Monoklonale antilichamen (mAb's) zijn de pioniers op het gebied van antilichaamgeneesmiddelen. Meer dan 100 monoklonale antilichamen zijn goedgekeurd voor de behandeling van kanker en infectieziekten, en hebben een eigen markt voor geneesmiddelenontwikkeling. Ze tonen hun unieke therapeutische waarde aan. De technologie voor het isoleren van antilichamen uit individuele B-cellen, een nieuwe generatie antilichaamontwikkelingstechnologie, maakt het mogelijk om efficiënt en snel antilichamen te isoleren uit individuele B-cellen. Dit is een doorbraak in de antilichaamproductietechnologie na hybridoma's en faagdisplay. Deze technologie kan worden gebruikt voor de productie van antilichamen tegen meerdere diersoorten, zoals konijnen, muizen, kamelen, schapen en kippen. De technologie voor het isoleren van individuele B-cellen heeft uitstekende voordelen, zoals een hoge specificiteit, hoge activiteit en hoge affiniteit. Dankzij het platform voor het isoleren van individuele B-cellen heeft Alpha Lifetech voordelen op het gebied van screeningstijd en het verkrijgen van hoogwaardige antilichamen. Het bedrijf biedt een totaaloplossing voor technische diensten, zoals antigeenontwerp, -synthese en -modificatie, dierimmuniteitstesten, screening van individuele B-cellen, single-cell sequencing, high-throughput screening, expressie en zuivering, en functionele verificatie, om aan de uiteenlopende behoeften van klanten te voldoen.

Selecteer het juiste antigeen voor de proefdieren (zoals muizen, konijnen, enz.) voor immuunstimulatie, zodat ze specifieke antilichamen tegen het antigeen kunnen produceren.

Dierlijke immunisatie is de eerste fase van antilichaamproductie. Bij dierlijke immunisatie wordt gebruikgemaakt van het humorale immuunresponsmechanisme van het organisme zelf. Door continue stimulatie met antigenen ontwikkelen dieren een sterke immuunrespons en scheiden ze vervolgens specifieke antilichamen af ​​tegen specifieke antigenen.

B-cellen werden geïsoleerd uit perifeer bloed, milt of lymfeklieren van immuun dieren. Deze B-cellen werden immunologisch gestimuleerd om antilichamen tegen specifieke antigenen te produceren.

Door middel van fysische of chemische methoden (zoals dichtheidsgradiëntcentrifugatie, scheiding met magnetische kralen, enz.) kunnen B-cellen worden verrijkt, onzuivere cellen worden verwijderd, de zuiverheid van de B-cellen worden verbeterd en de efficiëntie van de daaropvolgende scheiding worden verhoogd.

Fluorescentie-geactiveerde celsortering (FACS), magnetische celscheiding (MACS), microfluïdische celsortering (MCS) of andere high-throughput screeningtechnieken, in combinatie met antigeenspecifieke labeling, kunnen worden gebruikt om individuele B-cellen uit verrijkte B-cellen te screenen om gerichte antilichamen te produceren.

Wanneer een enkele B-cel wordt geïsoleerd uit een gemengde B-celpopulatie, moeten de antilichaamgenen ervan worden gesequenced met behulp van single-cell sequencing-technologie en geanalyseerd om de DNA-sequentie-informatie van de variabele regio van de zware keten (VH) en de variabele regio van de lichte keten (VL) te verkrijgen. Single-cell sequencing-technologie omvat hoofdzakelijk drie stappen: isolatie van de enkele cel, intracellulaire nucleïnezuuramplificatie en sequentieanalyse. Het principe van single-cell sequencing is het amplificeren van de sporen van het volledige genoom-DNA of -RNA van geïsoleerde enkele cellen om een ​​compleet genoom of transcriptoom met een hoge dekking te verkrijgen voor high-throughput sequencing.

Door middel van high-throughput screening kunnen de gensequenties van duizenden B-cellen tegelijk worden verkregen, waardoor de snelheid van antilichaamontdekking aanzienlijk wordt verhoogd. Deze sequentie-informatie kan vervolgens worden gebruikt voor de constructie en screening van antilichaambibliotheken.

Figuur 2. Schematisch diagram van het vangen van individuele B-cellen, het samenstellen van een bibliotheek, high-throughput screening en sequentiebepaling.(Bronverwijzing: Massaal parallelle single-cell B-celreceptorsequentiebepaling maakt snelle ontdekking mogelijk van diverse antigeen-reactieve antilichamen..)

(1) Recombinant eiwit: ≥2,5 mg, eiwitzuiverheid >85%, eiwitmolecuulgewicht groter dan 10 kDa, oplosbare eiwitconcentratie tussen 0,5 en 5 mg/ml. Indien antigeen-affiniteitszuivering vereist is, is nog eens 10 mg recombinant eiwit nodig.

(2) Polypeptiden en kleine moleculen: Kale peptide ≥10 mg, peptidezuiverheid >90%, niet minder dan 10 aminozuren, koppeling KLH/BSA/OVA of andere dragereiwitten; Kleine moleculen vereisen voorafgaande structurele evaluatie.