X'inhi l-Inġinerija tal-Antikorpi?

Bl-għajnuna tal-inġinerija tal-antikorpi, kien possibbli li jiġu modifikati d-daqs molekulari, il-farmakokinetika, l-immunoġeniċità, l-affinità tal-irbit, l-ispeċifiċità u l-funzjoni effettur tal-antikorpi. Wara s-sinteżi tal-antikorpi, l-irbit speċifiku tal-antikorpi jagħmilhom ta' valur kbir fid-dijanjosi klinika u t-trattament. Permezz tal-inġinerija tal-antikorpi, jistgħu jissodisfaw il-ħtiġijiet tal-iżvilupp bikri tal-mediċini u tad-dijanjosi.

L-iskop tal-inġinerija tal-antikorpi huwa li tiddisinja u tipproduċi funzjonijiet speċifiċi ħafna u stabbli li l-antikorpi naturali ma jistgħux jiksbu, u b'hekk tistabbilixxi l-pedament għall-produzzjoni ta' antikorpi terapewtiċi.

Alpha Lifetech, bl-esperjenza estensiva tagħha fi proġetti fl-inġinerija tal-antikorpi, tista' tipprovdi servizzi personalizzati ta' antikorpi monoklonali u poliklonali għal diversi speċi, kif ukoll servizzi ta' kostruzzjoni u skrining ta' librerija ta' antikorpi b'wiri ta' faġi. Alpha Lifetech tista' tipprovdi lill-klijenti b'antikorpi bijosimili ta' kwalità u prodotti ta' proteini rikombinanti, kif ukoll servizzi korrispondenti, biex tipproduċi antikorpi effiċjenti, speċifiċi ħafna u stabbli. Billi nużaw pjattaformi komprensivi ta' antikorpi, proteini u sistemi ta' wiri ta' faġi, nipprovdu servizzi li jkopru l-fażijiet 'il fuq u 'l isfel tal-produzzjoni ta' antikorpi, inklużi servizzi tekniċi bħall-umanizzazzjoni tal-antikorpi, il-purifikazzjoni tal-antikorpi, is-sekwenzar tal-antikorpi, u l-validazzjoni tal-antikorpi.

L-istadju pijunier tal-inġinerija tal-antikorpi huwa relatat ma' żewġ teknoloġiji:

--Teknoloġija tad-DNA rikombinanti

--Teknoloġija tal-ibridoma

L-iżvilupp mgħaġġel tal-inġinerija tal-antikorpi huwa relatat ma' tliet teknoloġiji importanti:

--Teknoloġija tal-ikklonjar tal-ġeni u reazzjoni katina tal-polimerażi

--Espressjoni tal-proteini: Il-proteini rikombinanti huma prodotti minn sistemi ta' espressjoni bħal ħmira, viruses f'forma ta' virga, u pjanti

--Disinn strutturali megħjun mill-kompjuter

L-ewwel ġenerazzjoni ta' antikorpi ġiet umanizzata għall-produzzjoni ta' antikorpi kimeriċi, fejn ir-reġjun varjabbli tal-antikorpi monoklonali tal-ġrieden kien marbut mar-reġjun kostanti tal-molekuli IgG umani. Ir-reġjun li jorbot l-antiġen (CDR) tat-tieni ġenerazzjoni ta' antikorp monoklonali tal-ġrieden ġie trapjantat f'IgG uman. Ħlief għar-reġjun CDR, l-antikorpi l-oħra kollha huma kważi antikorpi umani, u saru sforzi biex jiġi evitat li jiġu indotti risponsi ta' antikorpi umani kontra l-ġrieden (HAMA) meta jintużaw antikorpi tal-kloni tal-ġrieden għal trattament uman.

 

Biex tinbena librerija ta' wiri tal-faġi, l-ewwel pass huwa li jinkisbu l-ġeni li jikkodifikaw l-antikorpi, li jistgħu jiġu iżolati minn ċelluli B ta' annimali immunizzati (kostruzzjoni ta' librerija immuni), estratti direttament minn annimali mhux immunizzati (kostruzzjoni ta' librerija naturali), jew saħansitra mmuntati in vitro ma' frammenti ta' ġeni ta' antikorpi (kostruzzjoni ta' librerija sintetika). Imbagħad, il-ġeni jiġu amplifikati permezz ta' PCR, imdaħħla fi plasmidi, u espressi f'sistemi ospitanti adattati (espressjoni tal-ħmira (ġeneralment Pichia pastoris), espressjoni prokarjotika (ġeneralment E. coli), espressjoni taċ-ċelluli tal-mammiferi, espressjoni taċ-ċelluli tal-pjanti, u espressjoni taċ-ċelluli tal-insetti infettati b'viruses f'forma ta' virga). L-aktar komuni hija s-sistema ta' espressjoni ta' E. coli, li tintegra sekwenza speċifika ta' antikorpi li tikkodifika fuq il-faġi u tikkodifika waħda mill-proteini tal-qoxra tal-faġi (pIII jew pVIII). Il-fużjoni tal-ġeni ta', U murija fuq il-wiċċ tal-batterjofaġi. Il-qalba ta' din it-teknoloġija hija li tinbena librerija ta' wiri tal-faġi, li għandha l-vantaġġ fuq il-libreriji naturali billi jista' jkollha rbit speċifiku. Sussegwentement, l-antikorpi b'speċifiċità ta' antiġen jiġu skrinjati permezz ta' proċess ta' selezzjoni bijoloġika, l-antiġeni fil-mira jiġu ffissati, il-faġi mhux marbuta jinħaslu ripetutament, u l-faġi marbuta jinħaslu għal aktar arrikkiment. Wara tliet rawnds jew aktar ta' ripetizzjoni, jiġu iżolati antikorpi b'speċifiċità għolja u affinità għolja.

Figura 3: Kostruzzjoni u Skrining tal-Librerija tal-Antikorpi

It-teknoloġija tad-DNA rikombinanti tista' tintuża biex tiġġenera frammenti ta' antikorpi. L-antikorpi Fab inizjalment jistgħu jiġu idrolizzati biss minn protease gastrika biex jipproduċu frammenti (Fab')2, li mbagħad jiġu diġeriti minn papain biex jiġġeneraw frammenti Fab individwali. Il-framment Fv jikkonsisti minn VH u VL, li għandhom stabbiltà fqira minħabba n-nuqqas ta' bonds disulfide. Għalhekk, VH u VL huma marbuta flimkien permezz ta' peptide qasir ta' 15-20 aċidu amminiku biex jiffurmaw antikorp ta' framment varjabbli b'katina waħda (scFv) b'piż molekulari ta' madwar 25KDa.

L-istudju tal-istruttura tal-antikorpi fil-Camelidae (Camel, Liama, u Alpaca) iċċara li l-antikorpi għandhom biss ktajjen tqal u l-ebda ktajjen ħfief, għalhekk jissejħu antikorpi ta' katina tqila (hcAb). Id-dominju varjabbli tal-antikorpi ta' katina tqila jissejjaħ antikorpi ta' dominju wieħed jew nanobodies jew VHH, b'daqs ta' 12-15 kDa. Bħala monomeri, m'għandhom l-ebda bonds disulfide u huma stabbli ħafna, b'affinità għolja ħafna għall-antiġeni.

Fig 5: Antikorp ta' Katina Tqila u VHH/Nanobody

L-espressjoni ħielsa taċ-ċelloli tutilizza l-espressjoni ta' DNA naturali jew sintetiku biex tikseb is-sintesi tal-proteini in vitro, tipikament bl-użu tas-sistema ta' espressjoni ta' E. coli. Tipproduċi proteini malajr u tevita l-piż metaboliku u ċitotossiku fuq iċ-ċelloli meta tipproduċi ammonti kbar ta' proteini rikombinanti in vivo. Tista' wkoll tipproduċi proteini li huma diffiċli biex jiġu sintetizzati, bħal dawk li huma diffiċli biex jiġu modifikati wara t-traduzzjoni jew jiġu sintetizzati proteini tal-membrana.