Platform voor de ontwikkeling van fagedisplay-antilichamen

Alpha Lifetech, met zijn uitgebreide projectervaring in de ontdekking van antilichamen, kan op maat gemaakte monoklonale en polyklonale antilichaamdiensten leveren voor meerdere soorten, evenals diensten voor de opbouw en screening van antilichaambibliotheken. Alpha Lifetech kan klanten voorzien van kwaliteitsgegarandeerde antilichaam- en recombinante antilichaamproducten, evenals bijbehorende diensten, voor de bereiding van efficiënte, zeer specifieke en stabiele antilichamen. Door gebruik te maken van uitgebreide antilichaamplatforms en antilichaamengineering, bieden we diensten aan die de upstream en downstream van antilichaamproductie bestrijken, inclusief technische diensten zoals antilichaambereiding, -zuivering, -sequencing en -validatie.

Alpha Lifetech beschikt over een volwassen platform voor de ontdekking van antilichamen dat klanten een scala aan diensten biedt, waaronder dierlijke immuniteit, de constructie en screening van fagedisplay-antilichaambibliotheken, antilichaamsequencing, antilichaamexpressie, antilichaamzuivering, antilichaamvalidatie en antilichaamlabeling op basis van hybridomatechnologie, individuele B-celtechnologie, fagedisplaytechnologie en meer. Alpha Lifetech beschikt over een standaardproductielijn en naast antilichaampreparatiediensten kunnen ook ondersteunende diensten worden geleverd, zoals humanisering van antilichamen, affiniteitsrijping van antilichamen, ontwerp en ontwikkeling van ADC-geneesmiddelen en ontwerp van daaropvolgende CAR-T-sequenties. Tegelijkertijd heeft Alpha Lifetech een antilichaambibliotheek opgebouwd op basis van M13-, T4- en T7-fagedisplaytechnologieplatformen, met een opslagcapaciteit tot 10^8-10^9. Het positieve percentage, de insertiegraad en de diversiteit van de bibliotheek kunnen allemaal oplopen tot meer dan 90%.

Faagdisplaytechnologie

De productie van monoklonale antilichamen werd aanvankelijk voorbereid met behulp van hybridoma-monoklonale antilichaamtechnologie om muizenhybridoma-monoklonale antilichamen te produceren. Specifiek, door miltcellen van geïmmuniseerde muizen te fuseren met myeloomcellen van mensen of muizen, worden hybridomacellen gevormd die specifieke hybridoma-monoklonale antilichamen afscheiden. Door humane modificatie van muizenmonoklonale antilichamen en genetische modificatie van de antilichamen om ze een constante humane immunoglobulineregio te geven, kan hun immunogeniciteit worden verminderd. Monoklonale antilichaamtechnologie wordt veel gebruikt in biomedische en klinische toepassingen.

Alpha Lifetech kan een totaaloplossing bieden voor antilichaam engineering, van het ontwerp van preklinische onderzoeksprotocollen tot de ontdekking van antilichaam-geneesmiddelconjugaten (ADC's) en de validatie bij dieren. Antilichaam-geneesmiddelconjugaten (ADC's) kunnen chemotherapiemedicijnen afgeven aan kankercellen. Na binding aan specifieke targets die tot expressie komen op kankercellen, geven ADC's cytotoxische geneesmiddelen af aan kankercellen. Alpha Lifetech kan klanten ook uitgebreide diensten bieden op het gebied van antilichaam-affiniteitsmaturatie. Met geavanceerde mutatie-optimalisatie en high-throughput fagedisplay-screeningtechnologie worden eerst antilichamen met een bepaalde affiniteit gescreend, waarna aminozuurmutaties worden geïntroduceerd om diverse varianten te genereren. Vervolgens werden antilichamen met een hoge affiniteit geëvalueerd en gescreend met behulp van screeningtechnieken. Na meerdere optimalisatierondes en structurele analyse werden uiteindelijk antilichamen met een hogere affiniteit en een sterkere specificiteit verkregen.

Alpha Lifetech kan verschillende soorten antilichaamfaagdisplaybibliotheken samenstellen, waaronder immuunbibliotheken, native bibliotheken, semi-synthetische bibliotheken en synthetische bibliotheken. Dankzij de hoge capaciteit van antilichaambibliotheken kunnen zeer specifieke antilichamen worden verkregen. Verschillende fagemidevectoren, zoals pMECS, pComb3X en pCANTAB 5E, kunnen worden geleverd, evenals stammen zoals TG1 E. coli, XL1 Blue en ER2738. Naast een bibliotheekcapaciteit van maximaal 10^9 is de insertiesnelheid van het doelfragment in de bibliotheek ook hoog, waardoor er voldoende omstandigheden worden gecreëerd voor het screenen van antilichamen, waar klanten tevreden mee zijn. Het stroomschema van Alpha Lifetech's antilichaambereidingsservice op basis van faagdisplaytechnologie wordt weergegeven in Figuur 1.

Figuur 1 Procesdiagram voor het bereiden van monoklonale antilichamen op basis van fagedisplaytechnologie.

Workflow voor de productie van fagedisplay-antilichamen

Stappen	Service-inhoud	Tijdlijn
Stap 1: Vaccinatie van dieren	(1) Vaccinatie van dieren 4 keer, boostervaccinatie 1 dosis, in totaal 5 doses geïmmuniseerd. (2) Vóór de immunisatie werd negatief serum verzameld en bij de vierde dosis werd ELISA uitgevoerd om de serumtiter te bepalen. (3) Indien de serumantilichaamtiter van de vierde dosis aan de eisen voldoet, wordt 7 dagen vóór de bloedafname een extra vaccinatiedosis toegediend. Indien deze niet aan de eisen voldoet, wordt de routinematige vaccinatie voortgezet. (4) Gekwalificeerde potentie, bloedafname en scheiding van monocyten	10 weken
Stap 2: cDNA-voorbereiding	(1) PBMC totale RNA-extractie (RNA-extractiekit) (2) Hoge betrouwbaarheid RT-PCR-preparatie van cDNA (reverse transcriptiekit)	1 dag
Stap 3: Constructie van antilichaambibliotheek	(1) Met behulp van cDNA als sjabloon werden genen versterkt door middel van twee PCR-rondes. (2) Faagconstructie en -transformatie: gen-splicing fagemide vector, elektroporatietransformatie van TG1 gastheerbacteriën, constructie van antilichaambibliotheek. (3) Identificatie: Selecteer willekeurig 24 klonen, positieve PCR-identificatieratio + insertieratio. (4) Geassisteerde fagebereiding: M13-faagversterking en -zuivering. (5) Fagendisplaybibliotheekredding	3-4 weken
Stap 4: Screening van antilichaambibliotheken (3 ronden)	(1) Standaard screening in 3 rondes (vaste-fase screening): screening onder druk om niet-specifieke antilichamen zoveel mogelijk te verwijderen. (2) Amplificatie van een enkele kloon door een bacteriofaag geselecteerd + IPTG-geïnduceerde expressie + ELISA-detectie van positieve klonen. (3) Alle positieve klonen werden geselecteerd voor gensequentiebepaling.	4-5 weken

Voordelen van fagedisplaytechnologie

Alpha Lifetech heeft ruime ervaring op het gebied van antilichaamontwikkeling. In de loop der jaren heeft Alpha Lifetech een uitgebreid platform voor antilichaamontwikkeling ontwikkeld.

Ondersteunende diensten

Wij kunnen verschillende diensten leveren voor de constructie van immuunbibliotheken op basis van dieren en screeningsdiensten voor natuurlijke antilichaambibliotheken, afhankelijk van de behoeften van de klant.

Meerdere doelen

Er zijn meerdere doelgerichte antilichaamontdekkingsdiensten beschikbaar: eiwitten, peptiden, kleine moleculen, virussen, membraaneiwitten, mRNA, enzovoort.

Meerdere vectoren

Gepersonaliseerde bibliotheekconstructieservice: we kunnen verschillende bacteriofaagvectoren leveren, waaronder PMECS, pComb3X en pCANTAB 5E, en deze aanpassen aan de behoeften van de klant.

Volwassen platform

De opslagcapaciteit kan 10 ^ 8-10 ^ 9 bereiken, de insertiepercentages liggen allemaal boven de 90% en de affiniteit van antilichamen verkregen door screening ligt over het algemeen op het nM pM-niveau

Gerelateerde SERVICE

Strategieën voor de ontwikkeling van meerdere antilichamen

Dienst voor de ontwikkeling van monoklonale antilichamen

Hybridoma-technologieplatform

Sorteerplatform voor enkele B-cellen

Platform voor de ontwikkeling van fagedisplay-antilichamen

Ontwikkeling van monoklonale antilichamen - Alpha Lifetech

Dienst voor de ontwikkeling van monoklonale antilichamen

Wij kunnen hoogwaardige, zeer zuivere en zeer specifieke diensten leveren voor de ontwikkeling van monoklonale antilichamen, waaronder de productie van monoklonale antilichamen van muizen en konijnen.

Hybridoma-technologieplatform

Inclusief immunisatieprogramma's, antilichaambereidingsdiensten, antilichaamzuivering, high-throughput sequencing van antilichamen, antilichaamvalidatie, enz.

Sorteerplatform voor enkele B-cellen

Alpha Lifetech biedt voordelen op het gebied van screeningtijd en het verkrijgen van hoogwaardige antilichamen. Het bedrijf kan antigeenontwerp, -synthese en -modificatie, dierlijke immuniteit, screening van individuele B-celverrijking en sequencing van individuele cellen verzorgen.