Service voor de aanleg van stabiele cellijnen

Alpha Lifetech is al jarenlang intensief betrokken bij de ontwikkeling van processen voor de constructie van stabiele cellijnen. Het bedrijf heeft een perfect platform voor de constructie van stabiele cellijnen ontwikkeld, met meer dan 300 soorten tumorcellen en primaire cellen. Dit platform levert stabiele cellijnen op, bespaart tijd bij wetenschappelijk onderzoek en projectontwikkeling en vereenvoudigt de daaropvolgende productie. Alpha Lifetech biedt klanten ook diensten aan zoals de ontwikkeling van stamprocessen, stamselectie, stamconstructie, recombinantproteïne- en antilichaamproductie, waarmee een solide basis wordt gelegd voor de ontwikkeling van nieuwe geneesmiddelen.

Alpha Lifetech beschikt over een met lentivirus geïnfecteerd celplatform, waarmee het experimentele proces kan worden aangepast voor verschillende typen stabiele transmutatiestammen. We hebben gen-knockouttechnologie gebruikt om CRISPR/Cas9-knockoutcellijnen te construeren. Genoverexpressie- en gensilencingtechnieken werden gebruikt om transmutatiestammen te stabiliseren. Genplaats-specifieke integratie completeert de diensten voor de constructie van cellijnen met vertexintegratie.

Inleiding tot de constructie van stabiele cellijnen

Een stabiele cellijn verwijst naar een cellijn waarin vreemde genen in het genoom van de gastcel zijn geïntegreerd, zodat deze genen gedurende lange tijd stabiel in de gastcel tot expressie kunnen komen. Het principe is om het vreemde gen te reduceren tot een vector met een bepaalde resistentie, gastcellen te transfecteren, het vreemde gen in het chromosoom van de gastcel te integreren en de resistentiegenen in de vector te screenen om stabiele cellijnen te verkrijgen met een hoge expressie van het doelwitproteïne of een stabiele silencing van het doelwitgen, die voldoen aan de eisen van het experiment.

Alpha Lifetech beschikt over een eigen opslagwerkplaats, een perfect systeem voor het invriezen en opslaan van cellen, en meer dan 300 soorten tumorcellen en primaire cellen waaruit u kunt kiezen, speciaal voor uw wetenschappelijk onderzoek.

Proces voor het opbouwen van een stabiele cellijn

Methode voor het construeren van een stabiele cellijn

De methoden voor het construeren van stabiele cellijnen omvatten lentivirus-gemedieerde, transposon-gemedieerde, CRISPR/Cas9-gemedieerde en plasmide-screening.

Lentivirus-gemedieerde transcriptie is een van de meest gebruikte methoden om stabiele cellijnen te construeren. Deze aanpak heeft als voordeel dat vrijwel alle celtypen geïnfecteerd kunnen worden en genetisch materiaal in het genoom van de gastcel kan worden geïntegreerd voor stabiele expressie gedurende een lange periode. Dit systeem kent echter bepaalde beperkingen. Lentivirussen hebben een beperkte verpakkingscapaciteit, waardoor ze niet geschikt zijn voor de transcriptie van genen met lange transcriptieregio's.

In vergelijking met lentivirus-gemedieerde transfectie kent transposon-gemedieerde transfectie geen beperking qua genlengte, en door de voortdurende optimalisatie van de technologie is de efficiëntie van transposon-insertie aanzienlijk verbeterd. Het nadeel is dat er bepaalde beperkingen gelden voor primaire cellen en dat transfectie van cellen lastig kan zijn.

CRISPR/Cas9-gemedieerde technieken omvatten het uitschakelen van CRISPR-genen (crispr gen knockout) en het inbrengen van CRISPR-genen (crispr gen knockin). Bij het uitschakelen van een CRISPR-gen wordt een dubbelstrengs DNA-fragment geïntroduceerd, wat resulteert in functieverlies van het doelgen. Bij het inbrengen van een CRISPR-gen worden vreemde DNA-fragmenten in specifieke genen geïntroduceerd, wat gebruikt kan worden om defecte genen te repareren of nieuwe functionele genen te introduceren.

Plasmidscreening is de meest primitieve methode voor het construeren van cellijnen. Het enige wat nodig is, is het succesvol transfecteren van het doelplasmid in de cel en het gebruik van de bijbehorende resistentie tijdens langdurige screening. Dit levert een zekere kans op het verkrijgen van stabiele cellijnen op.

Methoden voor het construeren van verschillende stabiele cellijnen

Bemiddelingsmethode	Lentivirussysteem	Transposonsysteem	CRISP/Cas9-gemedieerd	Plasmidescreening
Draagvermogen	5 kb	10 kb	5 kb	10 kb
Bemiddelde efficiëntie	Hoog	Normaal	Normaal	Laag
Tijdlijn	1-2 weken	3-4 weken	3-4 weken	4-6 weken
Voordeel	Snel en efficiënt	Veiligheid en stabiliteit	Vaste-puntintegratie	Lagere kosten
Tekortkoming	Biologische veiligheidsrisico	Expressie-abundantie normaal	CAS9-transductie is moeilijk en kostbaar.	Lage efficiëntie en instabiliteit

Technische moeilijkheden bij de constructie van stabiele cellijnen

Voordat het proces wordt opgeschaald, wordt een kleine bioreactor gebruikt om parameters zoals gas, het kweekvloeistofsysteem en de minimale hydrodynamische belasting van de cellen te bepalen, om ervoor te zorgen dat de kweek op verschillende schaalniveaus mogelijk is. Zelfs als de juiste procesparameters zijn vastgesteld, is de omgeving in grote bioreactoren bij de producent echter vaak ongelijkmatig, waardoor de kans op mislukking groot is. Alpha Lifetech heeft jarenlange ervaring met het opschalen van kweekprocessen, waardoor fouten tot op zekere hoogte kunnen worden voorkomen, risico's worden verminderd en de slagingskans aanzienlijk wordt verhoogd. Tegelijkertijd garandeert Alpha Lifetech de consistentie van de gebruikte grondstoffen en kweekmedia, waardoor het risico op mislukking bij het opschalen van het celkweekproces wordt verlaagd.

Alpha Lifetech beschikt over een uitgebreid platform voor de ontwikkeling van stabiele cellijnen, waarmee de stabiliteit van de cellijnen tijdens de productie wordt gewaarborgd. We kunnen u tevens diensten op maat aanbieden die aan uw specifieke behoeften voldoen.

Inhoud van de dienst voor de aanleg van stabiele cellijnen

Inhoud	Tijdlijn
De door de klant aangeleverde HEK293-cellijn wordt gekweekt.	3-5 maanden
Constructie van een sgRNA-Cas9-plasmide (met screeningsgen G418).
De sgRNA-Cas9 en het DNA-reparatiesjabloon werden samen overgebracht naar de HEK293-cellijn.
Screening van monoklonale cellijnen (GFP-gen) knockin-positieve kloon).
Levering: Vector, GFP-gen knock-in stam, sequentiebepalingsresultaten, alle ruwe data, laboratoriumrapport

Cellen kunnen worden getraceerd.

De cellen worden aangeschaft bij professionele organisaties zoals ATCC en kunnen een bewijs leveren dat aan uw registratievereisten voldoet.

Productievoordeel

Alpha Lifetech heeft jarenlange ervaring in het voldoen aan uiteenlopende ontwikkelingsbehoeften; we beschikken over diverse celtypen, een eigen opslagwerkplaats, perfecte celvriesfaciliteiten en een geavanceerd opslagbeheersysteem.

kwaliteitscontrole van het project

Elk project ondergaat strenge kwaliteitscontroles om te garanderen dat klanten cellijnen ontvangen die aan hoge eisen voldoen.

Technisch voordeel

Naast ingenieurs met uitgebreide ervaring in celtechnologie, beschikken we over geavanceerde, evolutionaire algoritmen om de reactoromstandigheden te verbeteren en procesparameters aan te passen.

Heeft u vragen? Neem dan gerust contact met ons op.

Leave Your Message

Uitgelichte service

0102