Platform voor fagedisplaypeptidebibliotheek

Op basis van de fagedisplaytechnologie kan Alpha Lifetech klanten hoogwaardige diensten leveren voor de constructie en screening van fagedisplaypeptidebibliotheken, waaronder lineaire 7-peptidebibliotheken, lineaire 9-peptidebibliotheken, lineaire 10-peptidebibliotheken, lineaire 15-peptidebibliotheken, lineaire 12-peptidebibliotheken, cyclische 7-peptidebibliotheken en andere peptidebibliotheken. De diversiteit in bibliotheken, het insertiepercentage en het positieve percentage kunnen oplopen tot meer dan 90%, om zo te voldoen aan de verschillende behoeften van verschillende klanten voor fagedisplaypeptidebibliotheken.

Faagdisplaybibliotheken worden veel gebruikt in biomedisch onderzoek en toepassingen. Zo kunnen faagdisplaybibliotheken bijvoorbeeld worden gebruikt voor het screenen en verbeteren van antilichaamvarianten bij antilichaamengineering en -ontwikkeling. Bij het screenen van geneesmiddelen en het ontdekken van medicijndoelen kunnen faagdisplaybibliotheken worden gebruikt om te zoeken naar eiwitten of peptiden met potentie voor een geneesmiddel. Bij vaccinonderzoek kunnen faagdisplaybibliotheken worden gebruikt voor de selectie van vaccinantigenen en de ontwikkeling van vaccins. Daarnaast kunnen faagdisplaybibliotheken ook worden gebruikt in diverse vakgebieden, zoals onderzoek naar eiwitinteracties en de diagnose en behandeling van kanker.

Faagdisplaytechnologie

Faagdisplaytechnologie is een technologie die het gen voor het doeleiwit fuseert met het gen voor het faagoppervlakeiwit, en het doeleiwit door genexpressie als fusie-eiwit op het faagoppervlak laat verschijnen. Deze eiwitten die op het faagoppervlak worden weergegeven, kunnen hun relatieve ruimtelijke structuur en biologische activiteit behouden en kunnen worden gescreend, gedetecteerd en herkend door interactie met specifieke antilichamen of andere moleculen. De objecten die met faagdisplaytechnologie worden weergegeven, zijn onder andere antilichamen, antilichaamfragmenten, peptidesegmenten en cDNA.

Het systeem voor faagdisplaytechnologie omvat voornamelijk het M13-faagdisplaysysteem (zoals het PⅢ-displaysysteem, het PⅧ-displaysysteem, enz.), het λ-faagdisplaysysteem, het T4-faagdisplaysysteem, het T7-faagdisplaysysteem, enz. Elk van deze systemen heeft zijn eigen kenmerken en is geschikt voor verschillende onderzoeksbehoeften. Dankzij zijn lysogene eigenschappen lyseert de M13-faag de gastheercel niet na infectie, waardoor deze continu kan repliceren en vreemde fragmenten in de gastheercel tot expressie kan brengen. Dit maakt de faag geschikt voor screening op lange termijn en stabiele expressie. Door zijn korte levenscyclus en hoge replicatie-efficiëntie kan de T7-faag snel een groot aantal fagen produceren, wat geschikt is voor high-throughput screening en snelle expressie.

	M13-faag	T7-faag
1. Morfologische structuur	Filamenteuze fage	Polyhedrale fage
2. Genetisch materiaal	Circulair enkelstrengs DNA-molecuul	Lineair, dubbelstrengs, terminaal overbodig DNA
3. Replicatie en infectie	Lysogene fagen, die in het periplasma worden geassembleerd, kunnen door bacteriële membranen worden afgescheiden zonder dat de gastheercellen worden vernietigd.	Virulente fagen, nakomelingen van fagen die in het bacteriële cytoplasma worden geproduceerd, komen vrij door lysis van het celmembraan.
4. Weergavesysteem	Er werd een displaysysteem opgebouwd met behulp van pIII- en PVIII-capside-eiwitten, dat geschikt is voor het presenteren van vreemde peptiden/eiwitten van verschillende groottes.	Het displaysysteem is opgebouwd uit het 10B-capside-eiwit, dat geen secretieproces nodig heeft en geschikt is voor de weergave van peptiden/eiwitten die een remmende werking hebben op het secretieproces.
5. Toepassingsvoordeel	Het is geschikt voor de weergave en langetermijnscreening van kleine moleculaire peptiden.	Het biedt voordelen bij de snelle expressie en high-throughput screening van macromoleculaire eiwitten.

Phage Display Peptide Bibliotheektypen

Alpha Lifetech heeft ervaring met het samenstellen en screenen van faagdisplaypeptidebibliotheken en biedt een ruime keuze aan peptidebibliotheken. Afhankelijk van de lengte van het peptide kan het worden onderverdeeld in 7 peptidebibliotheken, 9 peptidebibliotheken, 10 peptidebibliotheken, 12 peptidebibliotheken en 15 peptidebibliotheken. Afhankelijk van de ruimtelijke conformatie van polypeptiden kan het worden onderverdeeld in lineaire faagpeptidebibliotheken en cyclische faagpeptidebibliotheken.

Lineaire faagpeptidebibliotheek

Het peptidegen wordt ingevoegd in het coderende gebied van het manteleiwit van het faaggenoom, meestal pIII of PVIII, en wordt weergegeven als een lineaire rechte keten. Lineaire peptideketens kunnen in vivo gemakkelijk afbreken en hun bindingsvermogen en stabiliteit kunnen worden beïnvloed.

cyclische faagpeptidebibliotheek

Het gemodificeerde ringpeptide vormt een vaste conformatie onder invloed van disulfidenbindingen of andere bindende bindingen. Hierdoor wordt niet alleen de metabolische stabiliteit en biologische beschikbaarheid sterk verbeterd, maar wordt ook beter voldaan aan de bindingsvereisten van de receptor-ligand (antilichaam-antigeen) conformatie.

Proces van de fagedisplaypeptidebibliotheek

Selectie van fagen

Meestal worden fagen van het type M13 of fagen van het type T7 geselecteerd als dragers.

Constructie van fagedisplaypeptidebibliotheek

Construeer een faagvector die een coderende sequentie voor een vreemd eiwit of polypeptide kan bevatten, die gewoonlijk een promotor, selectieve markers en geschikte regulerende elementen omvat. De insertie van de coderende sequentie van een vreemd eiwit of peptide in een faagdrager, gewoonlijk door middel van knip- en ligatiemethoden met restrictie-enzymen. De geconstrueerde faagvector wordt getransformeerd in de gastheercel, waardoor de faag zich kan repliceren en vreemde eiwitten of peptiden in de cel tot expressie kan brengen. Faagbibliotheken met meerdere verschillende vreemde eiwitten of peptiden worden bereid door middel van uitgebreide transformatie en amplificatie.

fage display Peptide Bibliotheek screening

Fixeer doelmoleculen (zoals eiwitten, receptoren of antilichamen) op een vaste-fasedrager. Incubeer de geconstrueerde faagdisplaypeptidebibliotheek met een vast doelwit zodat de peptiden op de faag zich aan het doelwitmolecuul kunnen binden. Tijdens dit proces worden ongebonden bacteriofagen verwijderd door wassen, terwijl bacteriofagen die aan het doelwit binden behouden blijven. De met hoge affiniteit gebonden bacteriofagen worden geëlueerd. De teruggewonnen bacteriofagen worden geamplificeerd door infectie met Escherichia coli en vervolgens onderworpen aan de volgende screeningsronde. Meestal zijn 3-5 screeningsrondes nodig om peptiden met een hoge bindingsefficiëntie te verkrijgen.

Peptideontwerp en -synthese

Synthetiseren van peptiden op basis van screeningsites.

Figuur 1. Proces van constructie en screening van fagedisplaypeptidebibliotheek

Gerelateerd platform

Alpha Lifetech kan klanten hoogwaardige diensten leveren voor de constructie en screening van fagedisplaypeptidebibliotheken

fagedisplay-antilichaambibliotheek - Alpha Lifetech

Platform voor de constructie van fagedisplaypeptidebibliotheken

Alpha Lifetech biedt een aantal technologieën voor de constructie van peptidebibliotheken. We bieden voornamelijk diensten aan voor de constructie van T7-peptidebibliotheken en M13-peptidebibliotheken, afhankelijk van het faagtype.

LEES MEER

fagedisplayscreening - Alpha Lifetech fagedisplayscreening - Alpha Lifetech

Screeningplatform voor fagedisplaypeptidebibliotheek

Alpha Lifetech heeft ruime ervaring met het screenen van peptidefaagbibliotheken en biedt krachtige technische ondersteuning voor de ontdekking van kleine moleculen als geneesmiddel, klinische diagnose, ziektebehandeling en biologisch onderzoek.

LEES MEER