Antilichaam Affiniteitsrijpingsservice

Alpha Lifetech Inc.Kan affiniteitsmaturatie van antilichamen aanbieden met behulp van mutatie- en selectietechnologieën. We gebruiken doorgaans scFv als antilichaamformaat in de processen van affiniteitsmaturatie en een monovalent display-faagmidensysteem dat is gebruikt om de aviditeitseffecten tijdens antigeenbindingsscreening te verminderen. Ons professionele team kan ook affiniteitsmaturatie aanbieden voor enkeldomeinantilichamen.

Alpha Lifetech Inc.is er trots op uitgebreide diensten aan te bieden die voldoen aan de uiteenlopende behoeften van klanten wereldwijd. Ons doel is om de eisen van verschillende klanten te begrijpen en te vervullen, en om te helpen bij alle toekomstige en opkomende problemen in onderzoekswerk.

Wat is affiniteitsmaturatie?

Affiniteitsrijping is het proces waarbij antilichamen herhaaldelijk mutaties en selectie ondergaan om hun affiniteit voor specifieke antigenen te vergroten. B-cellen, die voornamelijk voorkomen in het kiemcentrum van secundaire lymfoïde organen, ondergaan somatische hypermutatie en selectie onder invloed van T-cellen en folliculaire dendritische cellen.
Tijdens het affiniteitsrijpingsproces worden B-cellen met oppervlakte-immunoglobulinereceptoren met lage affiniteit geactiveerd door antigeencontacten en ondergaan ze proliferatie en differentiatie. Door affiniteitsrijping door somatische hypermutatie vinden willekeurige nucleotidesubstituties plaats in de variabele regio van immunoglobulinegenen, wat leidt tot de productie van verschillende antilichaamvarianten. Na somatische hypermutatie wordt antigeengestuurde selectie uitgevoerd op B-cellen met gemuteerde immunoglobulinereceptoren. B-cellen die antilichamen produceren met verhoogde antigene affiniteit worden bij voorkeur behouden en mogen prolifereren, terwijl B-cellen met verlaagde of onveranderde affiniteit apoptose ondergaan. Dit iteratieve proces van mutatie en selectie leidt tot de productie van B-celklonen, die antilichamen produceren met een geleidelijk hogere affiniteit voor het antigeen.

Antilichaam Affiniteitsrijpingsservice

De belangrijkste voordelen van PCR-gebaseerde methoden zijn dat mutaties nauwkeurig worden gericht op het geamplificeerde fragment; de foutenmarge is gemakkelijk te beheersen; de methode is snel en eenvoudig op te zetten en er worden geen gevaarlijke chemicaliën gebruikt. Het is bekend dat de Taq DNA-polymerase DNA met een lage betrouwbaarheid dupliceert, voornamelijk vanwege de afwezigheid van 3' tot 5' proofreading-activiteit.Alpha Lifetech'sHet antilichaam engineeringplatform past een foutgevoelige PCR-aanpak toe om voornamelijk CDR-regio's te muteren tijdens de constructie van de subbibliotheek. Vaak creëren we mutaties op volledig willekeurige posities in de volledige VH- en VL-fragmenten om de genetische diversiteit van de subbibliotheek te vergroten. Na de constructie van een gemuteerde antilichaamgenbibliotheek door middel van foutgevoelige PCR, wordt de selectie van varianten met hoge affiniteit (de affiniteit van de scFv-antilichamen kan 10^8 - 10^10 M bereiken) uitgevoerd door middel van panning in oplossing of op geïmmobiliseerd antigeen met wascondities die geoptimaliseerd zijn voor off-rate-afhankelijke selectie.
  
Wetenschappers inAlpha Lifetech Inc.Gebruik Escherichia coli mutator-stammen mutAD5TM als een van de vele mutatiestrategieën om willekeurige mutaties te introduceren en zo de affiniteit en expressie van recombinante antilichaamfragmenten te wijzigen. Selectieomstandigheden kunnen worden aangepast voor antilichaamfragmenten met verhoogde productieniveaus. Groeiomstandigheden in Escherichia coli mutatorcellen kunnen worden aangepast om één willekeurige puntmutatie per kilobase DNA te introduceren, wat vrijwel gelijk is aan één codonverandering per scFv-fragment. Na verschillende cycli van mutatie, presentatie en selectie kunnen we de affiniteitsconstante verbeteren van 10^5 - 10^6 M naar 10^8 - 10^10 M.

Verbeter strategieën voor affiniteitsrijping

Bepaalde posities van antilichamen kunnen worden gerandomiseerd met een gedefinieerde diversiteit (zoals volledige randomisatie met alle 20 aminozuren of biased randomisatie met geselecteerde aminozuren met vaste percentages) om de affiniteit te verbeteren. We hebben twee strategieën om de affiniteit van antilichamen te verbeteren: ten eerste worden mutaties geïntroduceerd op beperkte posities in de complementariteitsbepalende regio's (CDR's) door middel van gerichte mutagenese; ten tweede worden mutaties geïntroduceerd in de volledige V-coderende regio's door middel van willekeurige mutagenese. Door deze twee methoden te gebruiken, worden de geconserveerde aminozuursequenties of de volledige frameworkregio van het antilichaam vervangen door andere aminozuren. In combinatie met onze peptidebibliotheekscantechnologieën zou dit de affiniteit van de gewenste antilichamen aanzienlijk kunnen verhogen.

Faagdisplay-antilichaamaffiniteit

Zodra de scFv-mutantenbibliotheek is samengesteld, zijn er twee screeningstrategieën beschikbaar: biopanning en sortering van vaste antigenen. Bij de eerste strategie wordt een subtractieve concentratie van substraat gebruikt om het antilichaam met hoge affiniteit te isoleren, aangezien de mutanten met lage affiniteit zouden worden uitgewassen, waardoor de faagdeeltjes met hoge aviditeit overblijven. De tweede strategie maakt gebruik van een gelabeld antigeen in oplossing, selectie op basis van de evenwichtsconstante (Kd) en selectie op basis van bindingskinetiek. Deze selectiemethode selecteert antilichaamvarianten met een verbeterde Kd.

Indien u vragen heeft, kunt u te allen tijde contact met ons opnemen.