Servizz ta' Maturazzjoni tal-Affinità tal-Antikorpi

Alpha Lifetech Inc.jista' joffri s-servizz ta' maturazzjoni tal-affinità tal-antikorpi billi juża teknoloġiji ta' mutazzjoni u selezzjoni. Normalment nużaw scFv bħala l-format tal-antikorpi fil-proċessi tas-servizz ta' maturazzjoni tal-affinità u sistema ta' faġemidi ta' wiri monovalenti li ntużat biex tnaqqas l-effetti tal-avidità waqt l-iskrinjar tal-irbit tal-antiġeni. It-tim professjonali tagħna jista' jipprovdi wkoll servizzi ta' maturazzjoni tal-affinità għal antikorpi ta' dominju wieħed.

Alpha Lifetech Inc.hija kburija li toffri servizzi komprensivi biex tissodisfa l-bżonnijiet diversi ta' klijenti globali. L-għan tagħna huwa li nifhmu u nilħqu t-talbiet ta' klijenti differenti u li ngħinu bi kwalunkwe problema li tkun ġejja u emerġenti fix-xogħol ta' riċerka.

X'inhi l-Maturazzjoni tal-Affinità?

Il-maturazzjoni tal-affinità hija l-proċess li bih l-antikorpi jgħaddu minn mutazzjonijiet u selezzjoni ripetuti biex itejbu l-affinità tagħhom għal antiġeni speċifiċi. Prinċipalment iseħħu fiċ-ċentru ġerminali tal-organi limfojdi sekondarji, iċ-ċelloli B jgħaddu minn ipermutazzjoni somatika u selezzjoni taħt l-influwenza taċ-ċelloli T u ċ-ċelloli dendritiċi follikulari.
Matul il-proċess ta' maturazzjoni tal-affinità, iċ-ċelloli B b'riċetturi tal-immunoglobulina tal-wiċċ b'affinità baxxa jiġu attivati ​​minn laqgħat mal-antiġen u jgħaddu minn proliferazzjoni u differenzjazzjoni. Permezz tal-maturazzjoni tal-affinità tal-ipermutazzjoni somatika, iseħħu sostituzzjonijiet każwali tan-nukleotidi fir-reġjun varjabbli tal-ġeni tal-immunoglobulina, li jwasslu għall-produzzjoni ta' diversi varjanti ta' antikorpi. Wara l-ipermutazzjoni somatika, titwettaq għażla mmexxija mill-antiġen fuq iċ-ċelloli B b'riċetturi tal-immunoglobulina mutati. Iċ-ċelloli B li jipproduċu antikorpi b'affinità antiġenika miżjuda jinżammu preferenzjalment u jitħallew jipproliferaw, filwaqt li ċ-ċelloli B b'affinità mnaqqsa jew mhux mibdula jgħaddu minn apoptożi. Dan il-proċess iterattiv ta' mutazzjoni u għażla jwassal għall-produzzjoni ta' kloni taċ-ċelloli B, li jipproduċu antikorpi b'affinità gradwalment ogħla għall-antiġen.

Servizz ta' Maturazzjoni tal-Affinità tal-Antikorpi

Il-vantaġġi ewlenin tal-metodi bbażati fuq il-PCR huma li l-mutazzjonijiet huma mmirati preċiżament lejn il-framment amplifikat; ir-rata ta' żball hija faċli biex tiġi kkontrollata u l-metodu huwa malajr u faċli biex jiġi stabbilit u ma jużax kimiċi perikolużi. Huwa magħruf sew li t-Taq DNA polymerase tidduplika d-DNA b'fedeltà baxxa, sostanzjalment minħabba n-nuqqas ta' attività ta' qari tal-provi minn 3' sa 5'.Alpha Lifetech'sIl-pjattaforma tal-inġinerija tal-antikorpi tapplika approċċ PCR suxxettibbli għall-iżbalji biex timmuta prinċipalment ir-reġjuni CDR waqt il-kostruzzjoni tas-sublibrerija. U spiss noħolqu mutazzjonijiet f'pożizzjonijiet kompletament każwali fil-frammenti VH u VL kollha, sabiex inżidu d-diversità ġenetika tas-sublibrerija. Wara l-kostruzzjoni ta' librerija ta' ġeni ta' antikorpi mutati permezz ta' PCR suxxettibbli għall-iżbalji, l-għażla ta' varjanti b'affinità għolja (l-affinità tal-antikorpi scFv tista' tilħaq 10^8 - 10^10 M) titwettaq jew permezz ta' panning f'soluzzjoni jew fuq antiġen immobilizzat b'kundizzjonijiet ta' ħasil ottimizzati għal għażla dipendenti fuq ir-rata ta' off.
  
Xjentisti fiAlpha Lifetech Inc.nużaw ir-razez tal-mutatur ta' Escherichia coli mutAD5TM bħala waħda minn diversi strateġiji ta' mutazzjoni biex nintroduċu mutazzjonijiet każwali, u b'hekk nimmodifikaw l-affinità u l-espressjoni ta' frammenti ta' antikorpi rikombinanti. Il-kundizzjonijiet tal-għażla jistgħu jiġu modifikati għal frammenti ta' antikorpi b'livelli ta' produzzjoni miżjuda. Il-kundizzjonijiet tat-tkabbir fiċ-ċelloli mutaturi ta' Escherichia coli jistgħu jiġu aġġustati biex jintroduċu mutazzjoni puntwali każwali waħda għal kull kilobażi ta' DNA, kważi ekwivalenti għal bidla ta' kodon wieħed għal kull framment scFv. Wara diversi ċikli ta' mutazzjoni, wiri, u għażla, nistgħu ntejbu l-kostanti tal-affinità minn 10^5 - 10^6 M għal 10^8 - 10^10 M.

Ittejjeb l-Istrateġiji ta' Maturazzjoni tal-Affinità

Ċerti pożizzjonijiet ta' antikorpi jistgħu jiġu randomised b'diversità definita (bħal randomizzazzjoni sħiħa bl-20 aċidu amminiku kollha jew randomizzazzjoni preġudikata b'aċidi amminiċi magħżula b'perċentwali fissi) biex titjieb l-affinità. Għandna żewġ strateġiji biex intejbu l-affinità tal-antikorpi: l-ewwel, il-mutazzjonijiet jiġu introdotti f'pożizzjonijiet ristretti fir-reġjuni li jiddeterminaw il-komplementarjetà (CDRs) permezz ta' mutaġenesi diretta lejn is-sit; it-tieni, il-mutazzjonijiet jiġu introdotti fir-reġjuni kollha li jikkodifikaw il-V permezz ta' mutaġenesi każwali. Bl-użu ta' dawn iż-żewġ metodi, is-sekwenzi konservati tal-aċidi amminiċi jew ir-reġjun kollu tal-qafas tal-antikorp se jiġu sostitwiti b'aċidi amminiċi oħra, li flimkien mat-teknoloġiji tagħna ta' skannjar tal-librerija tal-peptidi, jistgħu jżidu ħafna l-affinità tal-antikorpi ta' interess għal livell għoli ħafna.

Wirja tal-Fagi - Affinità għall-Antikorpi

Ladarba tkun inbniet il-librerija tal-mutanti scFv, żewġ strateġiji ta' skrinjar huma disponibbli: biopanning u klassifikazzjoni ta' antiġeni solidi. Fl-ewwel waħda, tintuża konċentrazzjoni sottrattiva ta' sottostrat biex tiżola l-antikorp b'affinità għolja, billi l-mutanti b'affinità baxxa jinħaslu, u jibqgħu l-partiċelli tal-faġi b'avidità għolja. It-tieni strateġija tuża antiġen immarkat f'soluzzjoni, għażla bbażata fuq il-kostanti tal-ekwilibriju (Kd), u għażla bbażata fuq il-kinetika tal-irbit, dan l-approċċ ta' għażla jidentifika varjanti ta' antikorpi b'Kd imtejjeb.

Jekk għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikkuntattjana fi kwalunkwe ħin.