Servizz ta' Kostruzzjoni ta' Librerija ta' Wirja ta' Fagi

Alpha Lifetech għandha pjattaforma komprensiva ta' wiri tal-faġi M13/T7 biex tiżgura l-kostruzzjoni u l-produzzjoni ta' libreriji ta' antikorpi. Nistgħu nipprovdu wkoll servizzi personalizzati, bħall-produzzjoni ta' scFv ta' antikorpi, biex nilħqu l-bżonnijiet tiegħek.

IKKUNTATTJANA

Servizz ta' Kostruzzjoni ta' Librerija ta' Wirja ta' Fagi

Alpha Lifetech ilha involuta profondament fit-teknoloġija tal-wiri tal-Phage għal ħafna snin. Bniet pjattaforma perfetta u stabbli għat-teknoloġija tal-wiri tal-Phage li tiffranka l-ħin għar-riċerka xjentifika jew għar-riċerka tal-proġett u tiffaċilita l-produzzjoni sussegwenti. Alpha Lifetech tista' wkoll tipprovdi lill-klijenti b'servizzi bħall-produzzjoni ta' antikorpi vhh, il-produzzjoni ta' antikorpi scFv, u l-produzzjoni ta' antikorpi Fab.

Introduzzjoni għall-wiri tal-faġi

It-teknoloġija tal-wiri tal-faġi hija teknika li tuża l-faġi (virus li jinfetta l-batterji) biex tfittex molekuli funzjonali li jorbtu ma' proteini jew peptidi speċifiċi. It-tekniki tal-kostruzzjoni tal-librerija tal-antikorpi tal-faġi jinkludu l-kostruzzjoni tal-librerija tal-antikorpi Fab, il-kostruzzjoni tal-librerija tal-antikorpi scFv, il-kostruzzjoni tal-librerija tan-nanobody, eċċ. Skont it-tipi ta' batterjofaġi, dawn jistgħu jinqasmu f'M13, T7, T4, λ, u sistemi oħra. Skont it-tip ta' librerija, tista' tinqasam f'librerija każwali tal-peptidi, librerija tas-cDNA, librerija tal-antikorpi, u librerija tal-proteini. It-teknoloġija tal-wiri tal-faġi hija sempliċi biex topera u rħisa biex tintuża. Madankollu, din it-teknika tillimita d-diversità tal-ġenetika molekulari fil-librerija li ma tistax tesprimi sekwenzi twal wisq.

Fil-preżent, it-teknoloġija tal-wiri tal-faġi tintuża ħafna. Fost dawn, hemm kisbiet sinifikanti fir-riċerka u l-iżvilupp ta' vaċċini ġodda (vaċċini sintetiċi bi prezz baxx u effiċjenti), l-iżvilupp ta' drogi ta' antikorpi (skrinjar ta' inibituri tal-enzimi), it-trażduzzjoni tas-sinjali taċ-ċelluli (skrinjar ta' epitopi simulati), u r-riċerka ta' epitopi tal-antiġen (preparazzjoni ta' antikorpi monoklonali).

Introduzzjoni għall-Batterjofagu T7

Il-batterjofagu T7 huwa DNA b'żewġ linji, it-tul tad-DNA huwa ta' 40kb u huwa mgeżwer f'kapsid b'dijametru ta' 60nm. Il-konnettur bejn ir-ras u d-denb huwa struttura ċirkolari magħmula minn kopji multipli ta' gp8. Ir-ras u l-qalba tal-batterjofagu t7 jiffurmaw struttura ċilindrika li torbot ma' gp8 u tista' tgħaqqad ir-ras u d-denb.

Fig. 1 Rappreżentazzjoni skematika tal-batterjofagu T7.(Referenza: Avvanzi fis-sistema ta' wiri tal-faġi T7 (Reviżjoni))

Introduzzjoni għall-Batterjofagu M13

Il-batterjofagu M13 jappartjeni għal grupp ta' faġi filamentożi msejħa kollettivament faġi Ff. Għandu tul ta' 900 nm u wisa' ta' 6.5 nm. Fih ġenoma ta' DNA b'fergħa waħda (ssDNA) b'tul ta' 6407 bp li jikkonsisti f'disa' ġeni li jikkodifikaw 11-il proteina differenti. Fosthom, il-ħames proteini huma proteini tal-kisi, u s-sitt proteini huma involuti fir-replikazzjoni u l-assemblaġġ tal-fagu. L-ogħla konċentrazzjoni ta' proteini tal-kisi hija l-proteina kapsidika G8P, li hija magħmula minn madwar 2,700 unità ta' proteina u tifforma envelop madwar il-kromożoma.

Fig. 2 Rappreżentazzjoni skematika tal-batterjofagu M13.(Referenza: Bażiċi tat-Teknoloġija tal-Wiri tal-Fagijiet tal-Antikorpi)

Introduzzjoni għal-Librerija tal-Antikorpi tal-Wiri tal-Fagi

L-iskoperta ta' antikorpi saret dejjem aktar importanti fil-mediċina moderna. Jeżistu approċċi differenti għall-iskoperta ta' antikorpi, iżda l-librerija ta' antikorpi bil-wiri tal-faġi tintuża aktar fix-xjenza medika.

Mill-1990, intużaw formati differenti ta' antikorpi biex jinbnew libreriji ta' faġi, inklużi VHs, VHHs, scFvs, diabodies, u antikorpi Fab. L-scFv magħmul minn dominji strutturali VH u VL huma antikorpi b'katina waħda użati biex jinbnew libreriji ta' scFv ta' antikorpi. L-scFv huwa kkaratterizzat minn half-life qasira u immunoġeniċità baxxa. Il-Librerija tal-Antikorpi Fab tikkonsisti minn VH, VL, CL, u CH1, li jistgħu jiskrinjaw malajr antikorpi ideali b'affinità għolja. L-iżgħar unità li tista' torbot mal-antiġen fil-mira-VHH tikkostitwixxi l-librerija tan-nanobody bħalissa, il-VHH għandha l-vantaġġi ta' struttura sempliċi, volum żgħir, solubilità għolja, stabbiltà tajba, u preparazzjoni u espressjoni faċli. Il-libreriji ta' nanobody sintetiċi (Nb) qed jitfaċċaw bħala alternattiva attraenti għall-immunizzazzjoni tal-annimali għan-nanobody sintetiku stabbli u b'affinità għolja. Ġeneralment, dawn il-frammenti ta' antikorpi huma magħqudin mal-G3P tal-faġ M13, u billi jiġu kklonati għadd kbir ta' ġeni li jikkodifikaw framment ta' antikorpi, jistgħu jiġu ġġenerati libreriji kbar ta' antikorpi li juru l-faġ li minnhom jistgħu jintgħażlu ħafna antikorpi diversi.

Proċess ta' Kostruzzjoni tal-Librerija tal-Fagi

Il-proċess tal-kostruzzjoni tal-librerija tal-faġi huwa kif ġej: primers speċifiċi huma ddisinjati għall-amplifikazzjoni tal-PCR li tikseb il-prodotti, li huma ligati bl-enzima mal-vettur tal-faġi T7/M13, u l-plasmid tal-faġi rikombinanti huwa mibni b'suċċess. Il-plasmid tal-faġi rikombinanti ġie ttrasformat f'ċelloli tar-riċetturi TG1, imbagħad miksi fuq mezz li fih antibijotiċi xierqa, u twettqet kultura estiża wara l-iskrinjar tat-trasformaturi. Wara diversi rawnds ta' kultura, il-faġi jirreplika l-ħinijiet ta' replikazzjoni fil-batterja u jesprimi b'suċċess il-proteina jew il-polipeptid fil-mira. Imbagħad il-librerija tal-faġi hija ppurifikata biex tneħħi xi impuritajiet u faġi mhux marbuta.

Ir-reġjuni varjabbli (VH u VL) kienu korrelati mad-diversità tal-antikorpi, u VH u VL ġew imdaħħla fil-vettur tal-faġi flimkien ma' sekwenza li tikkodifika l-proteina tal-faġi PIII. Wara l-assemblaġġ, il-partiċella tal-faġi tiġi esposta u magħquda mat-terminal N tal-proteina minuri tal-kisi III biex tifforma framment ta' antikorp funzjonali, u b'hekk tinkiseb librerija li fiha s-sekwenza tad-DNA tal-antikorp.

Wara t-tmiem tal-immunizzazzjoni, it-titru ġie skopert, u d-demm tal-annimali ttieħed wara li t-titru ġie kkwalifikat. Il-limfoċiti jiġu iżolati mid-demm, l-RNA jiġi estratt, l-RT-PCR jamplifika l-framment fil-mira, u jinkiseb il-framment tal-ġene tar-reġjun V. Il-ġene V jiġi amplifikat bl-użu ta' primer speċifiku.

Il-libreriji naturali maħluqa jinkludu antikorpi immunoġeniċi fqar fl-annimali li jistgħu jimmiraw lejn kwalunkwe mira. Antikorpi faġiċi li jorbtu speċifikament mal-antiġen jistgħu jinġabru bl-użu ta' tekniki ta' skrinjar li jiffissaw jew jittikkettaw l-antiġen.

L-antiġen fil-mira jiġi ffissat ma' trasportatur solidu, bħal toqba ta' mikropjanċa, jew akkoppjat ma' żibġa manjetika. Il-librerija ta' antikorpi tal-faġi mbagħad tiżdied biex torbtu mal-antiġen. Wara eluzzjonijiet multipli, il-faġi b'affinità baxxa jew mhux speċifiċi jinħaslu u dawk li juru antikorpi speċifiċi jinżammu.

Applikazzjoni tal-Wiri tal-Fagi

*L-iskoperta ta' antikorpi saret dejjem aktar importanti fil-mediċina moderna. Jeżistu approċċi differenti għall-iskoperta ta' antikorpi, iżda t-teknoloġija tal-wiri tal-faġi tintuża aktar fix-xjenza medika. Mill-1990, intużaw formati differenti ta' antikorpi biex jinbnew libreriji tal-faġi, inklużi VHs, VHHs, scFvs, diabodies, u antikorpi Fab.
*Il-libreriji tal-peptidi tal-faġi jippermettu d-determinazzjoni rapida tas-sekwenza tal-epitopi tal-proteini u saru għodda qawwija għall-investigazzjoni tal-interazzjoni bejn l-epitopi u r-riċetturi tal-antiġeni.
*Frammenti ta' antikorpi huma magħquda mal-G3P tal-faġ M13, u billi jiġu kklonati għadd kbir ta' ġeni li jikkodifikaw framment ta' antikorpi, jistgħu jiġu ġġenerati libreriji kbar ta' antikorpi li juru l-faġ li minnhom jistgħu jintgħażlu ħafna antikorpi diversi.
*Is-sistema tal-wiri tal-faġi T7 għandha ħafna vantaġġi, inklużi s-sempliċità, is-sigurtà għolja, l-istabbiltà, il-ħażna faċli, u t-trasport, għalhekk is-sistema tintuża f'vaċċini preventivi u terapewtiċi.
*Is-sistema tal-wiri tal-faġi T7 tista' tiskopri diversi antiġeni, bħal antiġeni tal-wiċċ ta' mikro-organiżmi patoġeniċi u antiġeni tal-kanċer.

Faġju

GĦALIEX TAGĦŻELNA

Alpha Lifetech tista' wkoll tipprovdi lill-klijenti b'servizzi bħall-produzzjoni ta' antikorpi vhh, il-produzzjoni ta' antikorpi scFv, u l-produzzjoni ta' antikorpi Fab.