Aptamer-utviklingsplattform

Aptamerer er enkelttrådete oligonukleotider (DNA, RNA eller XNA) med egenskapen høy affinitet og høy spesifisitet som spesifikt binder seg til målmolekyler som antistoffer, og de er mye brukt for utvikling av biosensorer, diagnose og behandling.

Aptamerplattformen som Alpha Lifetech tilbyr omfatter to kategorier: aptamersynteseplattform, som hovedsakelig involverer SELEX aptamerbiblioteksyntesetjeneste og aptamer (DNA, RNA eller XNA) utviklingstjeneste, og aptamerscreeningplattform som inkluderer screeningstjenester basert på SELEX-teknologi for proteiner, peptider, celler, små molekyler, metallioner og andre målmolekyler, samt nedstrøms aptameroptimalisering og identifikasjonsanalysetjenester.

Aptamer synteseplattform

SELEX aptamerbiblioteksyntesetjeneste

SELEX aptamerbiblioteksyntesetjeneste innebærer hovedsakelig å konstruere et bibliotek som inneholder et stort antall tilfeldige enkelttrådete oligonukleotidsekvenser ved in vitro kjemisk syntese i henhold til målmolekylene. Bibliotekkonstruksjon er utgangspunktet for SELEX-teknologien, som gir rikelig med kandidatsekvenser for den påfølgende screeningsprosessen ved å konstruere enorme tilfeldige biblioteker og øker muligheten for screening av aptamerer med høy affinitet.

Bibliotekssyntese er hovedsakelig delt inn i følgende trinn:

Trinn	Teknologidetaljer
Identifiser målmolekyler	Identifiser målmolekylene som må screenes for aptamerer, som kan være proteiner, nukleinsyrer, småmolekylære ioner, metallioner, etc.
Tilfeldig sekvensdesign	Tilfeldig sekvenslengde, basesammensetning og andre parametere ble utformet i henhold til egenskapene til målmolekylene og screeningskravene. Vanligvis er tilfeldige sekvenser mellom titalls og hundrevis av baser i lengde.
Syntese av faste sekvenser	Oligonukleotidfragmenter med faste sekvenser (som PCR-primersekvenser) i begge ender designes og syntetiseres, som vil bli brukt i den påfølgende amplifiserings- og screeningsprosessen.

Det syntetiserte biblioteket må fortsatt bearbeides videre for kvalitetskontroll. Konsentrasjonen av biblioteket ble bestemt for å sikre dets anvendelighet i den påfølgende screeningsprosessen. Mangfoldet og nøyaktigheten av tilfeldige sekvenser i biblioteket ble verifisert ved sekvensering og andre metoder for å sikre at bibliotekets kvalitet oppfylte screeningskravene.

Gjennom trinnene ovenfor kan et SELEX aptamerbibliotek av høy kvalitet og svært mangfoldig syntetiseres, som kan gi rikelig med kandidatsekvenser for den påfølgende screeningsprosessen.

Aptamerutviklingstjenester (DNA, RNA eller XNA)

Aptamerer refererer vanligvis til nukleinsyreaptamerer. Nukleinsyreaptamerer inkluderer DNA-aptamerer, RNA-aptamerer og XNA-aptamerer, som er kjemisk modifiserte nukleinsyreaptamerer. SELEX-teknikken er mye brukt for utvikling av aptamerer. Den grunnleggende arbeidsflyten for aptamerutviklingstjenester inkluderer bibliotekkonstruksjon, målbinding, isolering og rensing, amplifisering, flere runder med screening og sekvensidentifikasjon. I mange år har vi fokusert på bibliotekkonstruksjon og har rik erfaring med aptamerutvikling. Vi er forpliktet til å gi kundene bedre tjenester.

SELEX-teknologiprosess

SELEX-prosessen består av flere runder, som hver består av følgende hovedtrinn:

Bibliotek- og målbinding

Det konstruerte nukleinsyrebiblioteket blandes med spesifikke målmolekyler (som proteiner, småmolekylforbindelser osv.), slik at nukleinsyresekvensene i biblioteket har mulighet til å binde seg til målmolekylene.

Isolering av ubundne molekyler

Nukleinsyresekvenser som ikke er bundet til målmolekylet, separeres fra blandingen ved hjelp av spesifikke metoder som affinitetskromatografi, magnetisk kuleseparasjon, etc.

Amplifisering av bindende molekyler

Nukleinsyresekvensen som er bundet til et målmolekyl amplifiseres, vanligvis ved hjelp av polymerasekjedereaksjonsteknologi (PCR). For den påfølgende screeningsfasen vil de amplifiserte sekvensene bli brukt som startbibliotek.

Figur 1: SELEX-screeningsprosess

Aptamer-screeningsplattform

Aptamer-screeningstjeneste

Alpha Lifetech tilbyr et bredt utvalg av spesialiserte aptamer-screeningstjenester som bruker ulike SELEX-metoder for ulike typer molekyler:

Måltyper	Tekniske detaljer
Protein-aptamerscreening av SELEX	Hovedformålet med screening av protein-aptamerer er å screene aptamerer som spesifikt kan binde seg til målproteinmolekyler. Disse aptamerene er enklere å syntetisere, mer stabile og mindre utsatt for miljøfaktorer.
Peptid-aptamerscreening av SELEX	Peptid-aptamerer er en klasse korte peptidsekvenser med høy spesifisitet og affinitet, som spesifikt kan binde seg til målstoffer og viser et bredt spekter av anvendelsespotensial innen det biomedisinske feltet. Gjennom en spesifikk screeningsprosess screenes peptid-aptamerer som spesifikt kan binde seg til målmolekyler fra et stort antall tilfeldige peptidsekvensbiblioteker.
Cellespesifikk aptamerscreening (Cell-SELEX)	Målceller eller spesifikke molekyler på celleoverflaten fremstilles som mål. Målene kan være hele celler, reseptorer på cellemembranen, proteiner eller andre små molekyler.
Screening av småmolekyl-aptamerer med Capture SELEX	Capture SELEX er en in vitro-screeningsteknikk for screening av småmolekylære aptamerer, som er en variant av SELEX. Capture SELEX er spesielt godt egnet for aptamer-screening av småmolekylære mål, som vanligvis har færre funksjonelle grupper og er vanskelige å immobilisere direkte på fastfasebærere.
SELEX-tjenester basert på levende dyr	Screeningtjeneste basert på levende dyr er en eksperimentell teknikk som er mye brukt innen biovitenskap, medisin og bioteknologi, og som bruker levende dyr som eksperimentelle modeller for å screene og evaluere spesifikke molekyler, medisiner, behandlinger eller biologiske prosesser. Tjenestene er utformet for å simulere det fysiologiske miljøet i menneskekroppen for å mer nøyaktig forutsi og evaluere effekten og sikkerheten til eksperimentelle resultater i menneskekroppen.

Aptamer-optimaliseringstjeneste

Hydrofilisiteten, det høye affinitetstapet under produksjon og den raske utskillelsen av aptamerer begrenser bruken av dem. For tiden har en rekke optimaliseringsmetoder blitt utforsket for å forbedre ytelsen til aptamerer.

Vi har også en rekke måter å optimalisere aptamer på, bestående av avkorting, modifikasjoner og konjugering til riktig gruppe (tiol, karboksy, amin, fluorofor osv.).

Analyse av aptamerkarakterisering

Aptamerkarakteriseringsanalyse refererer til den profesjonelle tjenesten for ytelsesevaluering, strukturoppløsning og funksjonell verifisering av den oppnådde aptameren for å sikre at aptameren oppfyller kravene til spesifikk bindingsevne, stabilitet og spesifisitet. Den omfatter hovedsakelig affinitets- og spesifisitetsanalyse, stabilitetsevaluering og verifisering av biologisk funksjon.