Platform voor de constructie van peptidebibliotheken met behulp van fagedisplay

Alpha Lifetech beschikt over diverse technologieën voor de constructie van peptidebibliotheken. We bieden voornamelijk diensten aan voor de constructie van T7-peptidebibliotheken en M13-peptidebibliotheken, afhankelijk van het type faag. Daarnaast bieden we diensten aan voor de constructie van lineaire lus 7-peptidebibliotheken en 12-peptidebibliotheken, afhankelijk van de sequentiegrootte van de peptidemoleculen, enzovoort. We bieden ook diensten aan voor de constructie van peptidebibliotheken op maat. Tevens leveren we diensten voor peptidesynthese en -constructie op maat.

Fagedisplaytechnologie is een techniek voor het selecteren van functionele exogene peptiden in fagen op het oppervlak van de capside. Hierbij blijven de structurele en functionele eigenschappen van het exogene eiwit of peptide behouden, zonder dat dit het vermogen van de recombinante faag om de gastcel te infecteren beïnvloedt. Elk faagvirusdeeltje kan slechts één willekeurig exogeen peptide op zijn oppervlak presenteren. De verzameling van alle fagen die verschillende peptiden presenteren, vormt een fagedisplaypeptidenbibliotheek. Fagedisplaypeptidenbibliotheken zijn krachtige hulpmiddelen voor de expressie van meerdere op maat gesynthetiseerde peptiden en voor specifieke peptidescreening. Ze worden veelvuldig gebruikt op het gebied van antigene epitoopanalyse, geneesmiddelenscreening en vaccinontwikkeling.

Inleiding tot de constructie van een peptidenbibliotheek

Het construeren van peptidebibliotheken houdt in dat peptidenbibliotheken worden uitgebreid door peptide-DNA-sequenties in verschillende formaten te ligeren aan de overeenkomstige faag-eiwitsequenties, en door middel van faag-reassemblage het doelpeptide op het faagoppervlak te positioneren. Peptidebibliotheekconstructie op basis van faagdisplaytechnologie valt onder de categorie biosynthese van peptiden, en er zijn methoden voor peptidesynthese in vloeibare fase en in vaste fase op de markt. Alpha Lifetech beschikt momenteel over diverse technologieën voor peptidebibliotheekconstructie, waarmee zowel kant-en-klare als gerandomiseerde peptidebibliotheken kunnen worden geleverd, afhankelijk van de sequentiegrootte van de peptidemoleculen. Dit omvat de constructie van 7-peptidebibliotheken, 12-peptidebibliotheken, 15-peptidebibliotheken, cyclische 7-peptidebibliotheken en cyclische 12-peptidebibliotheken. Daarnaast kunnen peptidebibliotheken op maat worden gemaakt voor diverse typen en toepassingen.

Toepassing van de constructie en screening van peptidebibliotheken

Gerandomiseerde peptidebibliotheken, verkregen via faagdisplaytechnologie, bieden functionele toegang tot peptiden en vormen een fysieke link tussen fenotype (weergegeven peptide) en genotype (gecodeerd DNA). Deze bibliotheken zijn geschikt voor screeningsprocessen waarbij gebonden klonen worden gescheiden van ongebonden klonen door middel van affiniteitszuivering. Faagdisplay-peptidebibliotheken kunnen worden gebruikt voor (i) karakterisering van immuun-cellulaire epitopen, (ii) screening van receptor- of eiwitgebonden bioactieve peptiden, peptiden gebonden aan niet-eiwitdoelen, cel- of orgaanspecifieke peptiden, enz., en (iii) ontwikkeling van peptide-gemedieerde geneesmiddelentoedieningssystemen.

Proces voor het samenstellen van een peptidebibliotheek met behulp van fagedisplay

Figuur 1. Platform voor de constructie van een peptidebibliotheek met behulp van fagedisplay.

Werkproces voor het construeren van een peptidebibliotheek met behulp van fagedisplay

Proces	Service-inhoud	Tijdlijn
1. Synthese van nucleotidevolgordes	Willekeurige synthese van nucleotidesequenties met een door de klant opgegeven lengte.	2-3 weken
2. Polymerisatie en vertering	Polymerisatie en digestie van de gesynthetiseerde DNA-sequentie	1 dag
3. Constructie van elektroconversiebibliotheken	Er werden ER2738-gastbacteriën geconstrueerd, waarna E. coli werd getransformeerd met het goed geconstrueerde recombinante plasmide.	1 week
4. Detectie van de grootte en diversiteit van peptidebibliotheken	Bepaling van de grootte van de peptidebibliotheek door middel van kolonietelling en de diversiteit van de peptidebibliotheek door middel van sequentiebepaling.	2-3 dagen
5. Constructie van een peptidenbibliotheek met behulp van faagdisplay	Door de fagenverpakkingspeptidebibliotheek te infecteren	1 week