१९६० मा, द्विविशिष्ट एन्टिबडीहरूको अवधारणा प्रस्ताव गरिएको थियो। द्विविशिष्ट एन्टिबडीहरू, जसलाई द्विविशिष्ट मोनोक्लोनल एन्टिबडीहरू पनि भनिन्छ, आनुवंशिक इन्जिनियरिङ प्रविधि प्रयोग गरेर कृत्रिम रूपमा संश्लेषित एन्टिबडीहरू हुन्। एक ईन्जिनियर गरिएको कृत्रिम एन्टिबडीको रूपमा, द्विविशिष्ट एन्टिबडीहरू सामान्यतया IgG उपवर्गसँग सम्बन्धित हुन्छन् र CD3 सबयुनिटलाई लक्षित गर्ने एन्टिजेन बाइन्डिङ टुक्रा हुन्छन्। द्विविशिष्ट एन्टिबडीहरूमा दुई विशिष्ट एन्टिजेन बाइन्डिङ साइटहरू हुन्छन् जुन एकै साथ दुई फरक एन्टिजेनहरू, वा एन्टिजेनको दुई फरक एपिटोपहरू बाँध्न र पहिचान गर्न सक्छन्। मोनोक्लोनल एन्टिबडीहरूको तुलनामा, द्विविशिष्ट एन्टिबडीहरूमा एक अतिरिक्त विशिष्ट एन्टिजेन बाइन्डिङ साइट हुन्छ, यसरी बलियो विशिष्टता र लक्ष्यीकरण क्षमता हुन्छ, जसले ट्युमर कोशिकाहरूलाई अझ सही रूपमा लक्षित गर्न सक्छ र लक्षित विषाक्तता कम गर्न सक्छ। द्विविशिष्ट एन्टिबडीहरूले एकै साथ धेरै जैविक कार्यहरू गर्न सक्छन्, जस्तै प्रतिरक्षा कोशिकाहरू भर्ती गर्ने, संकेत गर्ने मार्गहरू अवरुद्ध गर्ने, र ट्युमर कोशिकाहरूलाई प्रत्यक्ष रूपमा मार्ने। प्रारम्भिक द्विविशिष्ट एन्टिबडीहरू मुख्यतया रासायनिक संयुग्मन वा कोशिका फ्युजन मार्फत तयार पारिएका थिए, तर यो विधि अनियमित संयोजन र लक्ष्य संयोजनलाई अलग गर्न कठिनाइको कारणले बिस्तारै अगाडि बढेको हुन सक्छ। आनुवंशिक इन्जिनियरिङ प्रविधिको निरन्तर विकाससँगै, धेरै नयाँ प्रविधि प्लेटफर्महरू विकास भएका छन्, जस्तै नट्स इन होल (KIH), क्रसम्याब, DVD Ig, आदि। यी प्लेटफर्महरूले हेभी चेन र लाइट चेन बेमेल जस्ता समस्याहरूलाई प्रभावकारी रूपमा समाधान गर्छन्, र द्विविशिष्ट एन्टिबडीहरूको एकरूपता र उपजमा सुधार गर्छन्।

द्विविशिष्ट एन्टिबडी उत्पादनको मुख्य विधिहरूमा रासायनिक युग्मन, चार स्रोत हाइब्रिडोमा, र आनुवंशिक इन्जिनियरिङ एन्टिबडी तयारी समावेश छ। ती मध्ये, रासायनिक युग्मन विधिले phthalimide र dithioacylbenzoic एसिड जस्ता रासायनिक युग्मन एजेन्टहरू प्रयोग गरेर दुई अक्षुण्ण IgG वा दुई F (ab ') 2 एन्टिबडी टुक्राहरूलाई द्विविशिष्ट एन्टिबडीहरूमा जोड्छ। यो विधि सरल र सञ्चालन गर्न सजिलो छ, तर यसले एन्टिजेन बाइन्डिङ साइटलाई क्षति पुर्‍याउन सक्छ, एन्टिबडी गतिविधि घटाउन सक्छ, र युग्मन एजेन्ट आफैंमा पनि एक निश्चित डिग्री कार्सिनोजेनिसिटी हुन्छ। चार स्रोत हाइब्रिडोमा विधि सम्बन्धित माउस IgG व्यक्त गर्न दुई फरक हाइब्रिडोमा सेल लाइनहरूबाट सोमाटिक कोशिकाहरूको फ्यूजनमा आधारित छ। आनुवंशिक इन्जिनियरिङ प्रविधि मार्फत, एन्टिबडीहरूलाई द्विविशिष्ट एन्टिबडीहरू बनाउन आनुवंशिक रूपमा परिमार्जन गर्न सकिन्छ। दुई फरक मोनोक्लोनल एन्टिबडीहरू निर्माण गरिएका थिए, र दुई एन्टिबडीहरूको Fab टुक्राहरू वा भारी चेन र प्रकाश चेन चर क्षेत्रहरू अलग-अलग क्लीभ गरिएका थिए। क्रस-लिङ्किङ प्रतिक्रिया वा चेन पुनर्संयोजन प्रविधि मार्फत, दुई टुक्राहरूलाई द्विविशिष्ट एन्टिबडी बनाउनको लागि संयोजन गरिएको थियो। आनुवंशिक इन्जिनियरिङ प्रविधिको जटिलता अपेक्षाकृत उच्च भए पनि, यो हाल एन्टिबडीहरूको संरचना र कार्य समायोजन गर्न द्विविशिष्ट एन्टिबडी उत्पादनको लागि सबैभन्दा सामान्य रूपमा प्रयोग हुने विधि हो। द्विविशिष्ट एन्टिबडी डिजाइन सञ्चालन गर्दा, एन्टिबडी क्रस प्रतिक्रियाशीलताको सिद्धान्त प्रयोग गर्न सकिन्छ, तर एन्टिबडी क्रस प्रतिक्रियाशीलताले गैर-विशिष्ट प्रतिक्रियाहरू निम्त्याउन सक्छ, त्यसैले यसलाई द्विविशिष्ट एन्टिबडी डिजाइनको व्यावहारिक प्रयोगमा ध्यानपूर्वक विचार गरिनेछ, जस्तै द्विविशिष्ट एन्टिबडी थेरापी।

द्विविशिष्ट एन्टिबडी शुद्धीकरण भनेको उच्च-शुद्धता लक्षित एन्टिबडीहरूलाई अलग गर्ने र शुद्ध गर्ने प्रक्रिया हो। केही घुलनशील अशुद्धताहरू हटाउन दुई विधिहरू, सेन्ट्रीफ्यूगेशन र गहिरो निस्पंदन प्रयोग गरिन्छ। लक्षित द्विविशिष्ट एन्टिबडी सुरुमा एफिनिटी क्रोमेटोग्राफीद्वारा कब्जा गरिन्छ। द्विविशिष्ट एन्टिबडीहरू जस्तै IgG को लागि, प्रोटीन A एफिनिटी क्रोमेटोग्राफी प्रयोग गरिन्छ, जबकि गैर IgG जस्तै द्विविशिष्ट एन्टिबडीहरूको लागि, प्रकाश श्रृंखलामा आधारित एफिनिटी क्रोमेटोग्राफी प्रयोग गर्न सकिन्छ। पछि, एन्टिबडीलाई निश्चित समयको लागि कम pH अवस्थाहरूमा इन्क्युबेट गरिन्छ, जसले गर्दा भाइरसको खामको सतहमा प्रोटीन संरचना बाधित हुन्छ, जसले गर्दा कोषहरूलाई संक्रमित गर्ने क्षमता गुम्छ। होस्ट सेल प्रोटीन (HCP) जस्ता अशुद्धताहरूलाई थप हटाउन मध्यवर्ती गहिरो निस्पंदन गरिन्छ। एन्टिबडीहरूको शुद्धता आयन एक्सचेन्ज क्रोमेटोग्राफी जस्ता विधिहरू मार्फत सुधार गरिन्छ, र कुनै पनि अवशिष्ट भाइरसहरू न्यानो निस्पंदन वा अल्ट्राफिल्ट्रेसन प्रविधिहरू मार्फत हटाइन्छ। अन्तमा, नमूना केन्द्रित गरिन्छ र उपयुक्त सूत्रीकरण बफरसँग प्रतिस्थापन गरिन्छ।