Stabiele cellijnen constructie service

Alpha Lifetech is al jarenlang nauw betrokken bij de ontwikkeling van processen voor de constructie van stabiele cellijnen. Het bedrijf heeft een perfect platform voor de constructie van stabiele cellijnen ontwikkeld, met meer dan 300 soorten tumorcellen en primaire cellen. Dit platform kan stabiele cellijnen opleveren, tijd besparen bij wetenschappelijk onderzoek of projectonderzoek en de daaropvolgende productie vergemakkelijken. Alpha Lifetech kan klanten ook diensten aanbieden zoals de ontwikkeling van stamprocessen, stamscreening, stamconstructie en de productie van recombinante eiwitten en antilichamen, waarmee een onderzoeksbasis voor nieuwe geneesmiddelen wordt gelegd.

Alpha Lifetech beschikt over een lentivirus-geïnfecteerd celplatform, waarmee het experimentele proces kan worden aangepast voor verschillende soorten celstabiele transmutatiestammen. We gebruikten gen-knockouttechnologie om CRISPR/Cas9-knockoutcellijnen te construeren. Gen-overexpressie en gen-silencingtechnieken werden gebruikt om transmutatiestammen te stabiliseren. Gen-sitespecifieke integratie completeert de vertexintegratie van cellijnconstructiediensten.

Inleiding tot de constructie van stabiele cellijnen

Een stabiele cellijn verwijst naar een cellijn die vreemde genen integreert in het genoom van de gastheercel, zodat vreemde genen gedurende lange tijd stabiel tot expressie kunnen komen in de gastheercel. Het principe is om het vreemde gen te reduceren tot een vector met een bepaalde resistentie, gastheercellen te transfecteren, het vreemde gen te integreren in het gastheerchromosoom en de resistentiegenen in de vector te screenen om stabiele cellijnen te verkrijgen met een hoge expressie van het doeleiwit of stabiele inactivatie van het doelgen die voldoen aan de eisen van het experiment.

Alpha Lifetech beschikt over een onafhankelijke opslagwerkplaats, het perfecte systeem voor het invriezen en beheren van cellen en over meer dan 300 soorten tumorcellen en primaire cellen waaruit u kunt kiezen, speciaal voor uw wetenschappelijk onderzoek.

Stabiel cellijnconstructieproces

Methode voor de constructie van stabiele cellijnen

Methoden voor de constructie van stabiele cellijnen omvatten lentivirus-gemedieerde, transposon-gemedieerde, CRISPR/Cas9-gemedieerde en plasmidescreening.

Lentivirus-gemedieerd is een van de meest gebruikte methoden om stabiele cellijnen te construeren. Deze aanpak heeft als voordeel dat het bijna alle celtypen infecteert en genetisch materiaal integreert in het genoom van de gastheercel voor stabiele expressie gedurende een lange periode. Dit systeem heeft echter bepaalde beperkingen, en lentivirus heeft een beperkte verpakkingscapaciteit, waardoor het niet geschikt is voor de transcriptie van genen met lange transcriptieregio's.

Vergeleken met lentivirus-gemedieerde genen, kent transposon-gemedieerde genen geen beperkingen op de gengrootte, en dankzij de voortdurende optimalisatie van de technologie is de efficiëntie van transposon-insertie aanzienlijk verbeterd. Het nadeel is dat er bepaalde beperkingen gelden voor primaire cellen en cellen die moeilijk te transfecteren zijn.

CRISPR/Cas9-gemedieerd omvat crispr-genknockout en crispr-genknockin. Crispr-genknockout verwijst naar het introduceren van dubbelstrengs DNA-doorsnijding, wat resulteert in functieverlies van het doelgen. Crispr-genknockin verwijst naar de vreemde DNA-fragmenten in specifieke genen, die kunnen worden gebruikt om defecte genen te repareren of nieuwe functionele genen te introduceren.

Plasmidescreening is het meest primitieve schema voor de constructie van cellijnen. Het enige dat nodig is, is het succesvol transfecteren van het doelplasmide in de cel en het gebruiken van de bijbehorende resistentie bij langetermijnscreening. Vervolgens is er een zekere kans op het verkrijgen van stabiele cellijnen.

Methoden voor het construeren van verschillende stabiele cellijnen

Bemiddelingsmethode	Lentivirus-systeem	Transposonsysteem	CRISP/Cas9-gemedieerd	Plasmidescreening
Draagvermogen	5 kb	10 kb	5 kb	10 kb
Gemedieerde efficiëntie	Hoog	Normaal	Normaal	Laag
Tijdlijn	1-2 weken	3-4 weken	3-4 weken	4-6 weken
Voordeel	Snel en efficiënt	Veiligheid en stabiliteit	Vaste puntintegratie	Lagere kosten
Tekortkoming	Risico op bioveiligheid	Overvloed aan expressie normaal	CAS9-transductie is moeilijk en kostbaar	Lage efficiëntie en instabiliteit

Technische moeilijkheden bij de constructie van stabiele cellijnen

Voordat het proces wordt opgeschaald, wordt een kleine bioreactor gebruikt om parameters zoals gas, kweekvloeistofsysteem, minimale hydrodynamische belasting van de cellen, enz. te bepalen om een cross-scale kweek te garanderen. Echter, zelfs als de bijbehorende procesparameters zijn bepaald, zal de omgeving van grote bioreactoren in de productieomgeving ongelijkmatig zijn en is de kans op falen groot. Alpha Lifetech heeft jarenlange ervaring in het opschalen van kweekprocessen, waardoor fouten tot op zekere hoogte kunnen worden vermeden, risico's kunnen worden verminderd en het succespercentage aanzienlijk kan worden verbeterd. Tegelijkertijd garandeert Alpha Lifetech de consistentie van de gebruikte grondstoffen en mediabatches, waardoor het risico op falen bij het opschalen van celkweekprocessen wordt verminderd.

Alpha Lifetech beschikt over een uitgebreid platform voor de ontwikkeling van stabiele cellijnen om de stabiliteit van cellijnen tijdens de productie te garanderen. We kunnen u ook diensten op maat aanbieden die aan uw behoeften voldoen.

Inhoud van de stabiele cellijnenconstructieservice

Inhoud	Tijdlijn
Cultuur HEK293-cellijn door de klant geleverd.	3-5 maanden
Constructie van sgRNA-Cas9-plasmide (met screeninggen G418).
Het sgRNA-Cas9 en het reparatie-DNA-sjabloon werden samen overgebracht naar de HEK293-cellijn.
Screening van monoklonale cellijnen (GFP-gen knockin positieve kloon).
Levering: Vector, GFP-gen knock-in stam, sequentieresultaten, alle ruwe data, laboratoriumrapport

Cellen kunnen worden getraceerd

De cellen worden gekocht bij professionele organisaties zoals ATCC en kunnen bewijs leveren dat ze voldoen aan uw registratievereisten.

Productievoordeel

Alpha Lifetech heeft jarenlange ervaring om aan uiteenlopende ontwikkelingsbehoeften te voldoen. Wij beschikken over diverse cellen, een onafhankelijke opslagwerkplaats, perfect celvriezen en een opslagbeheersysteem.

project Kwaliteitscontrole

Elk project ondergaat strenge kwaliteitscontroleprocessen om ervoor te zorgen dat we cellijnen leveren die aan de hoogste normen voldoen.

Technisch voordeel

Naast ingenieurs met uitgebreide cellulaire ervaring, beschikken wij over geavanceerde technologische evolutionaire algoritmen om de reactoromstandigheden te verbeteren en procesparameters aan te passen.

Indien u vragen heeft, kunt u te allen tijde contact met ons opnemen.

Leave Your Message

Aanbevolen service

0102