Pjattaforma tal-Immunizzazzjoni tal-Annimali

Is-sorsi tal-annimali ta' Alpha Lifetech huma ċari, b'permessi ta' spezzjoni u kwarantina, sfondi ġenetiċi ċari, frekwenza ċara ta' immunizzazzjoni, u rekords dettaljati tal-intervalli ta' immunizzazzjoni, li jipprovdu servizzi konvenjenti għall-produzzjoni ta' antikorpi. Prinċipalment jimmunizza annimali Camelidae (Alpaca Liama, u Iġmla), u b'hekk iqiegħed il-pedamenti għall-produzzjoni ta' nanobody. Barra minn hekk, jista' wkoll jimmunizza annimali ordinarji (bħal fniek bojod ta' New Zealand, ġrieden, u annimali oħra) skont il-frekwenza ta' immunizzazzjoni meħtieġa u r-rekwiżiti ta' immunoġeniċità tal-klijenti, jiġbedhom u jiżolahom f'PBMCs, u jużahom għal esperimenti sussegwenti (bħal antikorp monoklonali, żvilupp ta' antikorpi poliklonali, eċċ.). Il-klijenti jistgħu jipprovdu l-immunoġeni tagħhom stess, u aħna nwettqu kontroll strett tal-kwalità fuqhom. Jekk il-klijenti jipprovdu immunoġeni virali, jeħtieġ li jiġu inattivati u aħna nwettqu testijiet ta' inattivazzjoni biex niżguraw is-sigurtà. Fl-istess ħin, nistgħu wkoll nippersonalizzaw l-immunoġeni korrispondenti skont il-bżonnijiet tal-klijent.

Introduzzjoni għall-Immunizzazzjoni tal-Annimali

Meta jiġu prodotti antikorpi derivati mill-annimali bħal antikorpi monoklonali, antikorpi poliklonali, u nanobodies, l-ewwel pass huwa li jiġu immunizzati l-annimali u jinkisbu ċelluli B korrispondenti, antikorpi, jew PBMCs biex jippreparaw għal aktar produzzjoni ta' antikorpi, jippromwovu riċerka xjentifika bażika, jiżviluppaw għodod dijanjostiċi kliniċi, u jiffaċilitaw l-iskoperta u l-iżvilupp ta' drogi ġodda. Il-kameli, l-alpakas, il-Liama, u kameli oħra fil-Camelidae jistgħu jipproduċu libreriji ta' nanobody (antikorpi ta' dominju wieħed) permezz tal-ġbir tad-demm immuni u l-estrazzjoni tal-PBMCs. Il-fniek u annimali oħra jistgħu jiġu immunizzati u l-antikorpi jistgħu jiġu estratti minn ġisimhom. Wara l-purifikazzjoni, jistgħu jintużaw biex jipproduċu antikorpi poliklonali. Il-ġrieden, il-firien, eċċ. jistgħu jintużaw biex jipproduċu antikorpi monoklonali billi jingħaqdu ċelluli B estratti immuni ma' ċelluli tal-mijeloma. Qabel l-immunizzazzjoni, għandha tingħata attenzjoni lill-prinċipji tat-3R (sostituzzjoni, tnaqqis, raffinament), li jistgħu jnaqqsu b'mod sinifikanti n-numru ta' annimali użati għall-minimu meħtieġ, itejbu l-proċeduri sperimentali, u jimminimizzaw it-tbatija tal-annimali. Għandhom jiġu segwiti wkoll disinn sperimentali xieraq, għażla ta' antikorpi xierqa, u proċeduri stretti ta' validazzjoni.

Klassifikazzjoni ta' immunoġeni - produzzjoni ta' nanokorpi

Tipi ta' Immunoġeni	Eżempju	Preparazzjoni tal-Immunoġenu	Noti
Immunoġeni tal-Proteini	Enżimi, proteini, tossini batteriċi, u sustanzi oħra	Agħżel sistemi differenti ta' espressjoni tal-proteini: E. coli, ħmira, ċelloli tal-insetti, ċelloli tal-mammiferi, u sistema mingħajr ċelloli	Oqgħod attent għal fatturi bħat-temperatura, il-ħin, il-pH, u l-korpi ta' inklużjoni li jaffettwaw l-espressjoni tal-proteini
Immunoġeni tal-Aċidu Nuklejku	DNA, RNA	Immunoġenu tad-DNA: Ibni DNA tal-plażmidi, ikklona vettori ta' espressjoni adattati għall-ġeni fil-mira, ikkultiva ċelloli biex tamplifika d-DNA tal-plażmidi, u estratt DNA tal-plażmidi ta' purità għolja Immunoġenu tal-RNA: Il-Ħtieġa li Tiżdied Struttura tal-Kpiepel u Denb PolyA biex Tipprevjeni d-Degradazzjoni	Meta jiġu ppreparati immunoġeni tad-DNA, għandha tingħata attenzjoni liċ-ċelloli ospitanti xierqa, u meta jiġu ppreparati immunoġeni tal-RNA, għandha tingħata attenzjoni lill-prevenzjoni tad-degradazzjoni tal-RNA.
Immunoġeni Virali	Vaċċin inattivat b'virus sħiħ, vaċċin b'subunità, vaċċin b'vettur virali (adenovirus, lentivirus, eċċ.), vaċċin mRAN.	Meta tipprepara vaċċin inattivat b'virus sħiħ, il-virus l-ewwel jiġi inattivat biex tiżdied is-sigurtà. It-testijiet tat-tossiċità jintużaw biex jiddeterminaw jekk l-inattivazzjoni hijiex kompluta. Il-vaċċini tas-subunità jeħtieġu biss proteini tal-wiċċ tal-virus bħala antiġeni u jeħtieġ li jikkunsidraw l-effikaċja immuni.	Jeħtieġ li jiżdiedu aġġuvanti biex jipprovdu effetti immuni, għandha tingħata attenzjoni lill-virus li jeħtieġ li jiġi inattivat, huma meħtieġa titri xierqa tal-virus biex jiġu żgurati effetti immuni, u s-sigurtà tal-proċess ta' preparazzjoni għandha tkun ikkontrollata b'mod strett.

Proċess jew Kronoloġija tal-Immunizzazzjoni tal-Annimali

Selezzjoni tal-Annimali u Preparazzjoni tal-Antiġeni

Għażla tal-annimali: Agħżel alpaki ta' età tajba u fiżika b'saħħitha minn gruppi b'saħħithom, u wettaq eżami tad-demm u skrinjar tal-mard biex tiżgura li ma jkunx hemm mard infettiv jew problemi oħra tas-saħħa.

Preparazzjoni ta' immunoġeni: L-immunoġeni huma essenzjali biex jinduċu risponsi immuni u jeħtieġu l-għażla ta' proteini, peptidi, jew sustanzi oħra adattati bbażati fuq ir-rekwiżiti tal-antikorp fil-mira.

Alpaka tista' tiġi immunizzata b'1-3 antiġeni simultanjament, b'ammont totali ta' antiġen ta' 1-2mg għal kull immunizzazzjoni u volum ta' inqas minn 2mL. Qabel l-immunizzazzjoni, l-antiġen u l-adjuvant jiġu emulsifikati fi proporzjon ta' 1:1 biex jiffurmaw taħlita uniformi, li tinħażen f'4 ℃.

Alpaka immunoloġika

Irreġistra n-numru tal-widna tal-alpaka vojta u ibda l-esperiment ta' immunizzazzjoni. Injetta fil-limfonodi ħdejn l-għonq tal-alpaka fuq iż-żewġ naħat, b'2 punti fuq kull naħa u madwar 0.4mL ta' antiġen emulsifikat injettat f'kull punt. Wara l-immunizzazzjoni, osserva għal nofs siegħa biex tikkonferma li l-alpaka m'għandhiex sintomi ta' skumdità. L-immunizzazzjoni għandha tingħata kull ġimagħtejn, b'mill-inqas 4 immunizzazzjonijiet.

Ġbir tad-demm

Wara 4 tilqim għal 5-7 ijiem, iġbor 50ml ta’ demm mill-vina tal-għonq tal-alpaka.

Separazzjoni tas-serum

Kampjuni tad-demm jinġabru għal evalwazzjoni immuni qabel kull immunizzazzjoni tal-antiġen, b'5mL ta' demm meħuda kull darba; Fl-istess jum, id-demm ġie ċċentrifugat b'400 xg għal 30 minuta bl-użu ta' ċentrifuga mkessħa minn qabel ta' 25 ℃. Is-saff ta' fuq tas-serum ġie separat u maħżun għal testijiet sussegwenti tat-titru tal-antikorpi.

Limfoċiti separati

L-ewwel żid 15mL ta' soluzzjoni ta' separazzjoni taċ-ċelloli, imbagħad żid bil-mod 15mL ta' demm ma' tubu taċ-ċentrifuga ta' 50mL. Oqgħod attent u żid bil-mod meta żżid id-demm biex tevita li tħallat id-demm mas-soluzzjoni ta' separazzjoni. Iċċentrifuga minn qabel f'25 ℃, iċċentrifuga f'400 xg għal 30 minuta, u aħżen is-serum ta' fuq f'tubu taċ-ċentrifuga ġdid f'-80 ℃; Uża pipetta biex taspira ċ-ċelloli immuni tas-saff ta' fuq forma ta' qoton tan-nofs f'tubu taċ-ċentrifuga ġdid ta' 50ml. Żid 10mL ta' buffer PBS f'temperatura tal-kamra ma' kull tubu, iċċentrifuga f'25 ℃ u 400 xg għal 20 minuta. Neħħi s-supernatant, żid 5mL ta' buffer PBS f'temperatura tal-kamra ma' kull tubu, ħawwad bil-mod sew, ikkalkula n-numru ta' ċelloli bl-użu ta' emoċitometru, u mbagħad iċċentrifuga f'25 ℃ u 400 xg għal 20 minuta. Neħħi s-supernatant u dewweb il-limfoċiti miksuba minn RNAiso Plus abbażi tal-għadd ta' ċelluli biex tikseb 10 ^ 7/mL ta' lisat taċ-ċelluli, li jinħażen f'temperatura ta' -80 ℃.

Figura 1: Rappreżentazzjoni Skematika ta' Strateġiji Differenti ta' Skoperta ta' Antikorpi u l-Istadji Sperimentali li Huma Involuti. (Sors tal-Figura: Laustsen, Andreas H. et al.)

Il-klijenti jipprovdu kontroll tal-kwalità strett tal-immunoġeni

Tipi ta' Immunoġeni	Rekwiżit	Metodu ta' Kontroll tal-Kwalità
Kampjuni ta' Peptidi / Molekula Żgħira	Kundizzjonijiet ta' dissoluzzjoni (prinċipalment skont jekk dawn jinattivawx il-faġi), struttura molekulari/sekwenza tal-peptidi, rapport tas-sintesi (HPLC/MS/HNMR)	Sejbien tal-HPLC/MS
Kampjuni tal-Proteini	SDS-PAGE/WB, kundizzjonijiet ta' rikostituzzjoni, buffer, informazzjoni dwar it-tikketta, ammont totali (20-50ug), konċentrazzjoni, purità, eċċ.	SDS-PAGE/WB
Kampjuni taċ-Ċelloli	Tip ta' ċellula (ċelloli primarji/ċelloli editjati bil-ġeni), forma taċ-ċellula (friska/iffriżata u mdewba), tip ta' tkabbir (aderenti/sospiża), rekwiżiti tal-mezz tal-kultura, numru ta' ċelloli pprovduti, numru ta' ċelloli pprovduti, ċelloli editjati bil-ġeni biex tiġi żgurata espressjoni stabbli ta' miri ta' skrinjar (antikorp primarju korrispondenti tal-klijent), ċelloli ffriżati u mdewba biex tiġi ddeterminata r-rata ta' rkupru	Jimmiraw prinċipalment lejn ċelloli editjati bil-ġeni, bl-użu ta' antikorpi primarji fornuti mill-klijent għall-identifikazzjoni ELISA tal-espressjoni fil-mira (il-kumpanija tagħna tipprovdi antikorpi sekondarji HRP), skoperta taċ-ċitometrija tal-fluss (il-kumpanija tagħna tista' tipprovdi antikorpi sekondarji fluworexxenti).

X'inhuma l-applikazzjonijiet tal-immunità tal-annimali?

+

Antikorpi poliklonali jistgħu jiġu prodotti permezz tal-immunizzazzjoni tal-annimali, antikorpi monoklonali jistgħu jiġu prodotti billi ċ-ċelloli B jingħaqdu maċ-ċelloli tal-mijeloma, u l-PBMCs jistgħu jiġu estratti minn sorsi ta' ġemels (alpaka, ġemel, alpaka, eċċ.) biex jipproduċu diversi forom ta' frammenti ta' antikorpi bħal nanobodies, frammenti Fab, frammenti ta' antikorpi scFv, eċċ.
X'inhuma l-prekawzjonijiet għall-immunità tal-annimali?

+

Biex jiġu prodotti nanoantikorpi għal annimali derivati mill-iġmla, huma meħtieġa 5-6 immunizzazzjonijiet. Kampjuni tad-demm għandhom jinġabru bħala kontroll qabel l-immunizzazzjoni, b'intervall ta' ġimagħtejn bejn kull immunizzazzjoni. Wara r-raba' immunizzazzjoni, għandhom jinġabru demm pożittiv u demm negattiv mhux immunizzat għal ELISA biex jiġi ddeterminat it-titru. Jekk it-titru jkun taħt l-10 ^ 6, in-numru ta' immunizzazzjonijiet għandu jiżdied sakemm it-titru jilħaq livell xieraq. Għal immunizzazzjonijiet oħra tal-annimali bħall-immunizzazzjoni tal-fniek (il-livell ottimali jew komuni tal-antiġen tal-proteina għall-immunizzazzjoni tal-fenek huwa 50-1000ug), immunizzazzjoni tal-ġrieden (il-livell ottimali jew komuni tal-antiġen tal-proteina għall-immunizzazzjoni tal-ġrieden huwa 5-50ug, li jeħtieġ 10 ^ 6 ċelluli jekk hija ċellula, u 10-50ug għall-aċidu nuklejku jew karboidrati), immunizzazzjoni tal-mogħoż (il-livell ottimali jew komuni tal-antiġen tal-proteina għall-immunizzazzjoni tal-mogħoż huwa 250-5000ug), eċċ., għandha tingħata attenzjoni lid-dożaġġ, is-sigurtà, u l-effikaċja tal-immunoġeni.
Kif tagħżel annimali immuni?

+

Skont it-tip ta' antikorp meħtieġ mill-klijent, jekk teħtieġ li tipproduċi nanobodies jew frammenti oħra ta' antikorpi, tista' tagħżel annimali derivati mill-iġmla (iġmla, alpakas, alpakas) għall-immunizzazzjoni. Jekk teħtieġ li tipproduċi antikorpi monoklonali jew poliklonali, trid tagħżel l-ispeċi korrispondenti bbażata fuq l-ammont ta' serum, antiġen, u sors ta' antiġen. L-ammont massimu ta' serum għall-fniek huwa 500ml, li jeħtieġ ammont baxx ta' antiġen u huwa l-għażla primarja għall-produzzjoni ta' antikorpi poliklonali. L-ammont massimu ta' serum għall-ġrieden huwa 2ml, u l-ammont massimu ta' serum għall-firien huwa 20ml, li ġeneralment huwa l-għażla ottimali għall-antikorpi monoklonali. L-antikorpi prodotti mill-mogħoż għandhom affinità għolja, u Alpha Lifetech tista' tippersonalizza pjan ta' immunizzazzjoni esklussiv għalik skont il-ħtiġijiet tiegħek.
L-antiġeni jeħtieġ li jintużaw flimkien ma' adjuvanti? Kif tagħżel?

+

Hemm żewġ tipi ta' aġġuvanti: ibbażati fuq iż-żejt u bbażati fuq l-ilma. L-użu raġonevoli ta' aġġuvanti huwa kruċjali biex jinduċi risponsi qawwija ta' antikorpi għal antiġeni solubbli. Ir-rilaxx sostnut ta' aġġuvanti jfisser li jistgħu jintużaw inqas dożi ta' antiġeni, u r-risponsi ta' antikorpi jdumu aktar. L-ewwel injezzjoni għandha tintuża flimkien ma' aġġuvant. Ġeneralment huwa rakkomandat li jintuża l-aġġuvant ta' Freund meta l-ammont ta' immunogen ikun żgħir.
Prekawzjonijiet għall-immunizzazzjoni tal-alpaka?

+

(1) L-għażla tal-alpaka u l-antiġen tal-immunità huma ċ-ċavetta għal immunizzazzjoni b'suċċess. L-għażla ta' ġemel bi proporzjon tajjeb mhijiex rakkomandabbli. Il-purità u l-konformazzjoni korretta tal-antiġeni immuni huma kruċjali għall-iskrinjar ta' antikorpi adattati għal applikazzjonijiet sussegwenti wara immunizzazzjoni bl-alpaka. Il-purità tal-antiġeni tal-proteini ġeneralment mhijiex inqas minn 90%.

(2) Separazzjoni tal-limfoċiti: Is-separazzjoni f'waqtha taċ-ċelluli tista' tipprevjeni b'mod effettiv l-emoliżi wara l-ġbir tad-demm biex jinkiseb l-aħjar effett ta' separazzjoni.

(3) Iċ-ċiklu immuni jista' jaffettwa r-rispons immuni: intervall immuni ta' ġimgħa jew ġimagħtejn jippermetti lill-alpaki li jkollhom rispons immuni tajjeb għall-biċċa l-kbira tal-antiġeni.

aġġuvant żviluppat b'mod indipendenti

L-aġġuvant tal-formula unika tagħna ġie ottimizzat għas-sistema immunitarja tal-alpaka, u jipprovdi potenza u speċifiċità ogħla mill-aġġuvanti tradizzjonali.

Twassil ta' immunizzazzjoni
standard

Aħna nwiegħdu li nlestu l-immunizzazzjoni fiż-żmien speċifikat, nipprovdu serum b'titru għoli, u nirreġistraw kull pass permezz ta' rapporti dettaljati.

Kontroll tal-Kwalità tal-proġett

Kull proġett jgħaddi minn proċessi stretti ta' kontroll tal-kwalità biex jiġi żgurat il-kunsinna ta' antikorpi li jilħqu standards għoljin lill-klijenti.

b'mod ċarAlpakaSfond

Għandna popolazzjoni ta' alpaka b'saħħitha li tipprovdi appoġġ għal diversi programmi ta' immunizzazzjoni.

Jekk għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikkuntattjana fi kwalunkwe ħin.

Leave Your Message

Servizz Dehru

0102