एन्टिबडी इन्जिनियरिङ भनेको के हो?

एन्टिबडी इन्जिनियरिङको सहयोगमा, एन्टिबडीहरूको आणविक आकार, फार्माकोकाइनेटिक्स, इम्युनोजेनिसिटी, बाइन्डिङ आत्मीयता, विशिष्टता र प्रभावकारी कार्यलाई परिमार्जन गर्न सम्भव भएको छ। एन्टिबडीहरूको संश्लेषण पछि, एन्टिबडीहरूको विशिष्ट बाइन्डिङले तिनीहरूलाई क्लिनिकल निदान र उपचारमा अत्यधिक मूल्यवान बनाउँछ। एन्टिबडी इन्जिनियरिङ मार्फत, तिनीहरूले औषधि र निदानको प्रारम्भिक विकासको आवश्यकताहरू पूरा गर्न सक्छन्।

एन्टिबडी इन्जिनियरिङको उद्देश्य प्राकृतिक एन्टिबडीहरूले प्राप्त गर्न नसक्ने अत्यधिक विशिष्ट, स्थिर कार्यहरू डिजाइन र उत्पादन गर्नु हो, जसले गर्दा चिकित्सीय एन्टिबडीहरूको उत्पादनको लागि जग बसालिन्छ।

एन्टिबडी इन्जिनियरिङमा व्यापक परियोजना अनुभवको साथ, अल्फा लाइफटेकले धेरै प्रजातिहरूको लागि अनुकूलित मोनोक्लोनल र पोलिक्लोनल एन्टिबडी सेवाहरू, साथै फेज डिस्प्ले एन्टिबडी लाइब्रेरी निर्माण र स्क्रिनिङ सेवाहरू प्रदान गर्न सक्छ। अल्फा लाइफटेकले ग्राहकहरूलाई कुशल, अत्यधिक विशिष्ट र स्थिर एन्टिबडीहरू उत्पादन गर्न गुणस्तरीय बायोसिमिलर एन्टिबडीहरू र पुनः संयोजक प्रोटीन उत्पादनहरू, साथै सम्बन्धित सेवाहरू प्रदान गर्न सक्छ। व्यापक एन्टिबडी, प्रोटीन प्लेटफर्महरू र फेज डिस्प्ले प्रणालीहरू प्रयोग गरेर, हामी एन्टिबडी उत्पादनको अपस्ट्रीम र डाउनस्ट्रीमलाई समेट्ने सेवाहरू प्रदान गर्दछौं, जसमा एन्टिबडी मानवीकरण, एन्टिबडी शुद्धीकरण, एन्टिबडी अनुक्रमण, र एन्टिबडी प्रमाणीकरण जस्ता प्राविधिक सेवाहरू समावेश छन्।

एन्टिबडी इन्जिनियरिङको अग्रगामी चरण दुई प्रविधिहरूसँग सम्बन्धित छ:

--पुनः संयोजक डीएनए प्रविधि

--हाइब्रिडोमा प्रविधि

एन्टिबडी इन्जिनियरिङको द्रुत विकास तीन महत्त्वपूर्ण प्रविधिहरूसँग सम्बन्धित छ:

--जीन क्लोनिंग प्रविधि र पोलिमरेज चेन प्रतिक्रिया

--प्रोटिन अभिव्यक्ति: पुन: संयोजक प्रोटिनहरू खमीर, रड-आकारको भाइरस, र बोटबिरुवाहरू जस्ता अभिव्यक्ति प्रणालीहरूद्वारा उत्पादन गरिन्छ।

--कम्प्युटर सहायता प्राप्त संरचनात्मक डिजाइन

पहिलो पुस्ताको एन्टिबडीलाई काइमेरिक एन्टिबडी उत्पादनको लागि मानवीकृत गरिएको थियो, जहाँ माउस मोनोक्लोनल एन्टिबडीको परिवर्तनशील क्षेत्र मानव IgG अणुहरूको स्थिर क्षेत्रसँग जोडिएको थियो। दोस्रो पुस्ताको माउस मोनोक्लोनल एन्टिबडीको एन्टिजेन बाइन्डिङ क्षेत्र (CDR) मानव IgG मा प्रत्यारोपण गरिएको थियो। CDR क्षेत्र बाहेक, अन्य सबै एन्टिबडीहरू लगभग मानव एन्टिबडीहरू हुन्, र मानव उपचारको लागि माउस क्लोन एन्टिबडीहरू प्रयोग गर्दा मानव एन्टि माउस एन्टिबडी (HAMA) प्रतिक्रियाहरू प्रेरित गर्नबाट बच्न प्रयासहरू गरिएको थियो।

 

फेज डिस्प्ले लाइब्रेरी निर्माण गर्न, पहिलो चरण भनेको एन्टिबडीहरू एन्कोड गर्ने जीनहरू प्राप्त गर्नु हो, जुन प्रतिरक्षा गरिएका जनावरहरूको बी कोषहरूबाट अलग गर्न सकिन्छ (प्रतिरक्षा पुस्तकालय निर्माण), गैर-प्रतिरक्षा गरिएका जनावरहरूबाट सिधै निकाल्न सकिन्छ (प्राकृतिक पुस्तकालय निर्माण), वा एन्टिबडी जीन टुक्राहरू (सिंथेटिक पुस्तकालय निर्माण) सँग इन भिट्रो भेला गर्न सकिन्छ। त्यसपछि, जीनहरू PCR द्वारा प्रवर्द्धित हुन्छन्, प्लाज्मिडहरूमा घुसाइन्छन्, र उपयुक्त होस्ट प्रणालीहरूमा व्यक्त गरिन्छ (खमीर अभिव्यक्ति (सामान्यतया पिचिया पास्टोरिस), प्रोकारियोटिक अभिव्यक्ति (सामान्यतया E. coli), स्तनधारी कोष अभिव्यक्ति, बिरुवा कोष अभिव्यक्ति, र रड-आकारको भाइरसबाट संक्रमित कीरा कोष अभिव्यक्ति)। सबैभन्दा सामान्य E. coli अभिव्यक्ति प्रणाली हो, जसले फेजमा एक विशिष्ट एन्कोडिङ एन्टिबडी अनुक्रमलाई एकीकृत गर्दछ र फेज शेल प्रोटीनहरू मध्ये एकलाई एन्कोड गर्दछ (pIII वा pVIII)। ब्याक्टेरियोफेजहरूको सतहमा प्रदर्शित, र जीन फ्यूजन। यस प्रविधिको मूल फेज डिस्प्ले लाइब्रेरी निर्माण गर्नु हो, जसको प्राकृतिक पुस्तकालयहरू भन्दा फाइदा छ किनभने यसमा विशिष्ट बन्धन हुन सक्छ। त्यसपछि, एन्टिजेन विशिष्टता भएका एन्टिबडीहरूलाई जैविक चयन प्रक्रिया मार्फत जाँच गरिन्छ, लक्ष्य एन्टिजेनहरू निश्चित गरिन्छन्, अनबाउन्ड फेजहरू बारम्बार धोइन्छ, र थप संवर्धनको लागि बाउन्ड फेजहरू धोइन्छ। तीन वा बढी राउन्ड दोहोरिने पछि, उच्च विशिष्टता र उच्च आत्मीयता एन्टिबडीहरू अलग गरिन्छन्।

चित्र ३: एन्टिबडी पुस्तकालय निर्माण र स्क्रिनिङ

पुनः संयोजक डीएनए प्रविधि एन्टिबडी टुक्राहरू उत्पन्न गर्न प्रयोग गर्न सकिन्छ। फ्याब एन्टिबडीहरूलाई सुरुमा ग्यास्ट्रिक प्रोटीजद्वारा हाइड्रोलाइज गरेर (फ्याब ') २ टुक्राहरू उत्पादन गर्न सकिन्छ, जुन त्यसपछि व्यक्तिगत फ्याब टुक्राहरू उत्पन्न गर्न पपेनद्वारा पचाइन्छ। Fv टुक्रामा VH र VL हुन्छन्, जसमा डाइसल्फाइड बन्धनको अभावका कारण कमजोर स्थिरता हुन्छ। त्यसकारण, VH र VL लाई १५-२० एमिनो एसिडको छोटो पेप्टाइड मार्फत जोडिएको हुन्छ जसले लगभग २५KDa को आणविक वजन भएको एकल चेन भेरिएबल टुक्रा (scFv) एन्टिबडी बनाउँछ।

क्यामेलिडे (क्यामेल, लियामा, र अल्पाका) मा एन्टिबडी संरचनाको अध्ययनले एन्टिबडीहरूमा केवल भारी चेनहरू हुन्छन् र कुनै प्रकाश चेनहरू हुँदैनन् भन्ने कुरा स्पष्ट पारेको छ, त्यसैले तिनीहरूलाई हेभी चेन एन्टिबडीहरू (hcAb) भनिन्छ। हेभी चेन एन्टिबडीहरूको परिवर्तनशील डोमेनलाई एकल डोमेन एन्टिबडीहरू वा न्यानोबडीहरू वा VHH भनिन्छ, जसको आकार १२-१५ kDa हुन्छ। मोनोमरहरूको रूपमा, तिनीहरूसँग कुनै डाइसल्फाइड बन्धन हुँदैन र धेरै स्थिर हुन्छन्, एन्टिजेनहरूको लागि धेरै उच्च आत्मीयता हुन्छ।

चित्र ५: हेभी चेन एन्टिबडी र VHH/न्यानोबडी

कोष मुक्त अभिव्यक्तिले प्राकृतिक वा कृत्रिम डीएनएको अभिव्यक्तिलाई इन भिट्रो प्रोटीन संश्लेषण प्राप्त गर्न प्रयोग गर्दछ, सामान्यतया ई. कोलाई अभिव्यक्ति प्रणाली प्रयोग गरेर। यसले छिटो प्रोटीन उत्पादन गर्दछ र भिभोमा ठूलो मात्रामा पुन: संयोजक प्रोटीनहरू उत्पादन गर्दा कोषहरूमा मेटाबोलिक र साइटोटोक्सिक बोझबाट बचाउँछ। यसले प्रोटीनहरू पनि उत्पादन गर्न सक्छ जुन संश्लेषण गर्न गाह्रो हुन्छ, जस्तै अनुवाद पछि परिमार्जन गर्न वा झिल्ली प्रोटीनहरू संश्लेषण गर्न गाह्रो हुन्छ।