L-antikorp VHH huwa antikorp naturali ta' katina ħafifa nieqsa (VL) li jinstab fis-serum tal-annimali tal-iġmla. L-istruttura tal-antikorp VHH hija sempliċi u tikkonsisti f'żewġ ktajjen tqal (VH) biss. In-nanobodies jinkludu reġjun varjabbli ta' katina tqila (VHH) b'piż molekulari ta' madwar 15 kDa. L-antikorp VHH għandu l-abbiltà normali li jagħraf l-antiġeni u juri affinità eċċellenti, speċifiċità eċċellenti, stabbiltà eċċellenti, u penetrazzjoni eċċellenti. Antikorpi għal din l-istruttura minn dakinhar instabu f'annimali oħra, bħall-alpakas u l-klieb il-baħar. In-nanobodies, li fihom biss reġjun varjabbli ta' katina tqila wieħed u żewġ reġjuni konvenzjonali CH2 u CH3, minkejja li m'għandhomx dominju VL, huma antikorp ta' dominju wieħed stabbli ħafna u l-iżgħar unità ta' rbit magħrufa b'attività ta' antikorpi. Alpha Lifetech tista' tipprovdi lill-klijenti b'inkluż preparazzjoni ta' nanobodies, kostruzzjoni u skrinjar ta' librerija ta' nanobodies, espressjoni ta' nanobodies VHH, u serje ta' servizzi, permezz tas-sintesi tan-nanobodies u l-pjattaforma ta' żvilupp tal-wiri tal-faġi, tista' tibni u skrinja b'mod effiċjenti inkluż varjetà ta' tipi differenti ta' librerija ta' antikorpi tal-faġi, tipprovdi lill-klijenti tagħna b'soluzzjonijiet ta' antikorpi speċifiċi u ta' speċifiċità għolja. Nistgħu niżviluppaw ukoll strateġiji professjonali ta' umanizzazzjoni tal-antikorpi għall-klijenti tagħna, li jistgħu jiġu umanizzati għal nanobodies, u l-kumpanija tagħna hija kważi ekwivalenti għall-antikorpi umani.

L-ewwel, l-alpaka mingħajr ebda marda, tippermetti lill-immunoġeni jistimulaw is-sistema immunitarja tagħha biex tipproduċi rispons immuni, u dawn l-annimali jistgħu jipproduċu antikorpi ta' dominju wieħed. Imbagħad, iżolajna ċelluli B singoli mill-PBMC tal-alpaka, u l-RNA miċ-ċelluli B ġie estratt u traskritt f'cDNA. Fl-aħħarnett użajna bħala mudell u skrinjajna s-sekwenza VHH fil-mira tagħna permezz ta' elettroforesi. Sussegwentement, wettaqna analiżi tas-sekwenzar tas-sekwenza tal-antikorpi VHH skrinjata, li tista' ttejjeb l-istabbiltà u l-affinità tal-antikorpi VHH ippreparati. Fl-istess ħin, nistgħu nwettqu wkoll mutaġenesi diretta lejn is-sit u skrinjar tal-istabbiltà tal-antikorpi VHH. Nistgħu niksbu stabbiltà ogħla tal-mutanti tal-antikorpi VHH billi nintroduċu metodi speċjali bħal ċerti mutazzjonijiet speċifiċi għall-iskrinjar. L-inġinier imbagħad daħħal is-sekwenza VHH li tirriżulta fil-vettur ta' espressjoni xieraq (bħal plasmidi, viruses, eċċ.) għall-espressjoni tal-antikorpi VHH. Fl-aħħarnett, permezz tat-teknoloġija tal-wiri tal-faġi jew it-teknoloġija tal-wiri tal-ħmira, l-antikorpi VHH huma espressi fuq il-wiċċ tal-ospitant, u mbagħad in-nanoantikorpi li jistgħu jorbtu speċifikament mal-antiġen fil-mira huma magħżula bl-użu ta' antiġeni miksija u ELISA. Alpha Lifetech issekwenzat u vverifikat ukoll in-nanobodies magħżula biex tiżgura l-korrettezza u l-attività funzjonali tas-sekwenzi tan-nanobodies imwassla lill-klijenti.

It-teknoloġija VHH tieħu vantaġġ minn diversi avvanzi fl-inġinerija ġenetika, sabiex il-ġene fil-mira jerġa' jiġi rranġat u rranġat mill-ġdid flimkien taħt ċirkostanzi normali, li jista' jipprovdi għodda ta' rbit għoli għal teknoloġiji oħra, li jistgħu jkun fihom diversi tikketti, u l-antikorpi prodotti mit-teknoloġija VHH huma konvenjenti għall-purifikazzjoni. Bl-użu ta' tekniki ta' skrinjar b'rendiment għoli, Alpha Lifetech tista' tiskrinja antikorpi VHH b'funzjonijiet speċifiċi meħtieġa mill-klijenti minn numru kbir ta' antikorpi f'perjodu qasir. Sadanittant, l-antikorpi VHH jistgħu jiġu prodotti b'mod indefinit u ekonomiku, meta l-antikorpi VHH ikunu esposti għal temperaturi għoljin u solventi oħra. L-antikorpi VHH jistgħu jiġu mmanipulati ġenetikament biex jiġġeneraw użi oħra, bħal li jsiru scaffolds, ittikkettar, u tibdil ta' aċidi amminiċi speċifiċi. L-antikorpi VHH huma adattati għal kwalunkwe pjattaforma komuni li tuża antikorpi konvenzjonali, bħal pjanċi mikrotitrazzjoni, bijosensuri elettrokimiċi, u apparati ta' fluss laterali. Minħabba d-daqs iżgħar tal-antikorpi VHH jista' jkollhom densità ogħla fid-dominju tal-irbit, b'tali mod li l-antikorpi VHH ikollhom vantaġġ eċċellenti f'sinjal miżjud u għalhekk sensittività ogħla. Fl-istess ħin, l-antikorp VHH għandu applikazzjoni wiesgħa ħafna fid-dijanjosi u t-trattament tat-tumuri, id-dijanjosi tal-infjammazzjoni, it-trattament ta' mard tas-sistema nervuża ċentrali, u oqsma oħra. L-antikorpi VHH huma partikolarment utli għall-monitoraġġ tal-mikotossini fl-ikel u l-għalf għaliex huma faċilment inġinerizzati ġenetikament u għandhom stabbiltà eċċellenti.

Fil-proċess ta' immunizzazzjoni, nużaw varjetà ta' immunoġeni. Skont il-proprjetajiet tal-immunoġeni, nistgħu niddistingwuhom f'antiġeni naturali, antiġeni rikombinanti, antiġeni sintetiċi, u antiġeni ta' molekuli żgħar. L-antiġeni naturali jinkludu immunoġeni virali. Il-proċess ta' purifikazzjoni tal-immunoġeni naturali huwa kkumplikat, li huwa wkoll aktar diffiċli minn immunoġeni oħra, u l-ispiża tal-purifikazzjoni hija wkoll ogħla. L-immunoġenu virali huwa maqsum f'vaċċin inattivat bil-virus sħiħ, vaċċin tas-subunità, vaċċin tal-vettur virali, u vaċċin tal-mRNA. Il-vaċċin inattivat bil-virus sħiħ jista' jistimula l-ġisem biex jipproduċi rispons immuni, iżda l-virus jeħtieġ li jiġi inattivat kompletament, u l-proċess ta' preparazzjoni huwa aktar kkumplikat. Għall-vaċċin tas-subunità, użajna biss il-proteina tal-wiċċ virali bħala l-antiġen, għalhekk is-sigurtà ta' dan l-immunoġenu hija għolja, iżda l-aġġuvant jeħtieġ li jiżdied biex itejjeb l-effett immuni. Wara l-modifika ġenetika, l-adenovirus u l-lentivirus jintużaw bħala vetturi biex jinduċu l-okkorrenza ta' rispons immuni permezz tar-replikazzjoni u l-espressjoni virali. L-effett immuni huwa effiċjenti u dejjiemi, iżda l-proċess ta' preparazzjoni huwa kumpless, għalhekk irridu nikkontrollaw b'mod strett il-bijosigurtà. Filwaqt li l-mRNA jista' jiġi importat direttament fiċ-ċelloli, sabiex iċ-ċelloli jkunu jistgħu jesprimu l-antiġen u jistimulaw l-okkorrenza ta' rispons immuni, dan il-proċess huwa aktar diffiċli, u dan jirrikjedi li niżguraw l-istabbiltà u l-effiċjenza tal-kunsinna tal-mRNA. Għalkemm l-antiġeni rikombinanti huma differenti fil-konformazzjoni mill-antiġeni naturali, jistgħu jgħaddu minn produzzjoni industrijali estensiva. Proteini ta' molekuli żgħar jew antiġeni polipeptidiċi jistgħu jiġu ppreparati b'metodi ta' sinteżi in vitro. L-istruttura tagħhom hija kontrollabbli, iżda tista' tkun ikkumplikata fid-disinn. L-antiġeni ta' molekuli żgħar huma l-aktar komposti ta' molekuli żgħar bħal peptidi u nukleotidi, għaliex mhumiex immunoġeniċi waħedhom, għalhekk jistgħu jintużaw biss bħala immunoġeni wara konnessjoni ma' trasportaturi makromolekulari.

Il-piż molekulari tan-nanoantikorpi huwa żgħir ħafna, ġeneralment madwar 12-15 kDa, wieħed biss minn għaxra tal-antikorp IgG tradizzjonali. L-istruttura kristallina hija ballun tar-rugby b'dijametru ta' madwar 2.5nm u tul ta' madwar 4.2nm. L-istruttura molekulari unika tippermetti penetrazzjoni tajba fit-tessuti, half-life iqsar, u tneħħija renali ogħla, mill-barriera bejn id-demm u l-moħħ. In-nanoantikorpi jikkonsistu f'reġjuni determinanti u ta' sinsla komplementari. Reġjuni ta' deċiżjoni komplementari jinkludu CDR 1, CDR 2, u CDR 3. Il-medda ta' tul ta' 3 sa 28 aċidu amminiku fir-reġjun CDR 3 tiżgura l-kapaċità tal-ħażna tal-librerija tan-nanoantikorpi. Meta mqabbel mar-reġjun CDR 3 tal-antikorpi tradizzjonali ta' 8 sa 15-il aċidu amminiku biss, xi wħud mir-reġjuni CDR 3 b'CDR 3 itwal għenuna nidentifikaw epitopi moħbija fuq il-wiċċ tal-antiġen. Ir-reġjun ewlieni tan-nanobodies jinkludi FR 1, FR 2, FR 3, u FR 4, b'erba' mutazzjonijiet idrofiliċi ta' amino acidi fuq FR 2, u din il-mutazzjoni ttejjeb is-solubilità tal-ilma tal-antikorp. Ir-rabta speċjali tad-disulfid bejn CDR 1 u CDR 3 ttejjeb l-istabbiltà tal-antikorpi taħt pressjoni għolja, temperatura għolja, denaturanti, u kundizzjonijiet oħra, li hija favorevoli għall-produzzjoni u l-preservazzjoni tan-nanobodies, u toħloq ukoll il-possibbiltà ta' metodi ġodda ta' amministrazzjoni.