Ontwikkelingsservice voor monoklonale antilichamen

Alpha Lifetech Inc.Het biedt mogelijkheden voor epitoopvoorspelling, peptidesynthese, eiwitexpressie, productie van polyklonale of monoklonale antilichamen, evenals antilichaamzuivering uit celkweek, ascitesvloeistof of volledig serum.

Alpha Lifetech Inc.Wij hebben ruime ervaring in het leveren van diverse stabiele cellijndiensten aan onze klanten, waaronder hybridoma-cellen, genbewerkingscellijnen, knockdown-cellijnen en overexpressie-cellijnen. We streven ernaar om elke klant geavanceerde, op maat gemaakte cellijndiensten te bieden en onze diensten zijn bewezen betrouwbaar.

Strategie voor de ontwikkeling van antilichamen

1. Ontwerp en voorbereiding van antigenen
Deze antigenen kunnen eiwitten, peptiden of andere moleculen zijn. Het ontwerpen van immunogenen vereist een alomvattende aanpak die kennis van de antigeenstructuur, immunologie en toedieningssystemen integreert. Alpha Lifetech beschikt over technologie voor het ontwerpen van antigenen waarmee immunogenen kunnen worden ontworpen voor klanten die daar behoefte aan hebben.
Alpha Lifetech biedt klanten een ruime keuze aan recombinante eiwitproducten. We beschikken over diverse eiwitexpressiesystemen, zoals het E. coli-expressiesysteem, het gistexpressiesysteem, het baculovirus-insectenexpressiesysteem, het zoogdierexpressiesysteem, enzovoort, om de recombinante eiwitten te produceren die u nodig heeft voor uw onderzoek.

2. Immunisatie van dieren
Alpha Lifetech kan immunogenen aan klanten leveren, en er zijn immuundieren zoals muizen, konijnen, schapen, alpaca's, cavia's, hamsters, enz. beschikbaar waaruit u kunt kiezen.

3. Productiemethoden voor monoklonale antilichamen

●Productie van monoklonale antilichamen met behulp van hybridoma-technologie
Een hybridoma is een hybride cel die ontstaat door de fusie van twee celtypen: een muizenmyeloomcellijn en plasmacellen (lymfocyten B). De heterozygote cel kan in vitro continu antilichamen produceren tegen het gewenste antigeen. De productie van een hybridoma-cellijn bestaat uit drie onderdelen: antigeenontwerp (haptenen, kleine moleculen en peptiden), immunisatie van dieren, celfusie en screening op positieve klonen. Door gebruik te maken van unieke immunisatiemethoden bereiken we uitzonderlijk hoge celfusie-efficiënties (1-10 hybridoma's per duizend B-cellen) en hoge antilichaamtiters, waardoor we onze slagingskans maximaliseren bij daaropvolgende analytische tests, waaronder biochemische screening, in-vitro celgebaseerde assays en dierstudies.

●Productie van monoklonale antilichamen met behulp van faagdisplaytechnologie
Fagedisplay biedt een andere methode voor het genereren van monoklonale antilichamen. B-lymfocyten worden geïsoleerd uit dierlijk bloed en hun mRNA wordt geëxtraheerd. Via PCR wordt dit mRNA omgezet in cDNA, waarmee alle VH- en VL-segmenten worden geamplificeerd. Deze segmenten worden vervolgens gekloneerd in een vector, meestal als single-chain variable fragments (scFv), samen met het PIII-eiwit van een bacteriofaag. Vervolgens wordt deze constructie gebruikt om E. coli te infecteren, wat resulteert in de creatie van een bibliotheek met ongeveer 10^10 cellen door inoculatie met een helperfaag. E. coli is dan in staat de bacteriofaag met de VH- en VL-segmenten als onderdeel van zijn omhulsel uit te scheiden. Hierna kunnen specifieke VH- en VL-segmenten die gericht zijn op het gewenste antigeen worden geselecteerd en gebruikt om E. coli opnieuw te inoculeren met de bacteriofaag. Cellen die het plasmide bevatten, worden vervolgens geïsoleerd en gesequenced.

4. Fusiescreening

●Celfusie en selectie
De geoogste B-cellen worden vervolgens gefuseerd met myeloomcellen, dit zijn kankercellen die zich onbeperkt kunnen vermenigvuldigen in een kweekmedium. De fusie wordt doorgaans bereikt met behulp van een techniek zoals polyethyleenglycol (PEG)-fusie.
Na de fusie worden de hybridomacellen gekweekt in een selectief medium dat alleen de hybridoma's laat overleven. Dit medium bevat meestal aminopterine, dat de groei van niet-gefuseerde myeloomcellen remt.

●Screening en Clonging
De resulterende hybridomacellen worden gescreend op de productie van antilichamen die specifiek zijn voor het doelantigeen. Dit gebeurt doorgaans met behulp van technieken zoals enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Western blot, immunoprecipitatie en flowcytometrie.

Zodra de hybridomacellen die het antilichaam produceren zijn geïdentificeerd, worden ze gekloond om een ​​populatie identieke cellen te genereren. Dit zorgt ervoor dat het antilichaam dat door elke hybridomacel wordt geproduceerd identiek is.

5. Functionele verificatie van antilichamen
Alpha Lifetech biedt functionele validatie van antilichamen aan, zoals Western blotting, immunohistochemie of functionele assays, om monoklonale antilichamen te karakteriseren en de specificiteit, affiniteit en functionaliteit van antilichamen te bevestigen.

6. Optimalisatie van antilichamen
Zuivering van antilichamen uit kweeksupernatant met behulp van technieken zoals proteïne A- of proteïne G-affiniteitschromatografie, en Alpha Lifetech kan ook methoden voor antilichaammodificatie aanbieden om de affiniteit van antilichamen te verbeteren.

7. Antilichaamproductie
Alpha Lifetech kan kandidaat-antilichamen evalueren voor toepassingen in high-throughput screening en grootschalige productie.