Fage Display Peptide Bibliotheek Platform

Op basis van faagdisplaytechnologie kan Alpha Lifetech klanten hoogwaardige diensten bieden voor de constructie en screening van faagdisplay-peptidebibliotheken, waaronder lineaire 7-peptidebibliotheken, lineaire 9-peptidebibliotheken, lineaire 10-peptidebibliotheken, lineaire 15-peptidebibliotheken, lineaire 12-peptidebibliotheken, cyclische 7-peptidebibliotheken en andere peptidebibliotheken. De diversiteit van de bibliotheken, het invoegpercentage en het positieve percentage kunnen meer dan 90% bedragen, waarmee aan de uiteenlopende behoeften van verschillende klanten voor faagdisplay-peptidebibliotheken wordt voldaan.

Fagedisplaybibliotheken worden veelvuldig gebruikt in biomedisch onderzoek en toepassingen. Zo kunnen ze bijvoorbeeld bij de ontwikkeling en engineering van antilichamen worden ingezet om antilichaamvarianten te screenen en te verbeteren. Bij het screenen van geneesmiddelen en het ontdekken van potentiële aangrijpingspunten voor geneesmiddelen kunnen ze worden gebruikt om eiwitten of peptiden met geneesmiddelpotentieel op te sporen. In vaccinonderzoek kunnen ze worden gebruikt voor de selectie van vaccinantigenen en de ontwikkeling van vaccins. Daarnaast kunnen fagedisplaybibliotheken ook worden gebruikt in tal van andere vakgebieden, zoals onderzoek naar eiwitinteracties, kankerdiagnose en -behandeling.

Fage-displaytechnologie

Fagedisplaytechnologie is een technologie waarbij het gen voor een doelwitproteïne wordt gefuseerd met het gen voor een oppervlakteproteïne van een faag. Hierdoor wordt het doelwitproteïne in de vorm van een fusieproteïne op het faagoppervlak aangebracht door middel van genexpressie. Deze op het faagoppervlak weergegeven proteïnen behouden hun relatieve ruimtelijke structuur en biologische activiteit en kunnen worden gescreend, gedetecteerd en herkend door interactie met specifieke antilichamen of andere moleculen. De objecten die met fagedisplaytechnologie worden weergegeven, omvatten antilichamen, antilichaamfragmenten, peptidesegmenten, cDNA, enzovoort.

Het systeem van faagdisplaytechnologie omvat hoofdzakelijk M13-faagdisplaysystemen (zoals PⅢ-displaysystemen, PⅧ-displaysystemen, enz.), λ-faagdisplaysystemen, T4-faagdisplaysystemen, T7-faagdisplaysystemen, enz. Elk van deze systemen heeft zijn eigen kenmerken en is geschikt voor verschillende onderzoeksbehoeften. De M13-faag lyseert, dankzij zijn lysogene eigenschappen, de gastcel niet na infectie, waardoor hij zich continu kan vermenigvuldigen en vreemde fragmenten in de gastcel kan tot expressie brengen. Dit maakt hem geschikt voor langdurige screening en stabiele expressie. Door zijn korte levenscyclus en hoge replicatie-efficiëntie kan de T7-faag snel een groot aantal nakomelingen produceren, wat hem geschikt maakt voor high-throughput screening en snelle expressie.

	M13-faag	T7-faag
1. Morfologische structuur	draadvormige faag	Polyhedrale faag
2. Genetisch materiaal	Circulair enkelstrengs DNA-molecuul	Lineair, dubbelstrengs, terminaal overbodig DNA
3. Replicatie en infectie	Lysogene fagen, die in het periplasma worden gevormd, kunnen uit bacteriële membranen worden uitgescheiden zonder de gastheercellen te lyseren.	Virulente fagen, nakomelingen van fagen die in het bacteriële cytoplasma zijn gevormd, komen vrij door lysis van het celmembraan.
4. Weergavesysteem	Er werd een displaysysteem geconstrueerd met behulp van pIII- en PVIII-capside-eiwitten, geschikt voor het weergeven van vreemde peptiden/eiwitten van verschillende groottes.	Het displaysysteem is opgebouwd met 10B-capsideproteïne, dat geen secretieproces vereist en geschikt is voor het weergeven van peptiden/proteïnen die een remmend effect hebben op het secretieproces.
5. Toepassingsvoordeel	Het is geschikt voor de weergave en langdurige screening van kleine peptidemoleculen.	Het biedt voordelen bij de snelle expressie en grootschalige screening van macromoleculaire eiwitten.

typen peptidebibliotheken voor fagedisplay

Alpha Lifetech heeft ruime ervaring met de constructie en screening van peptidebibliotheken op basis van faagdisplay en biedt een verscheidenheid aan peptidebibliotheektypen. Afhankelijk van de lengte van het peptide kunnen deze worden onderverdeeld in 7-, 9-, 10-, 12- en 15-peptidebibliotheken. Afhankelijk van de ruimtelijke conformatie van de polypeptiden kunnen ze worden onderverdeeld in lineaire faagpeptidebibliotheken en cyclische faagpeptidebibliotheken.

Lineaire faagpeptidebibliotheek

Het peptidegen wordt ingevoegd in het coderende gebied voor het coatproteïne van het faaggenoom, meestal pIII of PVIII, en wordt weergegeven als een lineaire, rechte keten. Lineaire peptideketens kunnen in vivo gemakkelijk afbreken, waardoor hun bindingsvermogen en stabiliteit kunnen worden beïnvloed.

cyclische faagpeptidebibliotheek

Het gemodificeerde ringpeptide zal onder invloed van disulfidebindingen of andere bindingsstructuren een vaste conformatie aannemen. Dit zal niet alleen de metabolische stabiliteit en biologische beschikbaarheid aanzienlijk verbeteren, maar ook beter voldoen aan de bindingsvereisten van de receptor-ligand (antilichaam-antigeen) conformatie.

Proces voor het samenstellen van een peptidebibliotheek met behulp van fagedisplay

Selectie van fagen

M13-type fagen of T7-type fagen worden doorgaans als dragers geselecteerd.

Constructie van een fagedisplay-peptidebibliotheek

Een faagvector wordt geconstrueerd die een coderende sequentie voor een vreemd eiwit of polypeptide kan bevatten, meestal inclusief een promotor, selectiemarkers en geschikte regulerende elementen. De coderende sequentie van een vreemd eiwit of peptide wordt in een faagdrager ingebracht, meestal door middel van knip- en ligatietechnieken met restrictie-enzymen. De geconstrueerde faagvector wordt getransformeerd in de gastcel, waardoor de faag zich kan vermenigvuldigen en vreemde eiwitten of peptiden in de cel tot expressie kan brengen. Faagbibliotheken met meerdere verschillende vreemde eiwitten of peptiden worden geprepareerd door middel van uitgebreide transformatie en amplificatie.

faagdisplay peptidebibliotheekscreening

Fixeer doelmoleculen (zoals eiwitten, receptoren of antilichamen) op een vaste drager. Incubeer de geconstrueerde faagdisplay-peptidebibliotheek met een gefixeerd doelmolecuul, zodat de peptiden op de faag zich eraan kunnen binden. Tijdens dit proces worden niet-gebonden bacteriofagen verwijderd door te wassen, terwijl de bacteriofagen die zich aan het doelmolecuul binden behouden blijven. De bacteriofagen met een hoge affiniteit worden geëlueerd. De teruggewonnen bacteriofagen worden vermenigvuldigd door Escherichia coli te infecteren en vervolgens onderworpen aan de volgende screeningsronde. Het duurt meestal 3-5 screeningsrondes om peptiden met een hoge bindingscapaciteit te verkrijgen.

Peptideontwerp en -synthese

Synthetiseer peptiden op basis van screeningslocaties.

Figuur 1. Constructie en screening van een peptidebibliotheek met behulp van faagdisplay.

Gerelateerd platform

Alpha Lifetech kan klanten hoogwaardige diensten bieden voor de constructie en screening van peptidebibliotheken met behulp van faagdisplay.

fagedisplay antilichaambibliotheek - Alpha Lifetech

Platform voor de constructie van peptidebibliotheken met behulp van fagedisplay

Alpha Lifetech beschikt over diverse technologieën voor de constructie van peptidebibliotheken. We bieden hoofdzakelijk diensten aan voor de constructie van T7-peptidebibliotheken en M13-peptidebibliotheken, afhankelijk van het type faag.

LEES MEER

faagdisplay-screening - Alpha Lifetech faagdisplay-screening - Alpha Lifetech

Fage Display Peptide Library Screening Platform

Alpha Lifetech heeft ruime ervaring met het screenen van peptide-faagbibliotheken en biedt sterke technische ondersteuning voor de ontwikkeling van geneesmiddelen op basis van kleine moleculen, klinische diagnostiek, ziektebehandeling en biologisch onderzoek.

LEES MEER