ပေါင်းစပ်ထားသော ပဋိပစ္စည်း စာကြည့်တိုက်များအကြောင်း မိတ်ဆက်ခြင်း

De novo library ဟုလည်း လူသိများသော ပေါင်းစပ်ထားသော antibody library သည် DNA ပေါင်းစပ်မှု သို့မဟုတ် phage display ကဲ့သို့သော နည်းပညာများကို အသုံးပြု၍ framework regions များနှင့် CDRs များအပါအဝင် ပြီးပြည့်စုံသော antibody variable regions များကို ဒီဇိုင်းဆွဲပြီး ပေါင်းစပ်သည့် ပေါင်းစပ်နည်းလမ်းတစ်ခုဖြစ်သည်။ naïve antibody library များကို မှီခိုစရာမလိုဘဲ။

တစ်ဝက်ပေါင်းစပ်ပဋိပစ္စည်းစာကြည့်တိုက်ကို သဘာဝအတိုင်းဖြစ်ပေါ်လာသော ပဋိပစ္စည်းစာကြည့်တိုက်များနှင့် ပေါင်းစပ်မျိုးကွဲများကို ပေါင်းစပ်ခြင်းဖြင့် ဖန်တီးထားသည်။ ၎င်းတွင် ပုံမှန်အားဖြင့် DNA အိုလီဂိုနယူကလီယိုတိုက်များကို ပေါင်းစပ်ခြင်းဖြင့် မတူညီသော ဖြည့်စွက်ဆုံးဖြတ်သည့်ဒေသများ (CDR) အစုံကို ထုတ်လုပ်ပြီး လူသား သို့မဟုတ် တိရစ္ဆာန် B ဆဲလ်များကဲ့သို့သော သဘာဝအရင်းအမြစ်များမှ ရရှိသော မပြောင်းလဲနိုင်သော ပဋိပစ္စည်းဘောင်နှင့် ပေါင်းစပ်ထားသည်။ ပေါင်းစပ်ထားသော CDR သည် စာကြည့်တိုက်ထဲသို့ မျိုးကွဲများကို မိတ်ဆက်ပေးပြီး epitopes အမျိုးမျိုးကို ပစ်မှတ်ထားသော ပဋိပစ္စည်းများကို ဖြစ်ပေါ်စေပါသည်။ တစ်ဝက်ပေါင်းစပ်ပဋိပစ္စည်းစာကြည့်တိုက်သည် ကိုယ်ခံအားစနစ်၏ သဘာဝမျိုးကွဲနှင့် ပေါင်းစပ်နည်းလမ်းများမှတစ်ဆင့် ရရှိသော ထိန်းချုပ်ထားသော မျိုးကွဲများအကြား ညှိနှိုင်းမှုတစ်ခုကို ပေးစွမ်းသည်။

naïve နှင့် synthetic antibody libraries များ၏ ကွာခြားချက်သည် immunoglobulin မျိုးဗီဇများ၏ အရင်းအမြစ်ပေါ်တွင် မူတည်ပါသည်။ တစ်ချိန်တည်းမှာပင်၊ semi-synthesized နှင့် synthesized antibody library ၏ ကွာခြားချက်မှာ naïve antibody segment များ၏ အစိတ်အပိုင်းများဖြစ်သည့် light chain သို့မဟုတ် heavy chain ပါဝင်ပြီး ၎င်းတို့ထဲမှ တစ်ခုကိုသာ in vitro တွင် ပေါင်းစပ်ထုတ်လုပ်ထားပြီး၊ ပေါင်းစပ်ထုတ်လုပ်ထားသော တစ်ခုကို in vitro မှတစ်ဆင့် PCR ဖြင့် အတုပေါင်းစပ်မှုမှ လုံးဝရယူထားခြင်းဖြစ်သည်။

Alpha Lifetech က ပံ့ပိုးပေးနိုင်ပါတယ်

အယ်လ်ဖာ လိုက်ဖ်တက်ခ် ကော်ပိုရေးရှင်းကျွန်ုပ်တို့၏ ပရော်ဖက်ရှင်နယ် ပဋိပစ္စည်း ရှာဖွေတွေ့ရှိမှု ပလက်ဖောင်းကို အခြေခံ၍ တိရစ္ဆာန်များနှင့် လူသားများထံမှ တစ်ဝက်ပေါင်းစပ်/ပေါင်းစပ်ထားသော ပဋိပစ္စည်း စာကြည့်တိုက်ကို ပေးဆောင်နိုင်ပါသည်။ မျိုးရိုးဗီဇ ပြုပြင်မွမ်းမံခြင်းနှင့် စာကြည့်တိုက် တည်ဆောက်ခြင်းတွင် နှစ်ပေါင်းများစွာ အတွေ့အကြုံရှိသောကြောင့် သဘာဝ ပဋိပစ္စည်းများထက် ကျော်လွန်သော ဆွဲငင်အားနှင့် သီးခြားဖြစ်မှုရှိသော ဓာတုပဋိပစ္စည်းများကို ထုတ်လုပ်နိုင်သည့် ပေါင်းစပ်ထားသော စာကြည့်တိုက်များကို တည်ဆောက်နိုင်ပါသည်။အယ်လ်ဖာ လိုက်ဖ်တက်ခ်ရဲ့10^8 – 10^10 သီးခြား clones များပါ၀င်သည့် antibody library တစ်ခုတည်ဆောက်ရာတွင် အောင်မြင်မှုနှုန်းမြင့်မားစွာကို ကျွန်ုပ်တို့အာမခံနိုင်ကြောင်း ကျွမ်းကျင်သူများက ဂုဏ်ယူစွာကြေငြာအပ်ပါသည်။

အယ်လ်ဖာ လိုက်ဖ်တက်ခ် ကော်ပိုရေးရှင်းscFv၊ Fab၊ VHH antibody နှင့် စိတ်ကြိုက်စာကြည့်တိုက်များ အပါအဝင် ကမ္ဘာလုံးဆိုင်ရာ သုတေသီများ၏ မတူကွဲပြားသော လိုအပ်ချက်များကို ဖြည့်ဆည်းပေးရန်အတွက် ပြီးပြည့်စုံသော antibody library တည်ဆောက်ရေး ဝန်ဆောင်မှုများကို ပေးဆောင်ရသည့်အတွက် ဂုဏ်ယူမိပါသည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ ရည်ရွယ်ချက်မှာ မတူညီသော ဖောက်သည်များ၏ လိုအပ်ချက်များကို နားလည်ပြီး ဖြည့်ဆည်းပေးရန်နှင့် သုတေသနလုပ်ငန်းတွင် လာမည့်နှင့် ပေါ်ပေါက်လာသော ပြဿနာများကို ကူညီဖြေရှင်းပေးရန်ဖြစ်သည်။

ပေါင်းစပ်ထားသော ပဋိပစ္စည်းစာကြည့်တိုက်များ တည်ဆောက်ခြင်း ဝန်ဆောင်မှုလုပ်ငန်းစဉ်

ဒီဇိုင်း
ဒီဇိုင်းအဆင့်တွင် ရှိပြီးသား antibody sequences သို့မဟုတ် structural data များအပေါ်အခြေခံ၍ antibody frameworks များနှင့် complementarity-determining regions (CDRs) များကို ရွေးချယ်ခြင်း ပါဝင်သည်။ ဓာတုဗေဒနည်းဖြင့်ပြုလုပ်ထားသော CDR antibodies များကို သီးခြားလုပ်ဆောင်ချက်များကို မိတ်ဆက်ပေးရန် သို့မဟုတ် binding properties များကို မြှင့်တင်ရန်လည်း ဒီဇိုင်းထုတ်နိုင်သည်။

ပေါင်းစပ်ခြင်း
ဘောင်ဒေသများနှင့် CDR နှစ်မျိုးလုံးအပါအဝင် ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသော antibody sequences များကို encode လုပ်ထားသော ဓာတုဗေဒနည်းဖြင့် ဖန်တီးထားသော DNA ကို ဓာတုဗေဒ သို့မဟုတ် အင်ဇိုင်းနည်းလမ်းများကို အသုံးပြု၍ ပေါင်းစပ်ထုတ်လုပ်သည်။

တပ်ဆင်ခြင်း
ပေါင်းစပ်ထားသော DNA အပိုင်းအစများကို PCR၊ ligation သို့မဟုတ် Gibson assembly ကဲ့သို့သော နည်းပညာများကို အသုံးပြု၍ antibody expression vectors များအဖြစ် စုစည်းထားသည်။ ထို့နောက် ဤ vectors များကို antibody ထုတ်လုပ်ရန်အတွက် ဘက်တီးရီးယား၊ တဆေး သို့မဟုတ် နို့တိုက်သတ္တဝါဆဲလ်များကဲ့သို့သော expression စနစ်များထဲသို့ ထည့်သွင်းနိုင်သည်။

စိစစ်ခြင်းနှင့် ရွေးချယ်ခြင်း
တည်ဆောက်ထားသော ပဋိပစ္စည်းစာကြည့်တိုက်များကို မြင့်မားသော throughput စစ်ဆေးခြင်းနည်းလမ်းများကို အသုံးပြု၍ လိုချင်သော ဂုဏ်သတ္တိများရှိသော ပဋိပစ္စည်းများအတွက် စစ်ဆေးပြီး ရွေးချယ်ထားသည်။ ၎င်းတွင် စာကြည့်တိုက်ပုံစံနှင့် အသုံးချမှုပေါ် မူတည်၍ phage display၊ yeast display သို့မဟုတ် ribosome display ကဲ့သို့သော နည်းစနစ်များ ပါဝင်နိုင်သည်။

ပေါင်းစပ်ထားသော ပဋိပစ္စည်းစာကြည့်တိုက်များ တည်ဆောက်ရေးဝန်ဆောင်မှု

အယ်လ်ဖာ လိုက်ဖ်တက်ခ် ကော်ပိုရေးရှင်းCre-lox site-specific recombination system ကို အသုံးပြု၍ လေးလံသောနှင့် ပေါ့ပါးသော chain V-gene repertoires များကို phage vector ထဲသို့ ချိတ်ဆက်ခြင်းဖြင့် antibody libraries များ၏ one-stop ဒီဇိုင်းနှင့် ပေါင်းစပ်ထားသော ဝန်ဆောင်မှုကို ပေးဆောင်ပြီး 6.5 × 10^10 clones များပါဝင်သည့် phage ပေါ်တွင်ပြသထားသော Fabs များ၏ repertoire ကို ဖန်တီးပါသည်။ library သည် nanomolar affinities ရှိသော antigens အများအပြားကို ဆန့်ကျင်သည့် Abs များကို ထုတ်ပေးခဲ့သည်။ human antibody library ကို ထုတ်ပေးခြင်းသည် M13 phage display နည်းပညာ (အောက်ပါပုံတွင် ပြထားသည်) ပေါ်တွင် အခြေခံသည်။