Servizz ta' Analiżi tal-Karatterizzazzjoni tal-Aptamer

Alpha Lifetech ilha tipprovdi servizzi relatati mal-aptameri għal ħafna snin, u bħalissa tista' tipprovdi skemi komprensivi ta' żvilupp tal-aptameri bħas-sintesi tal-aptameri, l-iskrinjar SELEX, is-sekwenzar b'rendiment għoli, u l-ottimizzazzjoni u l-karatterizzazzjoni tal-aptameri. Abbażi tal-vantaġġi tal-metodu SELEX għall-iskrinjar tal-aptameri, Alpha Lifetech espandiet aktar metodi għall-iskrinjar tal-aptameri.

Introduzzjoni għall-Analiżi tal-Karatterizzazzjoni tal-Aptamer

Verifika tal-affinità

L-affinità ottimizzata tal-aptamer ġiet ivverifikata permezz ta' tekniki rilevanti tal-assaġġ tal-irbit tal-aptamer. Eżempji jinkludu Kalorimetrija tat-Titrazzjoni Iżotermika (ITC), Ċitometrija tal-Fluss (FCM), u Reżonanza tal-Plasmon tal-Wiċċ (SPR), Mikrofluidika, eċċ. L-affinità tal-aptamer ġeneralment tiġi espressa mill-kostanti tad-dissoċjazzjoni (KD), kwantità fiżika użata biex tikkwantifika l-grad ta' dissoċjazzjoni molekulari f'reazzjoni riversibbli. Iktar ma jkun żgħir il-valur KD, iktar ikun stabbli l-kumpless, jiġifieri, iktar tkun b'saħħitha l-affinità; Bil-maqlub, iktar ma jkun kbir il-valur KD, iktar ikun instabbli l-kumpless u iktar tkun dgħajfa l-affinità. Dan il-pass huwa ċ-ċavetta biex tiġi identifikata l-prestazzjoni tal-aptamer, u jiżgura l-maturazzjoni tal-affinità tal-aptamer u jista' jorbot mal-molekula fil-mira b'affinità u selettività għolja f'applikazzjonijiet prattiċi.

Fig.1 Proċess ta' maturazzjoni tal-affinità tal-aptamer. Sors ta' referenza:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Verifika tal-funzjoni

Minbarra l-verifika tal-affinità, il-funzjoni tal-aptamer trid tiġi vverifikata. Dan jinkludi l-verifika tal-istabbiltà, l-ispeċifiċità u l-interazzjonijiet tal-aptamer ma' molekuli oħra f'ambjent partikolari. Ir-riżultati tal-verifika funzjonali se jaffettwaw direttament il-valur tal-aptameri fir-riċerka xjentifika u l-applikazzjonijiet industrijali.

Verifika Speċifika

Esperiment kompetittiv: Il-kapaċità tal-aptamer li jorbot ma' mira speċifika hija evalwata fil-preżenza ta' miri simili oħra. Jekk l-aptamer jista' jorbot speċifikament mal-molekula fil-mira mingħajr interferenza minn molekuli oħra, dan jindika li għandha speċifiċità għolja.

Esperiment ta' reazzjoni inkroċjata: L-aptamer jintrabat ma' serje ta' miri relatati jew mhux relatati biex tara jekk jintrabatx biss ma' mira speċifika, sabiex tiġi vverifikata l-ispeċifiċità tiegħu.

Verifika tal-istabbiltà

Esperiment tad-degradazzjoni tan-nukleażi: L-aptameri ġew esposti għal konċentrazzjonijiet differenti ta' nukleażi u d-degradazzjoni tagħhom ġiet osservata. Billi jitqabbel il-grad ta' degradazzjoni f'punti ta' żmien differenti, tista' tiġi evalwata l-abbiltà ta' degradazzjoni kontra n-nukleażi tal-aptamer.

Esperiment dwar l-istabbiltà tat-temperatura u l-ħin: L-aptamer tqiegħed taħt kundizzjonijiet differenti ta' temperatura u ħin biex tiġi osservata l-istabbiltà strutturali u funzjonali tiegħu. Dan jgħin biex jiġu ddeterminati l-kundizzjonijiet ottimali ta' ħażna u użu għall-aptameri.

Identifikazzjoni tal-attività bijoloġika

Il-metodu xieraq ġeneralment jintgħażel skont l-għan speċifiku tal-applikazzjoni tal-aptamer tal-aċidu nuklejku.

(1) Ittestjar tal-livell molekulari: Bl-użu ta' tekniki tal-bijoloġija molekulari, bħal elettroforesi tal-ġel, Western blot, eċċ., biex jinstabu l-kumplessjonijiet iffurmati wara li l-aptamer jingħaqad mal-molekula fil-mira, jew biex jinstabu l-bidliet fil-livell ta' espressjoni tal-molekula fil-mira kkawżati mill-aptamer.

(2) Ittestjar fil-livell taċ-ċelloli: Bl-użu tat-teknoloġija tal-kultura taċ-ċelloli, l-aptameri jiġu inkubati maċ-ċelloli fil-mira biex jiġu osservati bidliet bijoloġiċi bħall-morfoloġija taċ-ċelloli, il-proliferazzjoni u l-apoptożi, u tiġi evalwata l-attività bijoloġika tal-aptameri.

(3) Ittestjar fuq mudelli ta' annimali: F'mudelli ta' annimali xierqa, l-aptameri tal-aċidu nuklejku jingħataw permezz ta' injezzjoni jew amministrazzjoni ta' mediċini, u indikaturi fiżjoloġiċi u bidliet patoloġiċi tal-annimali jiġu osservati biex jiġu evalwati l-attività bijoloġika u s-sigurtà tal-aptameri in vivo.