Fagendisplay-antilichaamontwikkelingsplatform

Alpha Lifetech, met zijn uitgebreide projectervaring in antilichaamonderzoek, kan op maat gemaakte monoklonale en polyklonale antilichaamdiensten leveren voor diverse diersoorten, evenals diensten voor de constructie en screening van antilichaambibliotheken. Alpha Lifetech kan klanten voorzien van kwaliteitsgegarandeerde antilichaam- en recombinantantilichaamproducten, en bijbehorende diensten, voor de productie van efficiënte, zeer specifieke en stabiele antilichamen. Door gebruik te maken van uitgebreide antilichaamplatforms en antilichaamengineering, bieden we diensten aan die het gehele proces van antilichaamproductie bestrijken, inclusief technische diensten zoals antilichaambereiding, -zuivering, -sequentiebepaling en -validatie.

Alpha Lifetech beschikt over een volwaardig platform voor de ontdekking van antilichamen, waarmee klanten een breed scala aan diensten kunnen ontvangen, waaronder dierimmuniteit, constructie en screening van antilichaambibliotheken met behulp van faagdisplay, antilichaamsequentiebepaling, antilichaamexpressie, antilichaamzuivering, antilichaamvalidatie en antilichaamlabeling op basis van hybridoma-technologie, single B-celtechnologie, faagdisplaytechnologie en meer. Alpha Lifetech heeft een standaard productielijn en biedt naast de bereiding van antilichamen ook ondersteunende diensten aan, zoals antilichaamhumanisatie, antilichaamaffiniteitsrijping, ADC-geneesmiddelontwerp en -ontwikkeling, en CAR-T-sequentieontwerp. Tegelijkertijd heeft Alpha Lifetech een antilichaambibliotheek opgebouwd op basis van de M13-, T4- en T7-faagdisplaytechnologieplatforms, met een opslagcapaciteit van maximaal 10^8-10^9. Het percentage positieve resultaten, het insertiepercentage en de diversiteit van de bibliotheek kunnen allemaal meer dan 90% bedragen.

Fage-displaytechnologie

De productie van monoklonale antilichamen werd aanvankelijk opgezet met behulp van hybridoma-monoklonale antilichaamtechnologie om muizenhybridoma-monoklonale antilichamen te produceren. Concreet worden hybridoma-cellen gevormd door miltcellen van geïmmuniseerde muizen te fuseren met myeloomcellen van mensen of muizen. Deze hybridoma-cellen scheiden specifieke hybridoma-monoklonale antilichamen af. Door humanisering van muizenmonoklonale antilichamen en genetische modificatie van de antilichamen, waarbij een constant humaan immunoglobulinegebied wordt toegevoegd, kan hun immunogeniteit worden verminderd. De ontwikkeling van monoklonale antilichamen wordt op grote schaal toegepast in de biomedische en klinische praktijk.

Alpha Lifetech biedt totaaloplossingen voor antilichaamengineering, van het ontwerpen van preklinische onderzoeksprotocollen tot de ontdekking van antilichaam-geneesmiddelconjugaten (ADC's) en dierproeven. Antilichaam-geneesmiddelconjugaten (ADC's) kunnen chemotherapeutische geneesmiddelen afleveren aan kankercellen. Na binding aan specifieke targets op kankercellen, geeft de ADC cytotoxische geneesmiddelen af aan de kankercellen. Alpha Lifetech biedt klanten ook uitgebreide diensten voor affiniteitsrijping van antilichamen. Met behulp van geavanceerde mutatieoptimalisatie en high-throughput fagedisplay-screeningtechnologie worden antilichamen met een bepaalde affiniteit eerst gescreend, waarna aminozuurmutaties worden geïntroduceerd om diverse varianten te genereren. Vervolgens worden antilichamen met een hoge affiniteit geëvalueerd en gescreend met behulp van screeningtechnieken. Na meerdere rondes van optimalisatie en structurele analyse worden uiteindelijk antilichamen met een hogere affiniteit en sterkere specificiteit verkregen.

Alpha Lifetech kan verschillende soorten antilichaam-fagedisplaybibliotheken samenstellen, waaronder immuunbibliotheken, native bibliotheken, semisynthetische bibliotheken en synthetische bibliotheken. Dankzij de hoge capaciteit van de antilichaambibliotheken kunnen zeer specifieke antilichamen worden verkregen. Er kunnen meerdere fagemidevectoren zoals pMECS, pComb3X en pCANTAB 5E worden geleverd, evenals stammen zoals TG1 E. coli, XL1 Blue en ER2738. Naast een bibliotheekcapaciteit tot 10^9 is ook de insertiesnelheid van het doelfragment in de bibliotheek hoog, waardoor optimale omstandigheden worden gecreëerd voor het screenen van antilichamen die aan de eisen van de klant voldoen. Het stroomschema van Alpha Lifetechs antilichaambereidingsservice op basis van fagedisplaytechnologie is weergegeven in Figuur 1.

Figuur 1. Procesdiagram voor de bereiding van monoklonale antilichamen op basis van faagdisplaytechnologie.

Productieproces van antilichamen via faagdisplay

Stappen	Service-inhoud	Tijdlijn
Stap 1: Immunisatie van de dieren	(1) Dierlijke immunisatie 4 keer, boostervaccinatie 1 dosis, in totaal 5 doses geïmmuniseerd. (2) Negatief serum werd vóór de immunisatie verzameld en ELISA werd uitgevoerd op de vierde dosis om de serumtiter te bepalen. (3) Indien de serumantilichaamtiter van de vierde dosis aan de vereisten voldoet, wordt 7 dagen vóór de bloedafname nog een extra dosis immunisatie toegediend. Indien deze niet aan de vereisten voldoet, wordt de routinematige immunisatie voortgezet. (4) Gekwalificeerde potentie, bloedafname en scheiding van monocyten	10 weken
Stap 2: cDNA-voorbereiding	(1) Totale RNA-extractie uit PBMC (RNA-extractiekit) (2) Nauwkeurige RT-PCR-bereiding van cDNA (reverse transcriptiekit)	1 dag
Stap 3: Constructie van een antilichaambibliotheek	(1) Met behulp van cDNA als sjabloon werden genen vermenigvuldigd door middel van twee rondes PCR. (2) Constructie en transformatie van fagen: gen-splicing fagemidevector, elektroporatietransformatie van TG1-gastbacteriën, constructie van een antilichaambibliotheek. (3) Identificatie: Selecteer willekeurig 24 klonen, PCR-identificatie positief percentage + insertiepercentage. (4) Geassisteerde fagenbereiding: M13 fagenamplificatie + zuivering. (5) Herstel van de faagdisplaybibliotheek	3-4 weken
Stap 4: Screening van de antilichaambibliotheek (3 rondes)	(1) Standaard screening in 3 ronden (vastefasescreening): drukscreening om niet-specifieke antilichamen zoveel mogelijk te verwijderen. (2) Amplificatie van een enkele kloon, selectie van bacteriofagen + IPTG-geïnduceerde expressie + ELISA-detectie van positieve klonen. (3) Alle positieve klonen werden geselecteerd voor gensequentiebepaling.	4-5 weken

Voordelen van faagdisplaytechnologie

Alpha Lifetech heeft ruime ervaring op het gebied van antilichaamontwikkeling. In de loop der jaren heeft Alpha Lifetech een uitgebreid platform voor antilichaamontwikkeling opgebouwd.

Ondersteunende diensten

Wij kunnen verschillende diensten aanbieden voor de constructie van immunologische bibliotheken op basis van dierlijke cellen en voor het screenen van natuurlijke antilichamenbibliotheken, afhankelijk van de behoeften van de klant.

Meerdere doelen

Er zijn diverse diensten beschikbaar voor het ontdekken van antilichamen gericht op uiteenlopende doelen: eiwitten, peptiden, kleine moleculen, virussen, membraaneiwitten, mRNA, enzovoort.

Meerdere vectoren

Wij bieden een gepersonaliseerde service voor het samenstellen van bibliotheken en kunnen diverse bacteriofaagvectoren leveren, waaronder PMECS, pComb3X en pCANTAB 5E, en deze aanpassen aan de wensen van de klant.

Volwaardig platform

De opslagcapaciteit kan oplopen tot 10⁸-10⁹, de inbrengpercentages liggen allemaal boven de 90%, en de affiniteit van antilichamen verkregen via screening ligt over het algemeen op nM-pM-niveau.

Gerelateerde dienst

Meerdere antilichaamontwikkelingsstrategieën

Ontwikkelingsservice voor monoklonale antilichamen

Hybridoma-technologieplatform

Platform voor het sorteren van individuele B-cellen

Fagendisplay-antilichaamontwikkelingsplatform

Ontwikkeling van monoklonale antilichamen - Alpha Lifetech

Ontwikkelingsservice voor monoklonale antilichamen

Wij kunnen hoogwaardige, zeer zuivere en zeer specifieke diensten leveren voor de ontwikkeling van monoklonale antilichamen, waaronder de productie van monoklonale antilichamen van muizen en monoklonale antilichamen van konijnen.

Hybridoma-technologieplatform

Dit omvat onder andere vaccinatieprogramma's, diensten voor de bereiding van antilichamen, antilichaamzuivering, high-throughput sequencing van antilichamen en antilichaamvalidatie.

Platform voor het sorteren van individuele B-cellen

Alpha Lifetech heeft voordelen op het gebied van screeningstijd en het verkrijgen van hoogwaardige antilichamen. Het bedrijf kan diensten leveren op het gebied van antigeenontwerp, -synthese en -modificatie, dierimmuniteit, screening van individuele B-cellen en single-cell sequencing.