Dienst voor de ontwikkeling van monoklonale antilichamen

Alpha Lifetech Inc.kan epitoopvoorspelling, peptidesynthese, proteïne-expressie, productie van polyklonale of monoklonale antilichamen en antilichaamzuivering uit celkweek, ascitesvloeistof of volledig serum verzorgen.

Alpha Lifetech Inc.heeft ervaring in het leveren van diverse stabiele cellijndiensten aan klanten, waaronder hybridomacellen, genoombewerkingscellijnen, knockdown-cellijnen en overexpressiecellijnen. We streven ernaar om elke klant geavanceerde, op maat gemaakte cellijndiensten te bieden en onze diensten zijn bewezen en betrouwbaar.

Strategie voor antilichaamontwikkeling

1. Antigeenontwerp en -bereiding
Deze antigenen kunnen eiwitten, peptiden of andere moleculen zijn. Het ontwerpen van immunogenen vereist een alomvattende aanpak die kennis van antigeenstructuur, immunologie en afgiftesystemen integreert. Alpha Lifetech beschikt over antigeenontwerptechnologie die immunogenen kan ontwerpen voor klanten die dat nodig hebben.
Alpha Lifetech biedt recombinante eiwitproducten waaruit klanten kunnen kiezen. We beschikken over diverse eiwitexpressiesystemen, zoals E. coli-expressiesystemen, gistexpressiesystemen, baculovirus-insecten-expressiesystemen, zoogdierexpressiesystemen, enz., om de recombinante eiwitten te produceren die u nodig hebt voor onderzoek.

2. Vaccinatie van dieren
Alpha Lifetech kan klanten voorzien van immunogenen. U kunt kiezen uit immuundieren zoals muizen, konijnen, schapen, alpaca's, cavia's, hamsters, etc.

3. Methoden voor de productie van monoklonale antilichamen

●Mabs-productie door hybridomatechnologie
Hybridoom is een hybride cel die ontstaat door de fusie van twee soorten cellen, namelijk de muizenmyeloomcellijn en plasmacellen (lymfocyt B), waarbij de heterozygote cel continu antilichamen tegen het gewenste antigeen in vitro kan produceren. De productie van een hybridoomcellijn bestaat uit drie onderdelen: antigeenontwerp (haptenen, kleine moleculen en peptiden), dierlijke immunisatie, celfusie en positieve kloonscreening. Door gebruik te maken van unieke immunisatiemethodologieën bereiken we uitzonderlijk hoge celfusie-efficiënties (1-10 hybridomen per duizend B-cellen) en hoge antilichaamtiters, wat ons succespercentage maximaliseert in daaropvolgende analytische tests, waaronder biochemische screening, in-vitro celgebaseerde assays en dierstudies.

●Mabs-productie door fagedisplaytechnologie
Faagdisplay biedt een andere methode voor het genereren van monoklonale antilichamen. B-lymfocyten worden geïsoleerd uit dierlijk bloed en hun mRNA wordt geëxtraheerd. Via PCR wordt dit mRNA omgezet in cDNA, dat alle VH- en VL-segmenten amplificeert. Deze segmenten worden vervolgens gekloond in een vector, meestal als single-chain variable fragments (scFv), samen met het PIII-eiwit van een bacteriofaag. Vervolgens wordt dit construct gebruikt om E. coli te infecteren, wat resulteert in de creatie van een bibliotheek van ongeveer 10^10 cellen door inoculatie met een helperfaag. E. coli is vervolgens in staat om de bacteriofaag met de VH- en VL-segmenten als onderdeel van zijn mantel uit te scheiden. Hierna kunnen specifieke VH- en VL-segmenten die gericht zijn op het antigeen van interesse, worden geselecteerd en gebruikt om E. coli opnieuw te enten met de bacteriofaag. Cellen die het plasmide bevatten, worden vervolgens geïsoleerd en gesequenced.

4.Fusiescreening

●Celfusie en selectie
De geoogste B-cellen worden vervolgens gefuseerd met myelomacellen, kankercellen die zich in kweek oneindig kunnen vermenigvuldigen. De fusie wordt meestal bereikt met behulp van een techniek zoals polyethyleenglycol (PEG)-fusie.
Na fusie worden de hybridomacellen gekweekt in een selectief medium dat alleen de hybridoma's laat overleven. Het medium bevat meestal aminopterine, wat de groei van niet-gefuseerde myelomacellen voorkomt.

●Screening en Clonging
De resulterende hybridoomcellen worden gescreend op de productie van antilichamen die specifiek zijn voor het doelantigeen. Dit gebeurt meestal met behulp van technieken zoals enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Western blot, immunoprecipitatie en flowcytometrie.

Zodra hybridomacellen die het antilichaam produceren geïdentificeerd zijn, worden ze gekloond om een ​​populatie van identieke cellen te genereren. Dit garandeert dat het antilichaam dat door elke hybridomacel wordt geproduceerd, identiek is.

5. Functionele verificatie van antilichamen
Alpha Lifetech biedt validatie van de functionaliteit van antilichamen, zoals Western blotting, immunohistochemie of functionele testen, om monoklonale antilichamen te karakteriseren en de specificiteit, affiniteit en functionaliteit van antilichamen te bevestigen.

6. Optimalisatie van antilichamen
Zuivering van antilichamen uit kweeksupernatant met behulp van technieken zoals proteïne A- of proteïne G-affiniteitschromatografie. Alpha Lifetech kan ook methoden voor antilichaammodificatie leveren om de antilichaamaffiniteit te verbeteren.

7. Antilichaamproductie
Alpha Lifetech kan kandidaat-antilichamen evalueren voor high-throughput screeningtoepassingen en grootschalige productie.