X'inhi l-Inġinerija tal-Antikorpi?

Bl-għajnuna tal-inġinerija tal-antikorpi, kien possibbli li jiġi mmodifikat id-daqs molekulari, il-farmakokinetika, l-immunoġeniċità, l-affinità tal-irbit, l-ispeċifiċità u l-funzjoni effettur tal-antikorpi. Wara li sintetizza l-antikorpi, ir-rabta speċifika tal-antikorpi tagħmilhom siewja ħafna fid-dijanjosi u t-trattament kliniku. Permezz tal-inġinerija tal-antikorpi, jistgħu jissodisfaw il-ħtiġijiet tal-iżvilupp bikri tad-droga u dijanjostiċi.

L-għan tal-inġinerija tal-antikorpi huwa li tiddisinja u tipproduċi funzjonijiet speċifiċi ħafna u stabbli li l-antikorpi naturali ma jistgħux jiksbu, li jistabbilixxi l-pedament għall-produzzjoni ta 'antikorpi terapewtiċi.

Alpha Lifetech, bl-esperjenza estensiva tal-proġett tagħha fl-inġinerija tal-antikorpi, tista 'tipprovdi servizzi personalizzati ta' antikorpi monoklonali u poliklonali għal speċi multipli, kif ukoll servizzi ta 'kostruzzjoni u screening ta' librerija tal-antikorpi tal-wiri tal-fagi. Alpha Lifetech jista 'jipprovdi lill-klijenti antikorpi bijosimili ta' kwalità u prodotti ta 'proteini rikombinanti, kif ukoll servizzi korrispondenti, biex jipproduċu antikorpi effiċjenti, speċifiċi ħafna u stabbli. Billi nużaw antikorpi komprensivi, pjattaformi tal-proteini u sistemi ta 'wiri tal-fagi, nipprovdu servizzi li jkopru l-upstream u downstream tal-produzzjoni tal-antikorpi, inklużi servizzi tekniċi bħall-umanizzazzjoni tal-antikorpi, purifikazzjoni tal-antikorpi, sekwenzar tal-antikorpi u validazzjoni tal-antikorpi.

L-istadju pijunier tal-inġinerija tal-antikorpi huwa relatat ma 'żewġ teknoloġiji:

--Teknoloġija tad-DNA rikombinanti

--Teknoloġija Hybridoma

L-iżvilupp mgħaġġel tal-inġinerija tal-antikorpi huwa relatat ma 'tliet teknoloġiji importanti:

--Teknoloġija tal-klonazzjoni tal-ġeni u reazzjoni tal-katina tal-polimerażi

--Espressjoni tal-proteini: Proteini rikombinanti huma prodotti minn sistemi ta 'espressjoni bħal ħmira, viruses f'forma ta' virga, u pjanti

--Disinn strutturali megħjun bil-kompjuter

L-ewwel ġenerazzjoni ta 'antikorpi ġew umanizzati għall-produzzjoni ta' antikorpi kimeriċi, fejn ir-reġjun varjabbli ta 'antikorpi monoklonali tal-ġrieden kien marbut mar-reġjun kostanti ta' molekuli IgG umani. Ir-reġjun li jgħaqqad l-antiġen (CDR) tal-antikorp monoklonali tal-ġurdien tat-tieni ġenerazzjoni ġie trapjantat f'IgG uman. Ħlief għar-reġjun CDR, l-antikorpi l-oħra kollha huma kważi antikorpi umani, u saru sforzi biex jiġi evitat li jinduċu risponsi umani ta 'antikorpi tal-ġurdien (HAMA) meta jintużaw antikorpi tal-kloni tal-ġrieden għat-trattament tal-bniedem.

 

Biex tinbena librerija tal-wiri tal-fagi, l-ewwel pass huwa li tikseb il-ġeni li jikkodifikaw l-antikorpi, li jistgħu jiġu iżolati minn ċelluli B ta 'annimali immunizzati (kostruzzjoni ta' librerija immuni), estratti direttament minn annimali mhux immunizzati (kostruzzjoni ta 'librerija naturali), jew saħansitra mmuntati in vitro bi frammenti ta' ġene ta 'antikorpi (kostruzzjoni ta' librerija sintetika). Imbagħad, il-ġeni huma amplifikati permezz tal-PCR, imdaħħla fi plasmidi, u espressi f'sistemi ospitanti adattati (espressjoni tal-ħmira (ġeneralment Pichia pastoris), espressjoni prokarjotika (ġeneralment E. coli), espressjoni ta 'ċelluli mammiferi, espressjoni ta' ċelluli tal-pjanti, u espressjoni ta 'ċelluli ta' insetti infettati b'viruses forma virga). L-aktar komuni hija s-sistema ta 'espressjoni ta' E. coli, li tintegra sekwenza ta 'antikorpi ta' kodifikazzjoni speċifika fuq il-fagi u tikkodifika waħda mill-proteini tal-qoxra tal-fagi (pIII jew pVIII). Il-fużjoni tal-ġeni ta ', U murija fuq il-wiċċ ta' batterjofaġi. Il-qalba ta 'din it-teknoloġija hija li tinbena librerija tal-wiri phage, li għandha l-vantaġġ fuq libreriji naturali peress li jista' jkollha rbit speċifiku. Sussegwentement, antikorpi b'ispeċifiċità ta 'antiġen huma skrinjati permezz ta' proċess ta 'għażla bijoloġika, antiġeni fil-mira huma ffissati, phages mhux marbuta jinħaslu ripetutament, u phages marbuta jinħaslu għal aktar arrikkiment. Wara tliet rawnds jew aktar ta 'ripetizzjoni, speċifiċità għolja u antikorpi ta' affinità għolja huma iżolati.

Fig 3: Kostruzzjoni u Screening tal-Librerija tal-Antikorp

It-teknoloġija tad-DNA rikombinanti tista 'tintuża biex tiġġenera frammenti ta' antikorpi. L-antikorpi Fab jistgħu inizjalment jiġu idrolizzati biss minn protease gastrika biex jipproduċu frammenti (Fab ') 2, li mbagħad jiġu diġeriti minn papain biex jiġġeneraw frammenti Fab individwali. Il-framment Fv jikkonsisti minn VH u VL, li għandhom stabbiltà fqira minħabba n-nuqqas ta 'rabtiet disulfide. Għalhekk, VH u VL huma marbuta flimkien permezz ta 'peptide qasir ta' 15-20 aċidi amminiċi biex jiffurmaw antikorp ta 'framment varjabbli ta' katina waħda (scFv) b'piż molekulari ta 'madwar 25KDa.

L-istudju tal-istruttura tal-antikorpi f'Camelidae (Camel, LIama, u Alpaca) ippreċiża li l-antikorpi għandhom biss ktajjen tqal u l-ebda ktajjen ħfief, għalhekk jissejħu antikorpi ta 'katina tqal (hcAb). Id-dominju varjabbli ta 'antikorpi ta' katina tqal jissejjaħ antikorpi ta 'dominju wieħed jew nanokorpi jew VHH, b'daqs ta' 12-15 kDa. Bħala monomeri, m'għandhom l-ebda rbit disulfide u huma stabbli ħafna, b'affinità għolja ħafna għall-antiġeni.

Fig 5: Heavy Chain Antibody u VHH/Nanobody

L-espressjoni ħielsa taċ-ċelluli tutilizza l-espressjoni tad-DNA naturali jew sintetiku biex tikseb sinteżi ta 'proteini in vitro, tipikament bl-użu tas-sistema ta' espressjoni E. coli. Jipproduċi proteini malajr u jevita l-piż metaboliku u ċitotossiku fuq iċ-ċelloli meta jipproduċi ammonti kbar ta 'proteini rikombinanti in vivo. Jista 'wkoll jipproduċi proteini li huma diffiċli biex jiġu sintetizzati, bħal dawk li huma diffiċli biex jiġu modifikati wara t-traduzzjoni jew sintetizzati proteini tal-membrana.