Servizz ta' Riċerka Aptamer

Introduzzjoni għall-Aptamer

L-aptameri huma molekuli ta' aċidu nuklejku b'fergħa waħda (bħal DNA jew RNA) li jiġu skrinjati in vitro minn librerija ta' oligonukleotidi sintetiċi b'sekwenzi assenjati b'mod każwali permezz ta' proċess imsejjaħ skrinjar SELEX, li jinvolvi rawnds multipli ta' selezzjoni iterattiva. Il-komponenti ewlenin tas-servizzi ta' żvilupp tal-aptameri li huma proprjetà ta' Alpha Lifetech jinkludu l-kostruzzjoni tal-librerija tal-aptameri, l-iskrinjar SELEX tal-aptameri, is-sekwenzar SELEX tal-aptameri, l-analiżi tas-sekwenza tal-aptameri u analiżi oħra tal-aptameri.

Is-sekwenzar SELEX jikkombina l-iskrinjar tal-aptamer SELEX u s-sekwenzar b'rendiment għoli. Permezz tas-sekwenzar tal-aptamer SELEX, is-sekwenza speċifika tal-aptamer marbut mal-mira tista' tiġi determinata b'mod effiċjenti, u tipprovdi dejta bażika għall-analiżi u l-applikazzjoni sussegwenti tas-sekwenza tal-aptamer.

L-aptameri ntużaw ħafna fir-riċerka xjentifika, it-trattament tal-mard, il-kostruzzjoni ta' bijosensuri, l-iskoperta ta' mediċini u l-monitoraġġ ambjentali. Madankollu, l-aptameri tal-oligonukleotidi skrinjati in vitro ġew degradati faċilment in vivo u saħansitra wrew tossiċità. Għalhekk, wara li jiġu ottimizzati l-aptameri skrinjati, hija meħtieġa analiżi in vitro biex jiġi evalwat is-suċċess tal-iżvilupp tal-aptameri. Skont il-ħtiġijiet differenti ta' analiżi tal-klijenti, Alpha Lifetech għandha varjetà ta' strateġiji ta' analiżi tal-aptameri biex il-klijenti jagħżlu.

Fig.1 Dijagramma tal-analiżi tal-aptamer. Sors ta' referenza:Thevendran R, Citartan M. 2022. Analiżijiet biex Tistma l-Affinità tal-Irbit tal-Aptameri.

Introduzzjoni għas-Servizz ta' Riċerka Aptamer

Analiżi tal-Istabbiltà tal-Aptamer

Esperiment tad-degradazzjoni tan-nukleażi

Billi l-aptamer jiġi inkubat ma' tipi differenti ta' nukleażi (bħal DNase, RNase, eċċ.) taħt kundizzjonijiet speċifiċi, id-degradazzjoni tal-aptamer tiġi osservata, sabiex tiġi evalwata l-abbiltà tiegħu kontra d-degradazzjoni. Dan huwa ta' benefiċċju biex jiġu ddeterminati l-istabbiltà u d-durabbiltà tal-aptamer f'applikazzjonijiet prattiċi.

Metodu ta' tikkettar fluworexxenti

L-istabbiltà tal-aptamer hija evalwata indirettament billi jiġu ttikkettjati l-fluworofori fuq l-aptamer u jiġu osservati l-bidliet fis-sinjal tal-fluworexxenza qabel u wara li jingħaqad mal-mira. Pereżempju, meta aptamer jingħaqad ma' mira, il-konformazzjoni tiegħu tista' tinbidel, u tirriżulta f'sinjal tal-fluworexxenza msaħħaħ jew imnaqqas.

Analiżi tal-istabbiltà termali

L-istabbiltà termali tal-aptamer hija vvalutata billi titkejjel il-bidla fit-temperatura tat-tidwib tiegħu (valur Tm) f'temperaturi differenti. Iktar ma tkun għolja t-temperatura tat-tidwib tal-aptamer, aħjar tkun l-istabbiltà termali tiegħu.

Analiżi tal-istabbiltà dinamika

Ir-reżonanza tal-plażmon tal-wiċċ (SPR) u teknoloġiji oħra ntużaw biex jimmonitorjaw il-proċess ta' rbit u diżakkoppjament bejn l-aptamer u l-mira f'ħin reali, jiksbu parametri dinamiċi (bħall-kostanti tar-rata ta' rbit, il-kostanti tar-rata ta' dissoċjazzjoni, eċċ.), jifhmu aktar il-mekkaniżmu ta' interazzjoni bejn l-aptamer u l-mira, u jevalwaw l-istabbiltà dinamika tagħha.

Analiżi tal-istabbiltà strutturali

Intużaw kristalografija bir-raġġi-X, reżonanza manjetika nukleari (NMR) u tekniki oħra tal-bijoloġija strutturali biex tiġi analizzata l-istruttura tridimensjonali tal-aptamer u l-istabbiltà strutturali tagħha.

Analiżi Speċifika tal-Aptamer

Analiżi tal-irbit tal-aptamer

L-affinità tiġi vvalutata billi jitwettaq assay tal-irbit tal-aptamer biex titkejjel il-kostanti tal-irbit bejn l-aptamer u l-molekula fil-mira, bħall-kostanti tad-dissoċjazzjoni Kd. Valur Kd aktar baxx jindika affinità ogħla. L-assay tal-irbit tal-aptamer jista' jelimina l-kandidati għall-mediċini b'kapaċità għolja ta' rbit, u mbagħad iwettaq studji farmakodinamiċi u farmakokinetiċi sussegwenti.

Esperiment ta' skrinjar invers

L-analiżi ta' skrinjar invers hija metodu ta' skrinjar biex jiġu esklużi malajr molekuli mhux fil-mira minn numru kbir ta' molekuli kandidati. L-iskrinjar invers huwa mfassal biex jeskludi molekuli li ma jippossjedux din il-proprjetà jew funzjoni. Iċ-ċavetta għall-iskrinjar invers hija li jintgħażlu markaturi jew kundizzjonijiet xierqa ta' skrinjar invers li jippermettu li l-molekuli mhux fil-mira jiġu identifikati u mneħħija matul il-proċess ta' skrinjar. F'dan l-esperiment, l-għażla ta' molekuli mhux fil-mira hija importanti ħafna. Għandu jiġi żgurat li l-molekuli mhux fil-mira magħżula huma rappreżentattivi ta' sustanzi li jistgħu jinterferixxu mal-iskrinjar tal-aptamer u li l-fatturi possibbli ta' interferenza jkunu koperti kemm jista' jkun.

Esperiment ta' inibizzjoni kompetittiva

Billi żżid kompetituri eċċessivi (bħal molekuli bi struttura simili għall-molekula fil-mira) mas-sistema ta' rbit tal-aptamer u l-molekula fil-mira, tiġi osservata l-bidla fil-kapaċità ta' rbit tal-aptamer u l-molekula fil-mira. Jekk il-kapaċità tal-aptamer li jorbot mal-molekula fil-mira titnaqqas b'mod sinifikanti, dan jindika li l-aptamer għandu speċifiċità għolja.

F'xi każijiet, esperimenti ta' inibizzjoni kompetittiva jistgħu jintużaw bħala parti minn jew bħala aġġunt għal esperimenti ta' skrinjar invers. Pereżempju, fil-proċess ta' skrinjar tal-mediċina, il-kapaċità tal-molekula tal-mediċina li torbot mal-proteina fil-mira tista' tiġi evalwata permezz ta' esperimenti ta' inibizzjoni kompetittiva, u mbagħad esperimenti ta' skrinjar invers jistgħu jintużaw biex jitneħħew dawk il-komposti li huma marbuta b'mod qawwi wisq ma' ċelloli jew tessuti normali.

Analiżi taċ-Ċitotossiċità tal-Aptamer

Hemm varjetà ta' metodi sperimentali għall-analiżi taċ-ċitotossiċità tal-aptameri, li huma mfassla biex jevalwaw l-effetti tal-aptameri fuq is-sopravivenza, il-proliferazzjoni jew il-funzjoni taċ-ċelluli.

Metodi	Introduzzjoni dettaljata	Vantaġġ	Żvantaġġ
Metodu ta' Sejbien tal-MTT	L-analiżi tal-MTT hija metodu bbażat fuq l-attività tal-enzimi fil-mitokondrija taċ-ċelloli ħajjin. Is-succinate dehydrogenase fil-mitokondrija taċ-ċelloli ħajjin tista' tnaqqas l-MTT eżoġenu għall-kristall blu-vjola li ma jinħallx fl-ilma Formazan u tiddepożitah fiċ-ċellula, filwaqt li ċ-ċelloli mejta m'għandhom l-ebda funzjoni bħal din. It-tidwib ta' dawn il-kristalli permezz ta' dimethyl sulfoxide (DMSO) u l-iskoperta tal-assorbenza f'tul ta' mewġ speċifiċi (bħal 490nm jew 570nm) fuq enzimometru jistgħu jirriflettu indirettament in-numru ta' ċelloli ħajjin u b'hekk jivvalutaw iċ-ċitotossiċità tal-aptamer.	Sensittività għolja, ekonomija u konvenjenza	Tagħbija kbira ta' xogħol, solventi organiċi jistgħu jikkawżaw ħsara liċ-ċelloli; Jistgħu jinkisbu biss ir-riżultati sperimentali finali, u l-proċess sħiħ ta' ċitotossiċità ma jistax jiġi osservat.
Metodu ta' Sejbien CCK-8	Cell Counting Kit-8 (CCK-8) huwa metodu ta' skoperta kolorimetrika b'sensittività għolja u mhux radjuattiv. CCK-8 fih WST-8, li jitnaqqas mid-dehydrogenase fil-mitokondrija taċ-ċelloli ħajjin biex jipproduċi fjuwil oranġjo methyl zan li jinħall ħafna fl-ilma. L-ammont ta' żebgħa mezan prodotta hija relatata b'mod lineari man-numru ta' ċelloli ħajjin, u n-numru ta' ċelloli ħajjin jista' jiġi rifless indirettament billi jitkejjel il-valur tal-assorbiment tad-dawl taż-żebgħa Mezan fit-tul ta' mewġa ta' 450nm, sabiex tiġi evalwata ċ-ċitotossiċità tal-aptamer.	Tħaddim sempliċi, l-ebda ħtieġa li taħsel iċ-ċelloli, skoperta rapida, firxa wiesgħa ta' skoperta lineari, sensittività għolja, ripetibbiltà tajba, ftit ċitotossiċità	Prezz għoli tar-reaġent; Kultant ikun diffiċli li wieħed jgħid jekk l-assorbenza mnaqqsa hijiex dovuta għal tnaqqis fin-numru ta' ċelloli ħajjin jew tnaqqis fl-attività tad-deidroġenażi taċ-ċelloli nnifisha
Metodu ta' Sejbien tal-LDH	LDH (lactate dehydrogenase) hija enzima li hija stabbli fiċ-ċitoplasma taċ-ċelloli, u meta l-membrana taċ-ċellula tkun bil-ħsara, LDH tiġi rilaxxata barra miċ-ċellula. L-LDH jista' jikkatalizza l-aċidu lattiku biex jifforma piruvat, u jirreaġixxi ma' INT (melħ tat-tetrazolium) biex jifforma sustanza kristallina vjola. Billi titkejjel l-assorbenza tiegħu f'tul ta' mewġa speċifiku (bħal 490nm), il-grad ta' ħsara taċ-ċelloli jista' jiġi rifless, u mbagħad iċ-ċitotossiċità tal-aptamer tista' tiġi evalwata.	Jirrifletti direttament ir-rata tal-mewt taċ-ċelloli, u għandu inqas ħsara liċ-ċelloli, u m'hemm l-ebda kontaminazzjoni ta' iżotopi radjuattivi	Il-ħtieġa li ċ-ċelloli jitneħħew spiss mill-inkubatur, l-operazzjoni hija aktar ikkumplikata; Jistgħu jinkisbu biss ir-riżultati sperimentali finali, u l-proċess sħiħ ta' ċitotossiċità ma jistax jiġi osservat.
Analiżi tal-Immaġini taċ-Ċelloli Ħajjin f'Ħin Reali	Bl-użu ta' analizzatur tal-immaġini taċ-ċelluli ħajjin f'ħin reali, l-istrument tqiegħed fl-inkubatur biex josserva u jirreġistra l-proċess kollu taċ-ċiklu tat-tkabbir taċ-ċelluli f'ħin reali. Iċ-ċitotossiċità tal-aptameri tista' tiġi evalwata billi jiġu analizzati l-bidliet morfoloġiċi u l-kurvi tat-tkabbir taċ-ċelluli. Dan il-metodu jista' jipprovdi vidjows u riżultati kwantifikati tal-proċessi ċitotossiċi filwaqt li jżomm l-ambjent tat-tkabbir taċ-ċelluli stabbli.	Jista' jimmonitorja l-proċess ċitotossiku f'ħin reali, immaġini mhux distruttivi, inaqqas l-interferenza u l-ħsara liċ-ċelloli; Kemm ir-riżultati tal-vidjow kif ukoll dawk kwantifikati huma disponibbli għal analiżi fil-fond.	L-ispejjeż tat-tagħmir huma għoljin u jeħtieġu ħiliet professjonali ta' operazzjoni u kapaċità ta' analiżi tad-dejta

KACHI

Vantaġġ tas-Servizz ta' Riċerka Aptamer

Kontroll Totali tal-Kwalità

Aptameri ottimizzati b'stabbiltà ogħla

Ekonomiku u effiċjenti. Prezz aktar kompetittiv, servizz aħjar

Siti ta' riċerka komprensivi u metodi ta' riċerka multipli

Servizzi ta' konsultazzjoni professjonali ta' qabel il-bejgħ u appoġġ ta' wara l-bejgħ

Esperjenza rikka fl-analiżi tal-aptameri

Tim ta' Riċerka u Żvilupp ta' livell għoli

Servizzi relatati mal-aptamer personalizzati

Ritorn lejn il-Paġna tal-Pjattaforma tal-Iżvilupp ta' Aptamer

Jekk għandek xi mistoqsijiet, jekk jogħġbok ikkuntattjana fi kwalunkwe ħin.

Leave Your Message

Servizz Dehru

0102