scFv-antilichaamontdekkingsservice

Alpha Lifetech Inc.is er trots op uitgebreide scFv-bibliotheekconstructiediensten aan te bieden om te voldoen aan de uiteenlopende behoeften van wetenschappers wereldwijd. Ons doel is de eisen van verschillende klanten te begrijpen en daaraan te voldoen, en te helpen bij eventuele toekomstige en opkomende problemen in het onderzoekswerk.

Wat is scFv - Single Chain Variable Fragment Antibody?

Een single-chain antilichaam bestaat uit een variabel licht (VL) en een zwaar (VH) antilichaamfragment, verbonden door een flexibele peptide-linker. Dit fragment kan gemakkelijk in een functionele vorm op het oppervlak van een faag tot expressie worden gebracht en staat daarom algemeen bekend als een single-chain variable fragment (scFv). Het scFv-fragment is de kleinste eenheid van een immunoglobulinemolecuul (met uitzondering van nanobodies) met een functie in antigeenbindende activiteiten en maakt eiwitengineering mogelijk om de eigenschappen van scFv (single-chain variable fragment) te verbeteren, zoals het verhogen van de affiniteit en het aanpassen van de specificiteit. Bij Alpha Lifetech Inc. worden scFv-antilichamen voornamelijk geconstrueerd uit hybridoma's, miltcellen van geïmmuniseerde muizen en B-lymfocyten van mensen. Totaal RNA of mRNA wordt eerst geïsoleerd uit hybridoma's, miltcellen, lymfocyten en beenmergcellen, waarna het wordt omgezet in cDNA om te dienen als template voor antilichaamgenamplificatie (PCR).

scFv-antilichaamontwikkeling - Fage-displaytechnologie

De diversiteit van een bibliotheek wordt bepaald door het aantal onafhankelijke klonen. Om een ​​grote scFv-antilichaambibliotheek te produceren, gebruiken onze wetenschappers onze eigen tweestapsstrategie voor bibliotheekgeneratie. In de eerste stap van de beschreven procedure worden primaire repertoires bereid uit PCR-producten die de VH-, Vκ- en Vλ-domeinen coderen, wat resulteert in typische middelgrote bibliotheken (1 tot 100 miljoen klonen). In de tweede stap worden VH- (of VL-)fragmenten geïsoleerd door digestie van plasmide-DNA dat is gezuiverd uit de primaire repertoires en gekloneerd in de acceptor-fagemidvector die de VL- (of VH-)repertoires bevat. Deze innovatie vergroot de omvang van de bibliotheken aanzienlijk (10¹⁰-10¹²klonen).

Grootschalige en snelle screening van scFv-antilichamen

Voor de grootschalige productie van scFv is het duidelijk dat de keuze van het expressiehostsysteem een ​​aanzienlijke invloed heeft op het procesontwerp, de downstream-verwerkingsstrategieën en de proceskosten. De keuze van de productieroute hangt af van de relevantie van post-translationele modificaties en de tijdlijn voor klinische ontwikkeling en economische aspecten, die in wezen ook afhankelijk zijn van het 'hostsysteem'. Er bestaat geen universeel expressiesysteem dat hoge productexpressieniveaus garandeert voor een breed scala aan verschillende antilichamen of zelfs eiwitten.