Servizz ta' Żvilupp ta' Antikorpi Monoklonali

Alpha Lifetech Inc.jista' jipprovdi tbassir tal-epitopi, sinteżi tal-peptidi, espressjoni tal-proteini, produzzjoni ta' antikorpi poliklonali jew monoklonali kif ukoll purifikazzjoni tal-antikorpi minn kultura taċ-ċelluli, fluwidu tal-axxite jew serum sħiħ.

Alpha Lifetech Inc.għandha esperjenza fil-provvista lill-klijenti b'diversi servizzi stabbli ta' linji ċellulari inklużi ċelloli ibridomi, linji taċ-ċelloli għall-editjar tal-ġenoma, linji taċ-ċelloli knockdown, u linji taċ-ċelloli overexpression. Nippruvaw noffru servizzi avvanzati ta' linji taċ-ċelloli personalizzati lil kull klijent u s-servizzi tagħna huma ppruvati u fdati.

Strateġija għall-Iżvilupp tal-Antikorpi

1. Disinn u preparazzjoni tal-antiġen
Dawn l-antiġeni jistgħu jkunu proteini, peptidi, jew molekuli oħra. Id-disinn ta' immunoġeni jeħtieġ approċċ komprensiv li jintegra l-għarfien tal-istruttura tal-antiġeni, l-immunoloġija, u s-sistemi ta' kunsinna. Alpha Lifetech għandha teknoloġija tad-disinn tal-antiġeni li tista' tiddisinja immunoġeni għal klijenti fil-bżonn.
Alpha Lifetech tipprovdi prodotti ta' proteini rikombinanti għall-klijenti minn fejn jagħżlu. Għandna varjetà ta' sistemi ta' espressjoni ta' proteini, bħal sistema ta' espressjoni ta' E. coli, sistema ta' espressjoni ta' ħmira, sistema ta' espressjoni ta' bakulovirus-insetti, sistema ta' espressjoni ta' mammiferi, eċċ., biex nipproduċu l-proteini rikombinanti li għandek bżonn għar-riċerka.

2. Immunizzazzjoni tal-annimali
Alpha Lifetech tista' tipprovdi immunoġeni lill-klijenti, u annimali immuni bħal ġrieden, fniek, nagħaġ, alpakas, ħnieżer tal-Indi, ħamsters, eċċ. huma disponibbli għalik biex tagħżel minnhom.

3. Metodi ta' produzzjoni ta' antikorpi monoklonali

●Produzzjoni ta' Mabs bit-teknoloġija tal-Ibridoma
L-ibridoma hija ċellula ibrida prodotta mill-fużjoni ta' żewġ tipi ta' ċelluli, jiġifieri linja ta' ċelluli tal-majeloma tal-ġrieden u ċelluli tal-plażma (limfoċita B), fejn iċ-ċellula eterożigota tista' tipproduċi antikorpi kontinwi kontra l-antiġen ta' interess in vitro. Il-produzzjoni ta' linja ta' ċelluli ta' ibridoma tikkonsisti fi tliet partijiet: disinn tal-antiġen (apteni, molekuli żgħar, u peptidi), immunizzazzjoni tal-annimali, fużjoni taċ-ċelluli, u skrining pożittiv tal-kloni. Bl-użu ta' metodoloġiji uniċi ta' immunizzazzjoni, niksbu effiċjenzi eċċezzjonalment għoljin ta' fużjoni taċ-ċelluli (1-10 ibridomi għal kull elf ċellula B) u titri għoljin ta' antikorpi, u nimmassimizzaw ir-rata ta' suċċess tagħna f'testijiet analitiċi sussegwenti li jinkludu skrining bijokimiku, assays ibbażati fuq ċelluli in vitro, u studji fuq l-annimali.

●Produzzjoni ta' Mabs permezz tat-teknoloġija tal-wiri tal-faġi
Il-wiri tal-faġi joffri metodu ieħor għall-ġenerazzjoni ta' antikorpi monoklonali. Il-limfoċiti-B huma iżolati mid-demm tal-annimali u l-mRNA tagħhom jiġi estratt. Permezz tal-PCR, dan l-mRNA jiġi kkonvertit f'cDNA, li jamplifika s-segmenti VH u VL kollha. Dawn is-segmenti mbagħad jiġu kklonati f'vettur, tipikament bħala frammenti varjabbli b'katina waħda (scFv), flimkien mal-proteina PIII ta' batterjofaġ. Sussegwentement, din il-kostruzzjoni tintuża biex tinfetta E. coli, li tirriżulta fil-ħolqien ta' librerija li fiha madwar 10^10 ċelluli permezz ta' inokulazzjoni b'faġ helper. E. coli mbagħad tkun tista' tnixxi l-batterjofaġ li fih is-segmenti VH u VL bħala parti mill-kisja tagħha. Wara dan, segmenti VH u VL speċifiċi li jimmiraw lejn l-antiġen ta' interess jistgħu jintgħażlu u jintużaw biex jerġgħu jinokulaw E. coli mal-batterjofaġ. Iċ-ċelluli li fihom il-plasmid imbagħad jiġu iżolati u sekwenzati.

4. Skrining tal-fużjoni

●Fużjoni u Selezzjoni taċ-Ċelloli
Iċ-ċelloli B miġbura mbagħad jingħaqdu maċ-ċelloli tal-mijeloma, li huma ċelloli kanċeroġeni li jistgħu jipproliferaw b'mod indefinit fil-kultura. Il-fużjoni tipikament tinkiseb bl-użu ta' teknika bħall-fużjoni tal-polietilen glikol (PEG).
Wara l-fużjoni, iċ-ċelloli tal-ibridoma jiġu kkultivati f'mezz selettiv li jippermetti biss li l-ibridomi jgħixu. Il-mezz ġeneralment ikun fih aminopterin, li jipprevjeni t-tkabbir taċ-ċelloli tal-mijeloma mhux magħquda.

●Skrining u Klonging
Iċ-ċelloli tal-ibridoma li jirriżultaw jiġu skrinjati għall-produzzjoni ta' antikorpi speċifiċi għall-antiġen fil-mira. Dan tipikament isir bl-użu ta' tekniki bħal enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Western blot, immunopreċipitazzjoni, u flow cytometry.

Ladarba ċ-ċelloli tal-ibridoma li jipproduċu l-antikorp jiġu identifikati, dawn jiġu kklonati biex jiġġeneraw popolazzjoni ta' ċelloli identiċi. Dan jiżgura li l-antikorp prodott minn kull ċellola tal-ibridoma jkun identiku.

5. Verifika Funzjonali tal-Antikorpi
Alpha Lifetech tipprovdi validazzjoni funzjonali tal-antikorpi, bħal Western blotting, immunoistokimika, jew analiżi funzjonali, biex tikkaratterizza antikorpi monoklonali u tikkonferma l-ispeċifiċità, l-affinità u l-funzjonalità tal-antikorpi.

6. Ottimizzazzjoni tal-antikorpi
Il-purifikazzjoni tal-antikorpi mis-supernatant tal-kultura bl-użu ta' tekniki bħall-kromatografija tal-affinità tal-proteina A jew tal-proteina G, u Alpha Lifetech jistgħu wkoll jipprovdu metodi ta' modifikazzjoni tal-antikorpi biex itejbu l-affinità tal-antikorpi.

7. Produzzjoni ta' antikorpi
Alpha Lifetech tista' tevalwa antikorpi kandidati għal applikazzjonijiet ta' skrinjar b'rendiment għoli u produzzjoni fuq skala kbira.

mistoqsijiet frekwentimistoqsijiet frekwenti

Mistoqsijiet Frekwenti dwar l-iżvilupp ta' antikorpi monoklonali

1

Kif tagħżel l-ibridoma tal-fużjoni t-tajba?

Matul il-proċess tal-fużjoni, 10-15-il pjanċa tal-mikrotitrazzjoni ta' 96-bir jiġu miżrugħa bit-taħlita ibrida tal-fużjoni. Kull pjanċa tiġi mitmugħa bil-midja tal-għażla HAT-IMDM u miżmuma f'inkubatur tad-dijossidu tal-karbonju f'temperatura ta' 37 grad Celsius. 9-14-il jum wara l-fużjoni, is-supernatanti ibridi jiġu ttestjati għall-preżenza tal-antikorp speċifiku ta' interess.
2

Kif tista' tittejjeb l-effiċjenza tal-għażla?

Il-fużjoni taċ-ċelloli tal-plażma mal-kontropartijiet tal-majeloma tagħhom mhijiex effettiva 100%. Anke taħt kundizzjonijiet ottimali u l-aktar stimulazzjoni effettiva, il-fużjoni taċ-ċelloli xorta tipproduċi taħlita ta' ċelloli mhux fluwenti u konfluwenti li jeħtieġ li jiġu separati. Biex titjieb l-effiċjenza tal-proċess ta' selezzjoni, iċ-ċelloli tal-majeloma użati għall-fużjoni m'għandhomx HGPRT, enzima ewlenija fil-mogħdija ta' salvataġġ tan-nukleotidi. It-taħlita mbagħad ġiet ikkultivata f'mezz HAT, fejn kienu vijabbli biss ċelloli bl-enzima HGPRT, ibridomi li wirtu HGPRT miċ-ċelloli tal-plażma.
3

Kif jiġu skrinjati l-linji taċ-ċelluli tal-ibridoma għall-attività tal-antikorpi?

L-evalwazzjoni tal-varjetajiet ibridi hija pass kruċjali. Normalment, l-iskrinjar tas-supernatant tal-ibridoma, tal-kloni, u tas-subkloni jiġi pprovdut permezz ta' assay immunosorbenti marbut mal-enzimi (ELISA), assay Western blot, u klassifikazzjoni taċ-ċelluli attivati bil-fluworexxenza (FACS). Aħna nagħżlu li nwettqu l-iskrinjar kollu tas-supernatant fil-laboratorju tagħna stess.
4

Ipprovdi struzzjonijiet dettaljati dwar kif għandu jsir skrining tal-attività tal-antikorpi?

Is-supernati tal-ibridoma li għandhom jiġu ttestjati jistgħu jvarjaw minn 500 sa 1,440 kampjun u jkunu lesti għat-test sad-9-14-il jum. Nistgħu nqumu fuq perjodu ta' tlieta sa ħamest ijiem jew nistgħu nkunu lesti kollha fl-istess jum, għalhekk huwa importanti li l-laboratorju tal-klijent ikun ippreparat ġimgħat minn qabel b'assaġġi sekondarji ta' skrinjar speċifiċi li jaħdmu tal-għażla.
5

Għaliex jeħtieġ li jiġu subklonati l-ibridomijiet pożittivi?

Wara li ġew identifikati Wells pożittivi matul il-proċedura inizjali ta' skrinjar tal-ELISA, l-ibridomi ġew trasferiti għal volum akbar, jiġifieri, pjanċi ta' 24-bir, bi tħejjija għall-proċedura ta' subklonazzjoni. Is-subklonazzjoni tal-ibridomi ġeneralment titwettaq b'metodu ta' dilwizzjoni limitata biex jiġi żgurat l-iżolament ta' monokloni stabbli. It-teknika tinvolvi d-dilwizzjoni tal-kulturi tal-ibridomi u t-tixrid tagħhom fi pjanċi ta' 96-bir biex tinkiseb monoklonalità (ċellula waħda għal kull bir). Għandhom isiru mill-inqas żewġ dilwizzjonijiet limitati biex jitnaqqas ir-riskju li jiġu żviluppati popolazzjonijiet imħallta ta' ibridomi.
6

X'inhuma l-benefiċċji tal-użu tat-teknoloġija tal-ibridoma għall-iskoperta ta' antikorpi?

Linji ta' ċelluli ibridi ġew imfaħħra għall-abbiltà tagħhom li jipproduċu antikorpi b'affinità, stabbiltà u speċifiċità għolja bl-aktar mod kosteffettiv.