 10^-4 u 10^-5, filwaqt li 10^-3 u 10^-7 huma normali u ma jistgħux jilħqu 10^-10. Molekuli żgħar kovalenti jistgħu jilħqu 10^-10.
3. Avidin-Bijotina	10^-14	L-affinità tista' faċilment tgħaddi minn rabta mhux speċifika, u tista' tintuża l-istreptavidina jew l-affinità deglikosilata.
4. DNA-Proteina	10^-8 sa 10^-10	DNA ta' kwalità għolja u kompluta; oqgħod attent biex tevita l-influwenza tal-elettroforesi.

Rekwiżiti tal-kampjun għad-determinazzjoni tal-affinità

Kampjun	Rekwiżiti
1. Kampjun ta' Molekula Kbira	Proteina > 50 µg, antikorp > 100 µg, proteina bijotinilata > 200 µg; proteina mingħajr bijotina > 2 mg, rekwiżit ta' purità > 90%, soluzzjoni buffer: PBS, HEPBS. Ma jistax ikun fih gruppi imidazole; huwa meħtieġ kontroll tal-kwalità.
2. Kampjun ta' Molekula Żgħira	Kwantità > 1mg, trab jew likwidu, il-likwidu jeħtieġ li jkun jinħall fl-ilma jew fid-DMSO. Ipprova ma jkunx fih gliċerol, imidazole, trehalose jew melħ ieħor; ipprova evita reaġenti bi gruppi amino bħal Tris fil-buffer, ġeneralment PBS, HEPPS, eċċ. mingħajr reaġenti organiċi.

Vantaġġi tal-Pjattaforma tal-Kejl tal-Affinità

Analiżi ta' kampjuni multipli

Alpha Lifetech tista' tipprovdi testijiet tal-affinità għal diversi kampjuni, inklużi antikorpi, ċelloli, proteini, u bijomolekuli oħra.

Pjattaforma teknoloġika matura

Għandna teknoloġiji avvanzati bħal assay ta' rbit spr, assay ta' rbit bli, u assay ta' rbit elisa.

Għażla flessibbli ta' proġetti

Il-klijenti jistgħu jagħżlu bejn determinazzjoni rapida tal-affinità u determinazzjoni preċiża tal-affinità.

Riżultati ta' preċiżjoni għolja

It-tim tekniku professjonali tagħna jista' jiżgura riżultati effiċjenti, preċiżi u affidabbli għad-determinazzjoni tal-affinità.

Studju tal-KażKAŻ

Analiżi ta' affinità rapida tal-antikorpi BLI u analiżi ta' affinità tal-aptamer

Aqbad l-aptameri bijotinilati b'speċifiċità ta' sonda SA u dewwebhom. Dewweb u iddilwixxi l-kampjun għal konċentrazzjoni fissa, ssolidifika l-aptameri Target 1-5 maqbuda speċifiċi għas-sonda, u wara s-saturazzjoni tas-sinjal, waħħal mal-kampjun. Imbagħad żidhom ma' pjanċa ta' 96-bir.

Fig 5: Distribuzzjoni tal-pożizzjonijiet ta' skoperta għal kampjuni ta' pjanċa ta' 96-bir. B tirreferi għall-buffer li jintuża għall-ibbilanċjar u d-dissoċjazzjoni tas-sensuri. L: Aptameri tal-Mira tal-Bijotina 1-5, 221: Kampjun.

Oqgħod attent għat-tħaffir biex tiżgura l-istabbiltà u l-eżattezza tad-dejta, u ssettja l-programm korrispondenti biex tikseb ir-riżultati:

Fig. 6: Dijagramma ta' twaħħil ta' interazzjoni bejn l-aptameri Target 1, 2, u 3 u l-kampjuni. (CH 1 \ 3 \ 5 jirrappreżenta s-sinjal u d-dejta tal-interazzjoni bejn is-sonda tal-aptameri Target 1 \ 2 \ 3 solidifikati u l-kampjun.)

Fig 7: Dijagramma ta' twaħħil ta' interazzjoni bejn l-aptameri Target 4 u 5 u l-kampjuni. (CH 1 \ 3 jirrappreżenta s-sinjal u d-dejta tal-interazzjoni bejn is-sonda tal-aptamer Target 4 \ 5 solidifikata u l-kampjun.)

ir-riżultati juru

Inkisbu r-riżultati li ġejjin: L-affinità tal-adapter Target 1 mal-kampjun wara t-twaħħil kienet ta' 9.41 ^ -8; l-affinità tal-adapter Target 2 mal-kampjun wara t-twaħħil hija ta' 8.32 ^ -8; l-affinità tal-adapter Target 3 mal-kampjun wara t-twaħħil hija ta' 8.64 ^ -8; l-affinità tal-adapter Target 4 mal-kampjun wara t-twaħħil hija ta' 3.70 ^ -8; l-affinità tal-adapter Target 5 mal-kampjun wara t-twaħħil hija ta' 3.01 ^ -8.

Jekk għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikkuntattjana fi kwalunkwe ħin.

Leave Your Message

Servizz Dehru

0102